厦门禽类标本禽流感病毒检出率的相关因素分析

苏成豪，颜玉炳，刘红莲，蒋丽娜，沈惠燕

厦门禽类标本禽流感病毒检出率的相关因素分析

苏成豪，颜玉炳，刘红莲，蒋丽娜，沈惠燕

目的 探索厦门禽类标本禽流感病毒阳性检出率的相关因素。方法 在2011年1月-2014年7月间，收集厦门市禽类外环境标本，采用荧光定量RT-PCR方法对标本进行核酸检测，分析禽流感病毒阳性检出率的相关因素。结果 593份标本中，检出禽流感阳性178份，阳性率为30%，来源于城乡活禽市场的标本高于家禽规模养殖场和家禽散养户的标本，禽类饮水、清洗禽类污水、笼具表面擦拭标本和案板表面擦拭标本阳性率较禽类粪便标本高，第一季度标本的阳性率高于其余季度的标本，标本送检及时，阳性率越高。结论 监测场所、标本种类、标本采集时间、标本送检是否及时与禽流感病毒阳性检出率相关。

外环境；禽流感病毒；阳性率；相关因素

近年来，人禽流感疫情日益受到关注，各地普遍加强了禽类外环境禽流感病原学监测工作, 通过及时分析H5N1、H7N9等禽流感病毒在外环境的分布及变异情况，为流感大流行的预警提供了依据。禽类外环境标本禽流感病毒阳性检出率受到多种因素的影响，为提高监测的准确性，进而为防控提供可靠的依据，特将本地区近几年来的监测情况进行分析，报告如下。

1 材料与方法

1.1 监测点的设置 据每年中国疾病预防控制中心《职业暴露人群血清学和环境高致病性禽流感监测方案(2011 年版)》的要求，在厦门市6个区均设立了监测点，监测场所类型包括城乡活禽市场、家禽散养户集中地、家禽规模养殖场。

1.2 监测时间 2011年1月-2014年7月间，按每年监测方案要求按月或按季度定期开展禽类外环境标本采样，每次监测提前几天了解监测点的情况，避免在监测点消毒后2 d内采样。在甲型H7N9禽流感疫情流行期间，部分月份开展了应急监测，所采集的标本也纳入分析。

1.3 标本采集及信息录入 每次采集各类标本包括笼具表面擦拭子、宰杀或摆放禽肉案板表面擦拭子、粪便、清洗禽类的污水、禽类饮用水等，填写“环境标本采样登记表”录入国家“传染病监测技术平台信息管理系统”。

1.4 标本运输、处理 要求所有标本采集后在4 ℃条件下、48 h内运送至网络实验室。实验室收到标本后应立即进行标本处理，并将标本分装为3份，1份用于核酸检测，1份留样保存，1份备送国家流感中心进行复核。留样标本要求在-70 ℃或以下保存。

1.5 实验室检测 网络实验室收到标本后1周内对标本进行流感病毒A型和B型核酸检测，A型流感病毒核酸阳性标本进一步进行H5、H7、H9、N1、N2、N7亚型检测，对2013年4月份以后采集的标本进行H7N9核酸检测。以上任何一种核酸检测结果为阳性即判定结果阳性。

1.6 统计学方法 从“传染病监测技术平台信息管理系统”中导出监测数据，建立Excel数据库，利用SAS9.1软件对数据进行统计分析，定性资料采用卡方检验或趋势卡方检验，多重比较采用卡方分割法，多因素分析用PROC GENMOD命令拟合负二项回归分析模型,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 总体监测情况分析 共收集禽类外环境标本593份，检出禽流感阳性标本178份，阳性率为30%，其中H9阳性124份(占69.7%)，H5阳性14份(占7.9%)，H7阳性3份(占1.7%)，H5和H9交叉阳性3份(占1.7%)，H7和H9交叉阳性25份(占14.0%)，未分型9份(占5.1%)。

2.2 不同地区监测结果分析 海沧、湖里、集美、思明、同安和翔安六个区的禽流感病毒阳性检出率分别为32.6%(46/141)、31.6%(30/95)、31.3%(31/99)、31.3%(40/128)、28.3%(17/60)和20.0%(14/70)，虽略有差异，但差异无统计学意义(χ2=4.16，P=0.526)。

2.3 不同监测场所监测结果分析 不同监测场所禽流感病毒阳性检出率差异有统计学意义(χ2=48.20，P<0.001)，城乡活禽市场的阳性率高达36.2%(175/483)，远大于家禽散养户集中地的5%(3/60)和家禽规模养殖场0%(0/50)，差异有统计学意义(P<0.001)，而家禽散养户集中地和家禽规模养殖场比较差异无统计学意义(P=0.249)。

2.4 不同标本类型监测结果分析 不同标本类型禽流感病毒阳性检出率差异有统计学意义(χ2=18.37，P=0.001)，粪便标本的阳性率为20.9%(54/258)，低于笼具表面擦拭标本的38.4%(58/151)、禽类饮水的35.4%(35/99)、清洗禽类的污水的34.8%(16/46)和案板表面的擦拭标本的38.5%(15/39)，差异有统计学意义(P<0.01)，其余标本的两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

2.5 不同季度监测结果分析 不同季度禽流感病毒阳性检出率差异有统计学意义(χ2=45.62，P<0.001)，其中第一季度的阳性率最高46.8%(89/190)，其次为第三季度33.7%(31/92)，而第二季度和第四季度标本的阳性率相对较低分别为19.5%(45/231)和16.3%(13/80)。两两比较显示，除第二季度和第四季度比较差异无统计学意义外(P>0.05)，其余各组两两比较差异均有统计学意义(P<0.01)。

