朱氏盆炎汤对慢性盆腔炎大鼠IL-2、IL-6及TNF-α的影响

2015-02-20左玲,张静,胡国华

长春中医药大学学报 2015年6期

左玲，张静，胡国华*

(上海中医药大学附属市中医医院，上海 200071)

摘要：目的探讨朱氏盆炎汤对慢性盆腔炎(SPID)模型大鼠免疫方面的影响。方法采用化学烧伤造模法制备慢性盆腔炎大鼠模型，用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组大鼠血清的炎症细胞因子水平，包括白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度变化。结果朱氏盆炎汤中剂量即临床常用量对于SPID模型大鼠治疗作用显著，能有效降低大鼠血清中炎症细胞因子IL-2、IL-6、TNF-α含量。结论朱氏盆炎汤治疗慢性盆腔炎作用机制与其调节机体免疫功能相关。

关键词：慢性盆腔炎；朱氏盆炎汤; 白介素-2; 白介素-6

DOI:10.13463/j.cnki.cczyy.2015.06.005

中图分类号：R285.5文献标志码：A

文章编号：2095-6258(2015)06-1112-03

基金项目：上海市卫计委科研项目“验方盆炎汤对慢性盆腔炎大鼠细胞因子及T细胞亚群的影响”(20134Y072 )；上海市卫生三年行动计划海派基地建设项目“海派朱氏妇科流派传承研究(痛证)”(ZYSNXD-CC-HPGC-JD-008)。

作者简介：左玲(1979-)，女，硕士，主治医师，主要从事海派朱氏妇科传承研究。

收稿日期:(本栏责任编辑：张海洋2015-05-05)

*通信作者：胡国华，教授，主任医师，博士研究生导师，电话-13817813957，电子信箱-0083@szy.sh.cn

Zhushi Penyan decoction on IL-2, IL-6 and TNF- a in rats with chronic pelvic inflammatory disease

ZUO Ling, ZHANG Jing, HU Guohua*

(Shanghai Traditional Chinese Medicine Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 200071，China)

Abstract：ObjectiveThe research into the impact of immunization of Zhushi Penyan decoction to chronic pelvic inflammatory disease model of the rats. Methods Model of chronic pelvic inflammatory disease in rats by using chemical burn, Adsorption of inflammatory cytokines were measured in serum by ELISA, including IL-2 IL-6 and TNF-a concentration changes. ResultsZhushi Penyan decoction dose for the treatment of SPID rats significantly, Can effectively reduce the content of serum IL-2, IL-6, and TNF- a. ConclusionThe research results showed that Zhushi Penyan decoction for the treatment of chronic pelvic inflammatory disease mechanisms and its role in regulating the body immune function is related.

Keywords：chronic pelvic inflammatory disease; Zhushi Penyan Decoction; IL-2；IL-6

盆腔炎性疾病后遗症(sequelae of pelvic inflammatory disease，PID后遗症)即慢性盆腔炎[1],是妇科常见病、多发病之一，临床发病率有明显增高趋势。其病情复杂、病程较长，严重影响妇女的身体健康。朱氏盆炎汤是名老中医朱南孙教授(系“朱氏妇科”第三代传人)治疗慢性盆腔炎的经验方。本项目在我科长期应用朱氏盆炎汤治疗慢性盆腔炎疗效确切的基础上，观察朱氏盆炎汤对大鼠慢性盆腔炎模型的治疗作用，并从细胞免疫的角度探讨朱氏盆炎汤治疗慢性盆腔炎的作用机制。报道如下。

1材料

1.1动物清洁级 SD雌性大鼠90只，体质量 180～220 g。由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供。将90只大鼠随机分为模型组、空白组、妇科千金胶囊组、朱氏盆炎汤高、中、低剂量组，共6组，每组15只。1.2药品与试剂治疗组：朱氏盆炎汤，由上海中医药大学附属市中医医院制剂室协助监制，配成高、中、低3种剂量，按人鼠体质量比换算后给药。对照组：妇科千金胶囊，用蒸馏水溶解，按人鼠体质量比换算后，以0.22 g/kg剂量给药。试剂盒为大鼠白介素-2、白介素-6、TNF- a定量酶联检测试剂盒。苯酚胶浆剂的配制：液化苯酚5 mL、甘油4 mL(由江苏强盛功能化学股份有限公司提供)，西黄著胶1 g(由九鼎化学公司提供)，加蒸馏水至20 mL，配成浓度为25%的苯酚胶浆。

