DC-CIK细胞联合中药治疗晚期非小细胞肺癌的研究

邓新娜，吴海江，高 飞，范晓燕，赵 静，闫永龙，杨 涛，蔡建辉

(1. 河北省人民医院，河北 石家庄 050051；2. 河北医科大学，河北 石家庄 050017)

DC-CIK细胞联合中药治疗晚期非小细胞肺癌的研究

邓新娜1，吴海江2，高 飞1，范晓燕1，赵 静1，闫永龙1，杨 涛1，蔡建辉1

(1. 河北省人民医院，河北 石家庄 050051；2. 河北医科大学，河北 石家庄 050017)

目的探讨DC-CIK细胞联合康莱特注射液治疗对晚期非小细胞肺癌患者免疫功能及生活质量的影响。方法将50例晚期非小细胞肺癌患者随机分为2组，对照组22例给予单纯对症支持治疗，治疗组28例在对照组治疗基础上给予DC-CIK细胞联合康莱特注射液治疗。采用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群的数量和比例，采用RECIST实体瘤疗效评价标准评估治疗效果，采用Karnofsky评分标准和体质量评价评估生存质量改善情况。结果对照组治疗前后外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和CD4+CD25+Treg比较差异均无统计学意义(P均>0.05)；治疗组治疗后外周血T淋巴细胞CD3+、CD4+及CD4+CD25+Treg均较治疗前及对照组明显改善(P均<0.05)，CD4+/CD8+、CD8+与治疗前及对照组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。2组治疗有效率及疾病控制率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。治疗组KPS评分、体质量改善情况均明显优于对照组(P均<0.05)。治疗组中有10例出现发热症状，对症处理后恢复正常，无其他不良反应。结论DC-CIK细胞联合康莱特注射液治疗能够明显改善晚期非小细胞肺癌患者的免疫功能及生存质量。

树突状细胞；DC-CIK细胞；康莱特注射液；晚期非小细胞肺癌

非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer, NSCLC)是最常见的恶性肿瘤之一,约占肺癌发病总数的80%，其发生率逐年升高[1]。尽管治疗方法不断改进，但晚期NSCLC患者经过手术、多程化疗、放疗等治疗后常出现不良反应和药物耐受，加之患者体质状况一般较差,治疗效果多不理想。近年来，树突状细胞(dendritic cell,DC)联合细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)疗法已经逐渐被应用到肿瘤治疗领域。DC是能力最强的抗原提呈细胞(APC)，成熟的DC能够摄取、加工、提呈抗原，激活并活化T细胞，进而启动抗原特异性免疫应答。在肿瘤治疗方面，DC能够有效抵制肿瘤细胞的免疫逃逸。CIK细胞是一类体外增殖能力较强的广谱抗瘤免疫活性细胞，将其和DC共培养能够显著提高其细胞毒活性，具有更广的杀瘤谱和更高的杀瘤活性[2]。2011年7月—2014年5月，河北省人民医院应用DC-CIK细胞联合康莱特注射液治疗晚期非小细胞肺癌患者28例，疗效较好，现报道如下。

1 临床资料

1.1一般资料 选择上述时期入住河北省人民医院的Ⅲ～Ⅳ期非小细胞肺癌患者50例，均为不能手术、不能耐受或拒绝放化疗的晚期者，经病理学检查确诊，预计生存期≥3 个月，KPS评分≥60 分；血常规、肝肾功能和心电图基本正常。将50例患者随机分为2组：对照组22例，男13例，女9例；平均年龄64岁; 腺癌14例，鳞癌7例，其他1例。治疗组28例，男18例，女10例；平均年龄64岁; 腺癌18例，鳞癌8例，其他2例。2组性别、年龄、病理分型比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。治疗组患者均签署细胞免疫治疗知情同意书。

1.2治疗方案 对照组采用最佳对症支持治疗，治疗期间不给予提高免疫力药物治疗。治疗组在对症支持治疗的基础上联合应用DC-CIK细胞与康莱特注射液治疗：患者经骨髓动员使外周血白细胞≥8.0×109L-1后，采用COBE Spectra血液成分分离机(购自美国Gambro BCT公司)循环采集外周血单个核细胞，采血后给予康莱特注射液200 mL静点，1次/d，连用2周；根据细胞培养情况于单采后第11—12天开始给予细胞回输， 2次/d，每次回输细胞数均在1×109个以上，回输前30 min给予抗过敏药物，每周期连输3 d，每30 d为1个周期，共治疗2个周期。