2.6 采样至检测时间间隔与禽流感病毒阳性检出率的相关分析 标本采样、送检、检测3个环节的时间间隔越长，禽流感病毒阳性检出率越低，趋势卡方检验显示，3个变化趋势均有统计学意义(P<0.001)。

2.7 外环境禽流感阳性检出率相关因素的负二项回归分析 以上述单因素分析提到的7个变量为自变量，采用负二项回归分析的方法确定外环境禽流感阳性检出率的独立相关因素，结果见表1。监测场所、标本类型、采样时间、采样至送检时间间隔是外环境禽流感病毒阳性检出率的独立相关因素。

3 讨 论

流感病毒实验室检测最常用的方法是Real time RT-PCR[1]，它具有较高的灵敏度和特异度且操作简单、快捷，基于该检测方法从监测地区、监测场所、标本种类、采样时间及采样至检测时间间隔等方面探讨外环境禽流感病毒检出率的相关因素。此外，标本检测人员、检测试剂及仪器的一致性最大程度保证了不同批次标本的检测基础条件的可比性。

规模化养殖场与家禽散养户集中的地区的禽类外环境标本禽流感病毒阳性检出率较低，这与该类场所禽类大多在出生后即接种了禽流感疫苗，导致机体平均免疫抗体水平较高有关，而城乡活禽市场外环境标本禽流感病毒阳性检出率较高，这与王英[2]、王喜云[3]、孙晓强[4]等人的研究结果一致，主要原因与该场所动物种类和来源复杂多样，外环境消毒不到位，一些非高致病的禽流感病毒(如H7N9，H9N2)利于在狭小密集的笼具或存栏内迅速传播，导致活禽市场成为甲型流感病毒传播及重组的主要病毒库有关，这与目前人感染高致病性禽流感患者的禽类暴露来源主要是城乡活禽市场而非规模化养殖场或家禽散养户集中地是基本一致的。

表1 外环境禽流感阳性检出率相关因素的负二项回归分析Tab.1 Analysis on positive rate of avian influenza virus in external environment by Negative Binomial Regression

粪便标本的禽流感病毒阳性检出率最低，这与国内其他地区的监测结果基本一致[5-9]，这可能与禽流感病毒为呼吸道传播病毒，动物粪便标本病毒载量小，且粪便标本不利于禽流感病毒长期保存有关。禽类饮水、笼具表面擦拭标本、清洗禽类污水和案板表面擦拭标本的禽流感病毒阳性检出率相对较高，这与该类标本易于受禽类呼吸道分泌物污染有关。此外，本研究发现，粪便阳性标本中，大多为单一病毒，而检出的含有多种禽流感病毒的标本大多来自其它类型的标本，提示其它类型的标本较粪便标本更易受不同动物的交叉污染，导致阳性检出率较高。

厦门市第一季度禽类外环境标本禽流感病毒阳性检出率最高，这与本地区人感染高致病性禽流感的时间分布基本一致，提示春节前后，是该地区人感染高致病性禽流感防控的关键时间点。

根据《职业暴露人群血清学和环境高致病性禽流感监测方案(2011 年版)》要求，所有禽流感外环境标本采集后应当在48 h内运送至相应的流感监测网络实验室，保存温度为4 ℃以下；如未能48 h内送至实验室的，应当置-70 ℃或以下保存，而在厦门市各监测点均不具备-70 ℃或以下保存条件，因此导致采样至送检时间超过2 d的标本阳性检出率较低，因此保证送检的及时性是提高标本阳性检出率的一个重要举措。

综上所述，为提高禽类外环境标本禽流感病毒的阳性检出率，在满足监测方案要求的前提下，适当提高城乡活禽市场禽类饮水、笼具表面擦拭标本、清洗禽类污水和案板表面擦拭标本所占的比重，在保存条件未能改善的情况下，所有标本要在48 h内带冰送检。

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Related factors on positive rate of avian influenza virus in external environment of poultry, Xiamen, China

SU Cheng-hao,YAN Yu-bing,LIU Hong-lian,JIANG Li-na,SHEN Hui-yan

(XiamenCentreforDiseasePreventionandControl,Xiamen361021,China)

We explored related factors on positive rate of avian influenza virus in external environment of poultry in Xiamen, China. During January 2011 to July 2014, 593 samples were collected from Avian Influenza Surveillance Network in Xiamen City, and related information was recorded. Real-time RT-PCR was applied to detect the nucleic acid of avian influenza virus and related factors of positive rate of avian influenza virus were analyzed. Results showed that 178 samples of 583 were found to have avian influenza virus, the positive rate was 30%, of which samples from live birds markets in urban and rural regions were higher than those from poultry farms and scatter-feed household, the rate of poultry drinking water, poultry wastewater, wipe samples from cage surface and chopping board was higher than poultry manure; samples collected in the first quarters were higher than those collected in other quarters; the corresponding rate was increased with the timeliness between sampling and submission. It’s concluded that monitoring locations, sample type, the collection time of samples, and timeliness between sampling and submission are the related factors on positive rate of avian influenza virus.

external environment; avian influenza virus; positive rate; related factors

厦门市疾病预防控制中心，厦门 361021； Email ：1272208372@qq.com

10.3969/j.issn.1002-2694.2015.11.014

R378

A

1002-2694(2015)11-1054-04

2015-02-05；

2015-08-13