DXI800化学发光仪测定cTnI出现假阳性结果的分析和处理

徐志康，陈李菲，朱惠君，张 轩，张美婷，温 虹，赖淑芳，鲁淑琴

DXI800化学发光仪测定cTnI出现假阳性结果的分析和处理

徐志康，陈李菲，朱惠君，张 轩，张美婷，温 虹，赖淑芳，鲁淑琴

目的：分析和处理15例DXI800全自动化学发光分析仪检测的肌钙蛋白I（cTnI）假阳性结果，以降低假阳性率，提高检验结果的准确性。方法：用DXI800全自动化学发光分析仪进行cTnI测定，对结果≥0.1 ng/mL的标本进行复查。结果：共检测10 529人次的cTnI，结果异常（＞0.04 ng/mL）1 137人次，其中766人次结果≥0.1 ng/mL。对≥0.1 ng/mL的结果进行复查，复查后出现15例为0.01 ng/mL（原结果为0.31～2.52 ng/mL）。在排除仪器、试剂、室内质控原因后确定为假阳性。结论：标本前处理环节非常重要，分离的血清标本是否合格都有可能引起结果出现偏差，造成假阳性或假阴性结果，应严格按检验前处理要求进行标本处理。

肌钙蛋白I；假阳性；DXI800化学发光仪

0 引言

目前，心肌肌钙蛋白（cTn）已成为诊断急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）的首要标志物，也是独立于心电图之外可用于判断梗死灶范围大小及预后的重要血清学指标[1]。cTnI为心肌细胞所特有，具有高度特异性，无论何种原因引起的心肌细胞损伤都会引起其不同程度的升高。cTnI在心肌梗死的诊断中非常重要，一旦忽略了cTnI假阳性结果就会给临床造成重大误诊，引起不必要的医疗纠纷。因此，我科管理制度规定，若遇到阳性标本需重新复检，结果一致后方可发出报告，以降低假阳性率，提高检验结果的准确性。2013年1月至2013年6月，DXI800全自动化学发光分析仪出现15例与临床严重不符的cTnI假阳性结果，经分析和处理后发出阴性报告。现报道如下。

1 材料和方法

1.1 一般资料

2013年1月至2013年6月到我院就诊并进行cTnI检测的门诊和住院患者10 529人次，cTnI参考范围为0.01～0.04 ng/mL。我科管理制度规定，当cTnI结果≥0.1 ng/mL时需对标本进行复查，并需在报告单备注栏中注明“结果已复查”，并电话告之主诊医生才能发出报告。

1.2 仪器与试剂

美国BECKMAN COULTER DXI800全自动化学发光分析仪及其配套的cTnI试剂和定标液，试剂及定标液均在有效期内；采血管为美国BD公司生产的生化检验专用真空采血促凝管（黄盖）。

1.3 方法

用真空采血促凝管采集患者血清3 mL，以转速3 000 r/min离心5 min分离血清后，在1 h内上机进行cTnI检测，上机操作严格按仪器操作说明书进行。当cTnI检测值＞0.1 ng/mL时需重新上机检测。DXI800全自动化学发光仪检测cTnI采用双位点酶免法（夹心法），将样品与结合了碱性磷酸酶的抗cTnI单抗以及包被了抗cTnI单抗的顺磁性微粒添加到反应管中进行孵育并反应，结合到固相的物质将置于一个磁场内被吸住，未结合的物质则被冲洗除去，将化学发光底物添加到反应管中，由发光检测仪进行检测，反应产生的光子与样本中cTnI的浓度成正比。

1.4 统计学方法

运用南方惠桥检验信息系统的数据分析功能，按所需统计条件对cTnI项目进行统计。

2 结果与处理

2.1 检测结果

共检测10 529人次血液标本，cTnI结果异常（＞0.04 ng/mL）有1 137人次，其中包含766人次结果≥0.1 ng/mL。对上述766人次标本复查后发现，有15人次（原结果为0.31～2.52 ng/mL）复查结果为0.00或0.01 ng/mL，与初检结果不一致。吸取上述血清标本重新离心后再次复查，结果仍为0.00或0.01ng/mL。经查，病史、临床表现、心肌酶谱、心电图结果等均不支持存在心肌梗死和其他心脏病变的可能，因此确定为假阳性。检查仪器、试剂、室内质控均在良好状态，排查发现，其中8份标本血清中有微小的促凝胶微粒或纤维丝悬浮，2份存在微溶血现象，另5份标本状态未见异常，考虑应为标本状态不合格所致。

2.2 仪器工程师排查

当连续出现假阳性结果后，及时把情况反馈给仪器工程师，工程师对仪器进行全面维护保养：检查冲洗模块，清洁冲洗转盘，清洁样品针，更换排废泵管，进行系统检测等。经检查发现，样品针内壁有分离胶黏附，这可能是由于血液样品离心效果不好，血清中含有少量促凝胶微粒悬浮所致。