1.3DC-CIK细胞的培养和扩增方法 于实验室采用密度梯度离心法纯化分离机采外周血单个核细胞，取1 mL送流式术检测细胞亚群(流式细胞仪及T淋巴细胞亚群检测所需荧光抗体均购自美国Beckman Coulter公司，Ficoll淋巴细胞分离液购自美国Sigma公司)，其余置于培养瓶中37 ℃培养2 h，贴壁细胞为DC，悬浮细胞为淋巴细胞。DC的培养：将悬浮细胞移出，将贴壁细胞以1×109L-1接种于6孔板中，使用含1 000 IU/mL的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和1 000 IU/mL的白细胞介-4(IL-4)及10%胎牛血清的RPMI-1640培养基培养细胞，培养条件为5%CO2、37 ℃，第3天换液1次，第6天加入相关细胞因子的同时加入肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导DC成熟。CIK细胞的培养: 将上述悬浮细胞接种于培养瓶中，使用含1 000 IU/mL的IFN-γ及10%胎牛血清的RPMI-1640培养基培养细胞，培养条件为5%CO2、37 ℃，第2天加入含25 ng/mL CD3单克隆抗体、300 IU/mL IL-2及10%胎牛血清的RPMI-1640培养基，每2～3 d换液1次。DC-CIK共培养: 将培养7 d的DC和CIK细胞按照1∶10比例混合，在含300 IU/mL IL-2及10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中培养，每2 d换液1次，共培养4～5 d。

1.4观察项目 ①观察2组治疗前和治疗后细胞亚群及细胞因子水平变化情况。分别于患者进行首次治疗前和第2周期治疗结束后1周采血送检，除了常规检测肝肾功能、血常规外，采用流式细胞仪检测淋巴细胞免疫分型(T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+Treg、CD4+/CD8+)。②观察2组临床疗效及生存质量、体质量改善情况及不良反应发生情况。

1.5临床疗效评价标准 根据RECIST实体瘤疗效评价标准分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、病情稳定(SD)、疾病进展(PD)。以(CR+PR)/n×100%为治疗有效率(RR)，以(CR+PR+SD)/n×100%为疾病控制率(DCR)。

1.6生存质量和体质量评价标准 生存质量评价标准以Karnofsky评分为依据: 治疗后评分增加≥10分为改善，下降≥10分为下降，变化幅度在10分以内为稳定。体质量评价：与治疗前相比，治疗后体质量增加1 kg以上为增加，变化幅度≤1 kg为稳定，减少1 kg以上为下降。

1.7统计学方法 采用SPSS 18.0 统计软件进行数据分析，计数资料比较采用2检验，计量资料比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1治疗前后外周血T淋巴细胞亚群测定结果比较 对照组治疗前后外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和CD4+CD25+Treg比较差异均无统计学意义(P均>0.05)；治疗组治疗后外周血T淋巴细胞CD3+、CD4+及CD4+CD25+Treg均较治疗前及对照组明显改善(P均<0.05)，CD4+/CD8+、CD8+与治疗前及对照组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。见表1。

表1 2组治疗前后外周血T淋巴细胞亚群测定结果比较

注：①与治疗前比较，P<0.05；②与对照组比较，P<0.05。

2.2临床疗效比较 2组治疗有效率及疾病控制率比较差异无统计学意义(P均>0.05)。见表2。

表2 2组临床疗效比较 例(%)

2.3生存质量比较 治疗组治疗后KPS评分提高16例，稳定10例，下降2例；体质量提高13例，稳定11例，下降4例。对照组治疗后KPS评分提高6例，稳定8例，下降8例；体质量提高3例，稳定11例，下降8例。治疗组KPS评分及体质量改善情况均明显优于对照组(P均<0.05)。

2.4不良反应发生情况 治疗组患者在回输DC-CIK细胞过程中，有10例出现发热，体温最高38.5 ℃，给予对症处理后降至正常。患者均未出现胸闷气短、呼吸困难、肝肾功能损害及骨髓抑制等不良反应，血常规、肝肾功能等未见明显异常。

