ω-3鱼油脂肪乳对环磷酰胺所致小鼠胃黏膜损伤的保护作用

何林秀，孙明立，边竞，于兆进，陈文捷，李亚楠，魏敏杰

（中国医科大学药学院药理教研室，沈阳 110122）

ω-3鱼油脂肪乳对环磷酰胺所致小鼠胃黏膜损伤的保护作用

何林秀，孙明立，边竞，于兆进，陈文捷，李亚楠，魏敏杰

（中国医科大学药学院药理教研室，沈阳 110122）

目的探讨ω-3鱼油脂肪乳对环磷酰胺导致的小鼠胃黏膜损伤的保护作用。方法45只昆明小鼠随机分为空白对照组、模型对照组和ω-3鱼油脂肪乳组，每组15只。利用环磷酰胺制备小鼠胃黏膜损伤模型。造模后，ω-3鱼油脂肪乳组小鼠尾静脉注射ω-3鱼油脂肪乳（15 mL/kg），1次/d，连续2周，其余2组注射等量的生理盐水。自造模之日起每日观察小鼠状态并记录小鼠体质量及摄食量；于给药第1天、第7天、第14天每组分别处死5只小鼠，采用HE染色法观察小鼠胃黏膜形态学变化；采用黄嘌呤氧化法检测小鼠胃黏膜组织中超氧化物歧化酶（SOD）的含量；采用紫外比色法检测小鼠胃黏膜组织中单胺氧化酶（MAO）的含量。结果与模型对照组相比，ω-3鱼油脂肪乳组小鼠的一般状况和营养状态明显改善；给药第14天，与模型对照组相比，ω-3鱼油脂肪乳组小鼠胃黏膜损伤明显改善、小鼠胃黏膜中MAO和SOD含量显著升高（P＜0.05）。结论ω-3鱼油脂肪乳对环磷酰胺所致小鼠胃黏膜损伤具有显著的保护作用，其机制可能与上调MAO和SOD水平有关。

ω-3鱼油脂肪乳；环磷酰胺；胃黏膜损伤

环磷酰胺（cyclophosphamide，CTX）是氮芥与磷酸胺基组成的化合物，其进入体内后分解产生的酰胺氮芥对肿瘤细胞具有细胞毒性作用，为最常用的烷化剂类抗肿瘤药，临床上用于多种恶性肿瘤（恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤）的治疗。CTX作为一种广泛应用的抗癌药物，其常见的不良反应有骨髓抑制、泌尿系统症状和消化系统症状等，其中消化系统症状（恶心、呕吐）严重影响患者的营养状况和生活质量。

ω-3鱼油脂肪乳富含二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid，EPA）和二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid，DHA），2者均为ω-3多不饱和脂肪酸。已有大量研究证明［1，2］，EPA和DHA在抗炎、抗血栓、降低血浆中甘油三酯水平、预防过敏性疾病、改善溃疡性结肠炎等方面发挥重要作用。但是，ω-3鱼油脂肪乳对环磷酰胺所致胃肠道损伤是否具有保护作用仍未知。本研究通过观察ω-3鱼油脂肪乳对环磷酰胺所致胃损伤小鼠一般状态、体质量、摄食量、胃黏膜组织形态学变化及胃黏膜中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和单胺氧化酶（monoamine oxidase，MAO）活性的影响，研究ω-3鱼油脂肪乳对环磷酰胺所引起的小鼠胃黏膜损伤的保护作用，并探讨其可能作用机制。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

注射用CTX（江苏恒瑞医药股份有限公司）；ω-3鱼油脂肪乳（费森尤斯卡比公司）；SOD检测试剂盒（南京建成生物工程研究所）；MAO检测试剂盒（南京建成生物工程研究所）。

1.2 主要仪器

电子称（JIELONG）；摊烤片机（金华市益迪医疗设备有限公司，YD-AB）；石蜡包埋机（沈阳市龙首电子仪器有限公司，LS-100）；半自动轮转式石蜡切片机（Thermo scientific，HM 340E）；高级研究型显微镜（尼康，80i）；组织匀浆机（MACS）；微量高速离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司，TG16-W）；数显恒温搅拌循环水箱（国华，HH-60）；紫外可见分光光度计（尤尼柯上海仪器有限公司，UV-2000）。