2.3 与抽血组和标本处理组沟通

与抽血组护士进行沟通，要求抽血后先轻轻颠倒试管4～5次（以确保促凝剂作用），然后竖着插放于试管架上，不能倒放于标本篮中（防止纤维蛋白黏附在管壁上）。与标本处理组工作人员沟通，在收取血液标本后需放置37℃恒温水浴箱至少20 min待血块完全凝固后才能离心，离心转速和时间由原来的3 000 r/min、5 min改为3 500 r/min、6～10 min；若有溶血、脂血标本，需退回标本后重新抽血送检。经过一段时间观察后，促凝管血清分离效果满意，很少再出现cTnI假阳性结果。

3 讨论

3.1 cTnI在心肌疾病中的诊断意义

cTn是心肌和横纹肌的收缩调节蛋白，由3个亚基即TnC、TnI、TnT组成。心肌中主要有cTnI和cTnT 2种亚型，其灵敏度高、特异性强，发病后持续时间长，是目前心肌损伤较好的确定指标，相比之下，cTnI较cTnT心肌特异性更强[2]。2007年10月，欧洲心脏病学会、美国心脏病学会、美国心脏病协会、世界心脏联盟4个心脏病学团体对心肌梗死进行重新定义并达成共识。在新定义中，肌钙蛋白、患者病史及心电图的变化仍然是诊断心肌梗死的金标准。新定义特别强调肌钙蛋白是“优先”选用的生物标记物，如果患者有心肌梗死或急性冠脉综合征的临床表现，同时伴有肌钙蛋白升高，那么根据这2个条件就足以诊断心肌梗死。同时新定义规定，即使无心电图改变，如肌钙蛋白浓度升高达到特定阈值，仍可诊断为心肌梗死[3]，可见肌钙蛋白可独立于心电图之外用于心肌梗死的诊断。cTnI的轻度升高（临界值）需引起临床的关注，因为轻微升高表明心脏存在早期心肌受损或坏死、微小心肌梗死的发生，对临床医师及时治疗和干预具有重要指导意义。

3.2 cTnI检测的影响因素

血清中的类风湿因子（rheumatoid factor，RF）能干扰抗原抗体反应过程的许多免疫学检测方法，引起cTnI测定结果的假性增高，且影响程度不与RF的浓度呈正比[1]。另外，血液标本离心制备不彻底，在检测时残存的纤维蛋白往往会引起假阳性的结果[1]。另外，红细胞破坏后产生的血红蛋白、细胞碎片和蛋白质等溶血产物由于cTnI检测方法不同，也会对检测结果有正向或负向的干扰。

3.3 离心时间和转速对结果的影响

离心速度慢、时间过短会引起分离胶隔离层与血清、血块之间分离不完全，造成血细胞或纤维蛋白丝悬浮，容易引起堵针或吸到小凝块；离心速度过快、时间过长往往又造成细胞破碎或溶血，从而影响检验结果。因此生化、免疫标本离心速度以3 500～4 000 r/min、时间6～10 min为宜。在夏天，抽取血标本后至少室温放置20 min，待血块完全凝固后以3 500 r/min离心6 min；在冬天，由于气温较低，抽取血标本后最好放于37℃水浴箱20 min，待血块完全凝固后以3 500 r/min离心10 min或4 000 r/min离心6 min，这样才能保证更好地分离血清。另外，标本离心最好一次完成，离心时的急停也会影响细胞层的形成，导致那些应该被隔离的细胞漂浮到血清中，干扰正常的测定。

3.4 真空采血促凝管的离心操作及注意事项

真空采血促凝管由于添加了分离胶、促凝剂，缩短了血液凝固时间，在经过一定离心力和离心时间离心后，形成管底部血块、分离胶、血清3层，从而得到高品质的血清标本。真空采血促凝管正确操作步骤为：采血后应立即轻轻颠倒试管4～5次充分混匀血标本，然后竖着插放于试管架上，放置至少20 min待血块完全凝固后再分离血清。我们发现，我科抽血室个别护士抽取血标本后，并没有及时地颠倒试管4～5次混匀血标本，且把试管随意丢放在标本篮中，这样容易导致血液从流动状态变成凝固状态时，纤维蛋白黏附在试管壁上，如果离心不完全时会混杂到血清中。另外，没有等血液完全凝固就进行离心，分离胶返转性不好，出现分离胶隔层和血清、血块之间分离不完全，使纤维蛋白或微小凝块混杂在隔离层上[4]，这些残存的纤维蛋白很有可能会造成非特异性反应的抗体捆绑在样本中，均有可能引起假阳性的结果。当离心效果不佳时，漂浮在血清里面的细小分离胶粒可能污染仪器的样本针和反应杯，也可对免疫学反应产生物理干扰[5]，影响检测结果准确性。以上这些结果均可能为一过性，不可重现。对于开始检测异常经复查后结果正常的标本，应用移液器吸取全部血清于新试管中重新离心后再进行检测，不能直接倾倒原管血清上机检测，因为在促凝胶上层会有一些细胞碎片和一些大血小板，直接倾倒会把上述细胞碎片混在血清中，从而造成检验结果异常。