3 讨 论

近年来，我国肺癌的发病率和病死率均呈现逐年上升趋势。有报道显示，我国2012年肺癌新发病例和死亡病例分别为65万和59万，分别占全世界总数的35.8%和1/3[3]。非小细胞肺癌是最常见的肺癌类型，但由于发病机制复杂、老年患者缺乏特异性症状及体征等原因，很多患者发展到中晚期才被发现，由于体质状况下降，多不能耐受放化疗治疗，治疗效果多不理想。故如何提高疗效、改善患者生存质量、减轻不良反应具有重要意义。

DC-CIK细胞治疗是一种比较成熟的生物免疫疗法，已在我国多家医院进入临床应用阶段，并取得了较好效果[2]。DC和CIK细胞是生物免疫治疗的2个组成部分：DC是人体内功能最为强大的专职APC，该细胞具有识别病原、激活获得性免疫系统的能力；CIK细胞是将人外周血单核细胞在体外培养后获得的一群对肿瘤细胞有高度杀伤能力的异质细胞，该细胞通过发挥自身细胞毒性与分泌细胞因子杀伤肿瘤细胞。DC和CIK细胞共同培养后，细胞增殖能力、成熟速度均明显上升，CIK细胞的杀伤活性和抗肿瘤效应均显著增强[4]。此外，这两种细胞均来源于患者自体细胞，细胞回输不会引发排斥反应，没有明显毒副作用，比放化疗更为安全可靠。目前，DC-CIK细胞疗法主要用于肺癌特别是非小细胞肺癌患者的治疗。最新的研究发现，DC-CIK细胞治疗能够明显改善晚期非小细胞肺癌患者的1年总生存率、无进展生存期和疾病控制率，同时能够提高患者的生存质量，减少不良反应[5]。

中医药治疗疾病在我国具有悠久的历史和丰富的临床积累，特别是在肿瘤综合治疗方面的作用已经被临床实践和基础实验研究所证实。中医学理论认为，肺癌是在人体正气亏虚的前提下，气、血、津液运行变化失常和邪气损害所致[6]。康莱特注射液是浙江中医药大学自行研发的天然抗癌中药，主要成分为薏苡仁油，目前已经获得美国FDA认可进入三期临床验证阶段。该药物具有益气养阴、消癥散结功效，对中晚期肿瘤患者还具有一定的抗恶病质和止痛作用。临床研究表明，与单纯化疗相比，康莱特注射液联合化疗能够明显改善晚期非小细胞肺癌患者近期疗效和体力状况，并且减少患者胃肠道反应的发生[7]。实验研究表明，康莱特注射液能够明显抑制肺癌C57BL/6小鼠模型的肿瘤生长，并提高其免疫力，该作用可能与调控NF-кB/IkкB表达以及IL-2、EGFR等细胞因子有关[8]。

本研究结果显示，DC-CIK细胞联合康莱特注射液治疗能够明显提高非小细胞肺癌患者外周血T淋巴细胞CD3+、CD4+，降低CD4+CD25+Treg。外周血T淋巴细胞CD3+、CD4+是机体特异性细胞免疫功能指标，而CD4+CD25+Treg亚群对抗肿瘤免疫细胞具有抑制作用[9]。由此可见，DC-CIK细胞联合康莱特注射液治疗能够明显改善晚期非小细胞肺癌患者细胞免疫状态，提高机体免疫力，有利于抑制肿瘤生长和改善患者生存质量。此外，本研究结果还显示，治疗组的有效率及疾病控制率有优于对照组的趋势，KPS评分、体质量改善情况均明显优于对照组，而且具有很好的安全性。说明DC-CIK细胞联合康莱特注射液治疗能够抑制疾病发展、缓解症状、提高患者的生活质量，具有很好的临床疗效。

综上所述，DC-CIK细胞联合康莱特注射液治疗能够明显提高晚期非小细胞肺癌患者的免疫功能，抑制疾病发展，改善临床症状和生存质量，且不良反应小，值得临床推广应用。但还需要进一步扩大样本量和延长随访时间，从而明确此疗法的远期疗效。

[1] Ofuji K,Tada Y,Yoshikawa T,et al. A peptide antigen derived from EGF T790M is immunogenic in non-small cell lung cancer[J]. Int J Oncol,2015,46(2):497-504