2方法

2．1慢性盆腔炎大鼠模型的建立采用化学烧伤造模法[2-4]制备慢性盆腔炎大鼠模型。用10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠(0.3 mL/100g)，待麻醉生效后，用橡皮筋牵拉四肢固定大鼠于操作台上，剃去腹毛，用络合碘消毒皮肤。无菌条件下取大鼠下腹正中切口约 0.8～1 cm，开腹后暴露并固定子宫，用4号针头在子宫分叉处小心进针，向卵巢方向缓慢注入25%苯酚胶浆0.08 mL，两侧子宫均注射，注射完毕后分层关闭腹腔，消毒术区。术后正常清洁饲养。于造模后第 7、14、30 天，每次各随机抽取3 只大鼠解剖，观察子宫肿胀、充血程度，有无宫腔积液，有无与周围组织黏连。术后 30 d肉眼观察大鼠子宫肿胀迂曲、充血，宫腔部分黏连、狭窄，内有积液，盆腔充血，内见广泛黏连，且不易分离，显微镜下见子宫内膜上皮及腺上皮细胞增生，淋巴细胞、浆细胞浸润，见少量中性粒细胞，符合盆腔炎性疾病后遗症病理改变，提示大鼠慢性盆腔炎模型成功[5-9]。2．2给药方法慢性盆腔炎造模成功后，各治疗组大鼠按人和动物间体表面积折算给药计量，其中盆炎汤煎成浓缩剂,按成人等效剂量的1/2、1、2倍分别给药，盆炎汤低剂量组按照8.9 g/kg体质量剂量灌胃，盆炎汤中剂量组按照17.8 g/kg体质量剂量灌胃，盆炎汤高剂量组按照35.6 g/kg体质量剂量灌胃。妇科千金胶囊组按照0. 22 g/kg体质量剂量灌胃。模型组、空白组给予灌服等量蒸馏水,每日灌胃量为10 mL/kg，连续给药14 d。2．3采血于给药后第15天清晨处死大鼠，打开腹腔，于大鼠主动脉处采血，用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清IL-2、IL-6、TNF-α水平。2．4肉眼观察及病理改变肉眼观察输卵管形状、色泽、粗细、弹性、有无积水、化脓及与周围组织有无黏连。分离子宫周围多余脂脉组织，肉眼观察子宫的形态改变。肉眼观察完毕，精确切取输卵管、子宫组织，置于10%的福尔马林中固定，常规切片，HE染色，光镜下观察病理改变。2．5统计学方法数据统计采用 SPSS 19.0 统计软件统计。计量资料用均数±标准差(±s)形式表示，统计方法采用单因素方差分析检验，组间比较在方差齐时采用 LSD 法，方差不齐时采用 Dennett’s T3 法。

3结果

3．1肉眼观察及病理变化肉眼观察正常组:宫腔正常，无炎性渗出，子宫内膜上皮细胞规整，腺体结构清晰，子宫壁各层分界清楚，各层血管无充血水肿，无炎细胞浸润。模型组:子宫壁组织结构紊乱，各层分界不清，腺体明显减少，子宫内膜缺失，上皮细胞变性、坏死、脱落，可见炎性细胞浸润，轻微纤维组织增生，间质充血、水肿。盆炎汤高剂量组:宫腔无炎性渗出，子宫内膜结构基本接近正常组，内膜上皮细胞形态基本恢复正常，固有层腺腔清晰可见，各层分界清楚，有少许炎性细胞浸润，无明显充血、水肿。盆炎汤中剂量组:宫腔无炎性渗出，子宫内膜结构趋向于正常，内膜上皮细胞形态部分欠清晰，腺体结构欠清晰，各层分界清楚，可见少量炎症细胞浸润，充血、水肿明显减轻。盆炎汤低剂量组:宫腔无炎性渗出，子宫内膜结构欠清晰，腺体增粗，结构模糊，子宫壁各层分界尚清楚，可见少量浆细胞、淋巴细胞浸润，充血、水肿减轻。妇科千金胶囊组:宫腔无炎性渗出，子宫内膜少许缺失，上皮细胞排列尚规整，腺体减少，子宫壁各层分界欠清楚，可见少量炎症细胞浸润，充血、水肿减轻。3．2各组大鼠血清中IL-2 、IL-6、TNF-α浓度检测结果见表1。