3.5 加强抽血组和标本处理组工作人员的培训

ISO 15189：2003《医学实验室——质量和能力的专用要求》把标本检验过程分成检验前、检验和检验后3个阶段[6]，3个阶段相辅相成，具有同等的重要性，忽略任何一个阶段均会导致检测结果的偏差。检验前质量保证既是检验质量保证系统中的重要环节，又是最易忽视的环节，很多检验前因素可严重影响检验结果的正确性，且这些因素很难在实验中校正[7]。临床实验室所做出的错误结果约有84%是因为检验前因素造成的，其中检验前样本处理不当或错误占65%（可参考贝克曼库尔特公司的DXI800全自动化学发光仪技术操作与故障排除高级培训班资料）。随着检验技术的发展，很多检验科都配备了专门的抽血护士和标本处理技术人员，由于其为非检验专业人员，对检验前质量保证因素责任心不强，因此必须加强对抽血护士和标本处理技术人员的培训，减少因检验前处理不规范而引起的错误结果。

4 结论

我们没有办法完全消除检验前错误，但可以尽量减少因为检验前标本处理不当而引起的错误结果。当出现错误结果时，不仅要思考究竟是检验中出现的问题还是检验前出现的问题，而且要从整个检验流程中寻找问题的所在，对出现的问题及时做出纠正措施并整改，定期进行自查，这样才能保证不再出现或少出现错误，保证检验结果的准确性。

[1] 范华杰，沈茜.血清/血浆心肌肌钙蛋白定量测定的影响因素[J].检验医学，2007，22（6）：745-748.

[2] 曹国良，乔水芳.心肌损伤标记物与急性心肌梗死[J].实用诊断与治疗杂志，2003，17（5）：374-375.

[3] 王如兴，李肖蓉.心肌梗死的通用定义[J].中华急诊医学杂志，2009，18（7）：777.

[4] 王永安，吉本秋雄，廖富荣，等.血清（或血浆）分离胶采血管的理论基础及临床应用[J].国际检验医学杂志，2007，28（9）：864-866.

[5] 赵立飞，徐建华，解传芬，等.临床应用分离胶采血管需注意的问题[J].临床检验杂志，2012，30（7）：543-545.

[6] 中国实验室国家认可委员会技术委员会医学分委会.医学实验室质量管理与认可指南[M].北京：中国计量出版社，2004：63-80.

[7] 陈仕林，程子敏.检验质量中不容忽视的分析前因素[J].检验医学与临床，2005，2（1）：32-33.

（收稿：2014-03-25 修回：2014-11-03）

（栏目责任编校：李惠萍 傅 雳）

Analysis and treatment on false positive result of cTnI detection by DXI800 Chemiluminescence Apparatus

XU Zhi-kang,CHEN Li-fei,ZHU Hui-jun,ZHANG Xuan,ZHANG Mei-ting,WEN Hong,LAI Shu-fang,LU Shu-qin
（Department of Clinical Laboratory,Shenzhen Shajing Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University,Shenzhen 518104,Guangdong Province,China）

ObjectiveTo analyze and treat the 15 false positive results of cTnI detection by DXI800 Chemiluminescence Apparatus.MethodscTnI detection was performed with DXI800 Chemiluminescence Apparatus,and the specimens with the results not less than 0.1 ng/mL were rechecked.ResultsAmong 10 529 cTnI results,there were 1 137 abnormal ones (>0.04 ng/mL)which included 766 ones not less than 0.1 ng/mL.Recheck showed that there were 15 results of 0.01 ng/mL, with the original results between 0.31 and 2.52 ng/mL.Then 15 false positive results were found after the factors of instrument,reagent and indoor quality control excluded.ConclusionImproper pretreatment may cause false positive or negative results,and thus the specimen has to be pretreated according to the requirements.[Chinese Medical Equipment Journal，2015，36（4）：86-88]

cTnI;false positive;DXI800 Chemiluminescence Apparatus

R318.6；R446.1

A

1003-8868（2015）04-0086-03

10.7687/J.ISSN1003-8868.2015.04.086

徐志康（1975—），男，副主任技师，主要从事免疫学和内分泌方面的研究工作，E-mail：438894521@qq.com。

518104，广东深圳，广州医科大学附属深圳沙井医院检验科（徐志康，陈李菲，朱惠君，张 轩，张美婷，温 虹，赖淑芳，鲁淑琴）