[2] Chen R,Deng X,Wu H,et al. Combined immunotherapy with dendritic cells and cytokine-induced killer cells for malignant tumors:a systematic review and meta-analysis[J]. Int Immunopharmacol,2014,22(2):451-464

[3] Shi Y,Sun Y. Medical management of lung cancer:Experience in China[J]. Thorac Cancer,2015,6(1):10-16

[4] Zhao P,Bu X,Wei X,et al. Dendritic cell immunotherapy combined with cytokine-induced killer cells promotes skewing toward Th2 cytokine profile in patients with metastatic non-small cell lung cancer[J]. Int Immunopharmacol,2015,25(2):450-456

[5] Han RX,Liu X,Pan P,et al. Effectiveness and safety of chemotherapy combined with dendritic cells co-cultured with cytokine-induced killer cells in the treatment of advanced non-small-cell lung cancer: a systematic review and meta-analysis[J]. PLoS One,2014,9(9):e108958

[6] 胡正国,庞德湘. 中医治疗肺癌的研究进展[J]. 广西中医药大学学报,2015,18(2):84-86

[7] Liu X,Yang Q,Xi Y,et al. Kanglaite injection combined withchemotherapy versus chemotherapy alone in the treatment of advanced non-small cell lung carcinoma[J]. J Cancer Res Ther,2014,10(Suppl 1):46-51[8] Pan PL,Wu Y,Guo ZY,et al. Antitumor activity and immunomodulatory effects of the intraperitoneal administration of Kanglaite in vivo in Lewis lung carcinoma[J]. J Ethnopharmacol,2012,143(2):680-685

[9] Ai YQ,Cai K,Hu JH,et al. The clinical effects of dendritic cell vaccines combined with cytokine-induced killer cells intraperitoneal injected on patients with malignant ascites[J]. Int J Clin Exp Med,2014,7(11):4272-4281

Study on DC-CIK cells combined with Kanglaite injection in treatment of advanced non-small-cell lung cancer

DENG Xinna1, WU Haijiang2, GAO Fei1, FAN Xiaoyan1, ZHAO Jing1, YAN Yonglong1, YANG Tao1, CAI Jianhui1

Objective It is to investigate the influence of DC-CIK cells combined with Kanglaite injection on immune function and quality of life of patients with advanced non-small-cell lung cancer (NSCLC). Methods A total of 50 patients with advanced NSCLC were randomly divided into 2 groups, 22 cases in the control group were received only appropriate supportive care, and 28 cases in the treatment group were treated by DC-CIK cells combined with Kanglaite injection plus supportive care. The percentage and absolute number of peripheral blood T lymphocyte subsets were evaluated by flow cytometry. The clinical responses were evaluated using the Response Evaluation Criteria in Solid Tumors (RECIST). The performance status was measured by the Karnofsky Performance Status (KPS) scale and body mass change. Results In the treatment group, the levels of CD3+, CD4+T lymphocyte subsets in peripheral blood were significantly increased (allP<0.05) and CD4+CD25+Treg subset were significantly lower (P<0.05) after treatment, while the level of CD8+subset and CD4+/CD8+ratio were stable. There was no significant alteration for these parameters in the control group. There was no significant differenct in the response rate and disease control rate between the both groups (allP>0.05). Compared with the control group, the KPS score and body mass change were significantly improved following the treatment of DC-CIK cells combined with Kanglaite injection (allP<0.05). Fever was observed in 10 patients in the treatment group, and the symptom was rapidly improved with supportive treatment. There was no other side effect in the treatment group. Conclusion DC-CIK cells combined with Kanglaite injection can improve immune function and quality of life in patients with advanced NSCLC.

dendritic cell; cytokine-induced killer cell; Kanglaite injection; advanced non-small-cell lung cancer

邓新娜，女，主治医师，在读博士，主要从事恶性肿瘤的综合治疗。

蔡建辉，E-mail: jianhuicai@163.com

河北省中医药管理局资助项目(2013031)

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.36.004

R734.2

A

1008-8849(2015)36-4000-04

2015-03-12

(1. Hebei General Hospital, Shijiazhuang 050051, Hebei, China; 2.Hebei Medical University, Shijiazhuang 050017, Hebei, China)