1.3 实验动物

清洁级健康昆明种小鼠，体质量25～30 g，雌雄各半，由中国医科大学实验动物中心提供，分开饲养，限食不限水。

1.4 分组及处理

将昆明小鼠按体质量随机分为空白对照组、模型对照组和ω-3鱼油脂肪乳组，每组15只。按120 mg/kg的剂量将注射用环磷酰胺对模型对照组和鱼油脂肪乳组小鼠进行腹腔注射，1次/d，连续2 d，同时，对空白对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水。从第3天起，ω-3鱼油脂肪乳组小鼠尾静脉注射ω-3鱼油脂肪乳（15 mL/kg），1次/d，于造模后14 d停药，空白对照组和模型对照组小鼠尾静脉注射等量生理盐水。于给药第1天、第7天、第14天每组分别处死5只小鼠，取小鼠胃组织用于后续检测。

1.5 一般状况及体质量、摄食量的动态观察

每日监测小鼠精神状况、体质量及摄食量，绘制小鼠生长曲线和摄食量曲线。

1.6 小鼠胃黏膜病理学检测

将小鼠胃组织经过固定、脱水、透明、包埋、切片、贴片、烤片后进行HE染色，光镜下观察小鼠胃黏膜病理学变化。

1.7 小鼠胃组织中SOD及MAO活性检测

采用黄嘌呤氧化法检测小鼠胃黏膜组织中SOD的活性，采用紫外比色法检测小鼠胃黏膜组织中MAO的活性，具体操作步骤见试剂盒说明书。

1.8 统计学分析

2 结果

2.1 小鼠的一般状况

空白对照组小鼠食欲如常，精神状况良好；模型对照组小鼠精神萎靡，食欲不佳；与模型对照组相比，ω-3鱼油脂肪乳组小鼠症状明显改善。

2.2 小鼠的体质量及摄食量变化

实验期间，空白对照组小鼠体质量增加不明显，模型对照组及ω-3鱼油脂肪乳组小鼠体质量先下降后上升，各时间点ω-3鱼油脂肪乳组小鼠体质量均高于同一时间模型对照组小鼠，见图1。空白对照组小鼠摄食量稳定，模型对照组及ω-3鱼油脂肪乳组小鼠摄食量先减少随后增多，并且从给药第10天开始，ω-3鱼油脂肪乳组小鼠摄食量持续高于同一时间点模型对照组小鼠，见图2。

2.3 小鼠胃黏膜病理学变化

光镜下可见空白对照组小鼠胃黏膜结构完整，腺体排列整齐，未出现典型的胃黏膜病变。给药第1天，模型对照组和ω-3鱼油脂肪乳组小鼠胃黏膜损伤严重，上皮细胞脱落明显，腺管形态消失；给药第7天，模型对照组小鼠胃腺管结构少量形成，ω-3鱼油脂肪乳组小鼠可见明显的排列疏松的腺管结构；给药第14天，模型对照组小鼠胃腺管结构排列紊乱，ω-3鱼油脂肪乳组小鼠胃黏膜结构已基本完整，仅可见部分上皮细胞脱落，见图3。

2.4 小鼠胃黏膜组织中SOD活性的变化

给药第1天、第7天、第14天分别取小鼠胃组织检测SOD活性，结果显示，与空白对照组相比，各时间模型对照组小鼠胃组织SOD活性均显著降低（P＜0.05）；与模型对照组相比，给药第1天和第7天，ω-3鱼油脂肪乳组小鼠胃组织中SOD活性无显著改变（P＞0.05）；给药第14天，ω-3鱼油脂肪乳组小鼠胃组织中SOD活性明显高于模型对照组（P＜0.05）。见图4。

图1 各处理组小鼠体质量变化曲线Fig.1 Effect of omega-3 fish oil fat emulsion on body weight

图2 各处理组小鼠摄食量变化曲线Fig.2 Effect of omega-3 fish oil fat emulsion on dietary intake

图3 各处理组小鼠胃黏膜组织病理学改变 HE染色×200Fig.3 The pathological changes of gastric mucosa HE staining×200