表1　各组炎性细胞因子比较( ± s)　ng/L

组别nIL-2IL-6TNF-α千金胶囊组 988.65±13.50#92.56±8.22# 45.44±13.25# 盆炎汤高剂量组994.09±25.50#161.83±24.52#△115.26±16.65#△盆炎汤中剂量组1081.57±13.00#69.82±13.02#△35.83±7.84# 盆炎汤低剂量组9148.72±27.58 205.42±23.68#△139.63±38.42#△模型组 10157.71±41.86 225.17±28.82 166.20±21.56 空白组 1164.75±15.60 51.67±11.97 20.73±2.93

注：与模型组比较，#P<0.05；与千金胶囊组比较，△P<0.05

4讨论

我国古代医籍中无慢性盆腔炎病名，历代医家对本病的论述散在于“少腹痛”“带下病”“癥瘕”“不孕”等疾病的论述中[10]。结合现代医学病理学变化的知识，总结出本病的病因病机为“热”“毒”“湿”“瘀”“寒”，病理性质属本虚标实。本虚以肾虚，奇经八脉亏损为主[11-12]。正是由于慢性盆腔炎性疾病后遗症发病率高及迁延难愈的特点，使中医药治疗慢性盆腔炎临床优势凸现，内治和外治相结合，体现了中医学扶正祛邪、整体观的特色。朱氏盆炎汤是全国名老中医朱南孙教授(系“朱氏妇科”第三代传人)治疗慢性盆腔炎的经验方。朱南孙教授认为，慢性盆腔炎多与湿热和血瘀有关。二者导致冲任受损，气滞血瘀，损伤肝肾，故以益肾清肝同治[13]。我科长期应用盆炎汤治疗慢性盆腔炎疗效确切。朱氏盆炎汤具有清热化瘀、疏理冲任的功效。君药红藤、紫花地丁、蒲公英清热解毒、消肿、化瘀、散结。臣药延胡索舒肝、理气、止痛、解瘀，刘寄奴破血、通经、止痛。佐使药续断、桑寄生补肝肾，强筋骨[14]。现代药理研究报道，蒲公英对葡萄球菌、链球菌有很强灭杀和抑制作用；延胡索可促使巨噬细胞数量增加及吞噬功能增加，增加细胞免疫和体液免疫；桑寄生具有提高淋巴细胞转化率和抗炎作用。全方攻补兼施，用药精简，药物性味平和。

白介素-2(IL-2)具有调节机体免疫、增加机体抗感染作用，其高低从一个侧面反映了宿主淋巴细胞活化程度，以及宿主免疫系统清除自身衰老变性细胞、自体变性和损伤细胞方面的能力。IL-6在组织炎性反应中起着炎症的诱导和传递，以及随后的组织修复和愈合期的重建[15]。TNF-α在炎症反应、免疫调节中起重要作用，过度反应产生过量时，导致剧烈的免疫反应，呈现毒性作用，对机体造成损害[16-17]。本实验结果表明，朱氏盆炎汤高剂量组、中剂量组与千金胶囊组对血清IL-2改善相近，其中盆炎汤中剂量组降低血清IL-2含量最大。血清IL-6变化比较，各组与模型组比较均有意义，组间比较均有统计学意义，说明朱氏盆炎汤与妇科千金胶囊均能降低SPID模型大鼠血清IL-6水平，其中朱氏盆炎汤中剂量组降低血清IL-6含量最大。朱氏盆炎汤及妇科千金胶囊均可减轻血清炎症细胞因子IL-2、IL-6、TNF-α含量。朱氏盆炎汤中剂量即临床常用量对于SPID模型大鼠治疗作用显著，其治疗后血清IL-2、TNF-α水平和空白组结果相近，说明该剂量对SPID模型大鼠血清IL-2、TNF-α改善显著。为朱氏盆炎汤治疗慢性盆腔炎提供了确切的实验依据，同时也证实了朱氏盆炎汤治疗慢性盆腔炎作用机制与其调节机体免疫功能相关。

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