图4 各处理组小鼠胃组织中SOD的活性Fig.4 Effect of omega-3 fish oil fat emulsion on SOD activity

2.5 小鼠胃组织中MAO活性的变化

与空白对照组相比，各时间模型对照组小鼠胃组织检测MAO活性均显著降低（P＜0.05）；与模型对照组相比，给药第1天和第7天，ω-3鱼油脂肪乳组小鼠胃组织中MAO活性无显著改变（P＞0.05）；给药第14天，ω-3鱼油脂肪乳组小鼠胃组织中MAO活性明显高于模型对照组（P＜0.05），见图5。

图5 各处理组小鼠胃组织中MAO的活性Fig.5 Effect of omega-3 fish oil fat emulsion on MAO activity

3 讨论

ω-3鱼油脂肪乳中富含ω-3多不饱和脂肪酸，ω-3多不饱和脂肪酸是人体自身不能合成但又不可缺少的重要营养物质，已有研究［3］证明，饮食中补充ω-3多不饱和脂肪酸可以降低多种促炎介质（如IL-2、IL-6、TNF-α等）的产生，在多种炎症性疾病（如类风湿性关节炎［4］等）中发挥积极作用。另外，鱼油补充剂还能够促进短肠综合征模型大鼠的肠道代偿作用［5］、促进肠道缺血再灌注模型大鼠的肠道恢复［6］、维持胃上皮的完整性并保护胃黏膜［7］。但是，ω-3鱼油脂肪乳对化疗所致胃肠道损伤是否具有保护作用未见报道。化疗会带来胃肠道不良反应，产生消化系统症状，影响患者营养状态，因此本研究首先通过观察ω-3鱼油脂肪乳对小鼠一般状态、体质量及摄食量的影响，以初步评价ω-3鱼油脂肪乳的胃肠道保护作用，结果发现ω-3鱼油脂肪乳能改善小鼠的一般状态，改善小鼠体质量和摄食水平，提示ω-3鱼油脂肪乳可能对CTX所致的小鼠胃黏膜损伤具有一定的保护作用。为深入观察ω-3鱼油脂肪乳的保护作用，我们进一步采用HE染色法观察ω-3鱼油脂肪乳对胃黏膜病理损伤的影响，结果发现，与模型对照组相比，ω-3鱼油脂肪乳组小鼠胃黏膜损伤明显改善，以上结果提示ω-3鱼油脂肪乳对CTX所致的小鼠胃黏膜损伤具有保护作用。

5-羟色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）既是一种神经递质，广泛参与中枢神经系统的调节过程，又是一种自体活性物质，在外周组织中发挥重要功能。研究表明，化疗引起的5-HT释放能够兴奋黏膜迷走传入纤维，从而发生恶心、呕吐。MAO作为催化单胺氧化脱氨的酶，是催化降解5-HT的重要酶类。近来研究表明［8］，抗肿瘤药物对MAO的活性具有很强的抑制作用，如果其活性降低则5-HT的降解速度降低，使患者产生胃肠道不良反应。故为探讨ω-3鱼油脂肪乳胃黏膜损伤的保护机制，我们研究了ω-3鱼油脂肪乳对小鼠胃组织中MAO活性的影响，结果发现ω-3鱼油脂肪乳可显著增加小鼠胃组织中MAO活性，提示ω-3鱼油脂肪乳对CTX所致小鼠胃黏膜损伤的保护作用可能与上调MAO水平有关。

SOD广泛分布于各种生物体内，是体内清除氧自由基的重要抗氧化金属酶，在机体氧化与抗氧化平衡中起到至关重要的作用。化疗药物引起胃肠道黏膜损伤的机制之一就是能够引起自由基生成增加。因此，为进一步探讨ω-3鱼油脂肪乳的胃肠道保护机制，本研究探讨了ω-3鱼油脂肪乳对小鼠胃组织中SOD活性的影响，结果发现ω-3鱼油脂肪乳可显著增加小鼠胃组织中SOD活性，提示ω-3鱼油脂肪乳对CTX所致小鼠胃黏膜损伤的保护作用可能与上调SOD水平有关。

总之，本研究结果显示，ω-3鱼油脂肪乳对CTX所致小鼠胃黏膜损伤具有显著的保护作用，其机制可能与上调MAO和SOD水平有关。

［1］HS W.Overview of prescription omega-3 fatty acid products for hypertriglyceridemia［J］.Postgraduate Med，2014，126（7）：7-18.

［2］Miyata J，Arita M.Role of omega-3 fish oil fat emulsion and their metabolites in asthma and allergic diseases.［J］.Allergol Inter，2015，64（1）：27-34.

［3］孔万权，王征，夏轶姿，等.ω-3多不饱和脂肪酸对急性呼吸窘迫综合征患者血清炎症介质的影响［J］.中华危重症医学杂志（电子版），2012，5（1）：11-14.

［4］Leeb BF，Sautner J，Andel I，et al.Intravenous application of omega-3 fish oil fat emulsion in patients with active rheumatoid arthritis. The ORA-1 trial.An open pilot study［J］.Lipids，2006，41（1）：29-34.

［5］Sukhotnik I，Shany A，Bashenko Y，et al.Parenteral but not enteral omega-3 fish oil fat emulsion（Omegaven）modulate intestinal regrowth after massive small bowel resection in rats［J］.JPEN J Parenter Enteral Nutr，2010，34（5）：503-512.

［6］Igor S，Nadav S，Yulia P，et al.Parenteral omega-3 fatty acids（Omegaven）modulate intestinal recovery after intestinal ischemia-reperfusion in a rat model［J］.J Pedia Surg，2011，46（7）：1353-1360.

［7］Yu JH，Kang S，Jung U，et al.Effects of omega-3 fish oil fat emulsion on apoptosis of human gastric epithelial cells exposed to silicaimmobilized glucose oxidase［J］.Ann N Y Acad Sci，2009，1171（6）：359-364.

［8］鞠传霞，岳旺，孙福生，等.塞来昔布抑制顺铂致大鼠迟发性呕吐的作用及机制研究［J］.中国药房，2009，28：2174-2176.

（编辑 武玉欣）

Protective Effect of Omega-3 Fish Oil Fat Emulsion on Cyclophosphamide-induced Gastric Mucosal Injury in Mice

HE Lin-xiu，SUNMing-li，BIANJing，YU Zhao-jin，CHEN Wen-jie，LIYa-nan，WEIMin-jie

（Department of Pharmacology，School of Pharmacy，China Medical University，Shenyang 110122，China）

ObjectiveTo investigate the protective effect of omega-3 fish oil fat emulsion on cyclophosphamide-induced gastric mucosal injury in mice.MethodsForty-five Kunming mice were randomly divided into three groups as control，model，and omega-3 fish oil fat emulsion group（with 15 mice in each group）.Mice of the two experiment groups were administrated with cyclophosphamide i.p.for 2 days to establish the damage model. Then mice in omega-3 fish oil fat emulsion group received omega-3 fish oil fat emulsion at a dose of 15 mL/kg daily for 14 days.Meanwhile，the animals in control group and model group were intravenously administered with the same volume of saline.The weight and food intake of the mice in each group were assessed daily.Five mice in each group were respectively sacrificed at day 1，day 7，day 14 after intravenous injection.Morphology of gastric mucosa was observed by HE staining and the activities of SOD and MAO in gastric mucosa were measured respectively by xanthine oxidation and ultraviolet spectrophotometry methods.ResultsCompared with the model group，the general status，nutritional status and the injury in stomach mucosa in omega-3 fish oil fat emulsion group were significantly improved.After 14 day′s treatment，the activities of SOD and MAO in gastric mucosa of mice in omega-3 fish oil fat emulsion group were significantly increased（P＜0.05）compared with model group.Conclusionomega-3 fish oil fat emulsion has a significant protective effect on the cyclophosphamide induced injury in gastric mucosa of mice，which may be related to the upregulation of MAO and SOD.

omega-3 fish oil fat emulsion；cyclophosphamide；gastric mucosal lesion

R965.1

A

0258-4646（2015）12-1090-04

辽宁省高校创新团队支持计划（LT2014016）

何林秀（1992-），女，硕士研究生.

魏敏杰，E-mail：weiminjiecmu@163.com

2015-05-17

网络出版时间：