蒲黄压疮散对大鼠压疮模型创面血管内皮生长因子的影响

刘 鹏，周 军

(1.商洛职业技术学院，陕西 商洛 726000；2.陕西中医学院附属医院，陕西 咸阳 712000)

蒲黄压疮散对大鼠压疮模型创面血管内皮生长因子的影响

刘 鹏1，周 军2

(1.商洛职业技术学院，陕西 商洛 726000；2.陕西中医学院附属医院，陕西 咸阳 712000)

目的 研究蒲黄压疮散对大鼠压疮模型创面血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法 将40只SD大鼠随机分成假手术(A组)、压疮模型组(B组)、蒲黄压疮散治疗组(C组)及云南白药治疗组(D组)。采用磁力压迫持续缺血损伤方法构建压疮动物模型，造模成功后，均常规换创面药，C组及D组创面分别敷蒲黄压疮散及云南白药。5 d后分别于创面边缘取材,组织常规固定、包埋、连续切片、HE染色,VEGF免疫组织化学染色标记，光镜下观察并摄片。结果 C组、D组大鼠创面VEGF标记毛细血管数量、毛细血管面积均高于B组(P均<0.01)，C组高于D组(P均<0.05)。结论 蒲黄压疮散可以有效改善压疮创面局部的血液循环，促进血管及纤维组织的增生,进而促进创面的修复。

蒲黄压疮散；压疮；血管内皮生长因子

压疮又称为压力性溃疡,旧称褥疮，是由于肢体突出部位组织长期局部受压导致组织长期持续缺血、缺氧及营养障碍而引起的局部组织血流障碍,致使组织发生溃烂坏死[1]。压疮是长期卧床患者常见的并发症，尤以老年人多见。而我国目前人口老龄化问题日趋严重，故压疮的患病人群也必将逐年增多。压疮常由于病程迁延难愈，给临床治疗和护理带来极大困难[2]。同时由于压疮的发生，导致患者经济负担加重，生活质量严重下降。故寻求快速有效治愈压疮的方法，是临床医生和护理人员亟待研究的一项重要课题。目前,临床上对于压疮的治疗较多局限于西医的局部换药治疗，往往效果较差[3]。笔者认为,单纯的局部换药处理对于压疮创面的愈合是不够的，特别是严重压疮患者,促进局部创面组织的血液循环，增强局部组织的抗感染能力，增强组织的愈合能力才是快速治愈压疮的根本。本研究观察了蒲黄压疮散对大鼠压疮模型创面血管内皮生长因子(VEGF)的影响，旨在为其临床上治疗压疮提供实践依据。

1 实验资料

1.1 实验动物及分组 自西安交通大学动物实验中心购成年健康SD大鼠40只，雌雄各半，体质量(200±20)g,动物合格证编号：SCXK(陕)2014-008。将大鼠适应性饲养(饲养温度控制在20～25 ℃，湿度控制在40%～70%，采用标准饲料进行喂养，标准饲料购于西安交通大学动物实验中心)1周后，根据随机数字表将大鼠随机分为假手术组(A组)、压疮模型组(B组)、蒲黄压疮散治疗组(C组)及云南白药治疗组(D组)，每组10只。

1.2 试剂及药物 苏木素伊红(HE)染色试剂盒(上海沪峰生物科技有限公司生产) 、鼠抗人VEGF免疫组化试剂(北京博奥森生物技术有限公司)、蒲黄压疮散(组方：蒲黄粉100 g、黄连10 g、大黄10 g、白芨10 g,将其研成极细末，高压灭菌备用)、云南白药、圆片形磁铁(直径25 mm，厚3 mm，高压灭菌备用)和圆环形铁片(外径25 mm，内径8 mm，厚1 mm，高压灭菌备用)。

1.3 动物模型制备 健康SD大鼠适应性饲养1周后，B、C、D组实验前8 h禁食、禁饮。大鼠经10%水合氯醛(0.3 mL/100 g体质量)腹腔注射麻醉后，在其背部正中线备皮后，做一深至筋膜的切口，钝性分离，将圆环形铁片植入背部皮下，体外采用圆片形磁铁间歇性施加压力。外源磁片与体内移植磁片相互产生吸引，从而对皮肤产生压力，造成局部皮肤缺血，每次缺血2 h后，再将外源磁片拿下，让局部血流恢复30 min，如此进行1个循环[4]。每只大鼠每天进行5个连续的循环，连续进行3 d，30只大鼠均形成压疮，压疮分度在Ⅱ～Ⅲ期提示造模成功[5]，取出圆环形铁片。A组大鼠仅做背部正中线深及深筋膜切口即可。造模期间分笼饲养，每天创面喷洒硫酸庆大霉素注射液预防感染。

1.4 治疗方法 C组、D组均采用2%碘酒及75%乙醇消毒压疮创面周围皮肤，3%双氧水棉球消毒压疮创面，生理盐水冲洗创面，干纱布块擦干创面后，C组创面上撒灭菌的蒲黄压疮散，D组创面上撒云南白药，然后均以凡士林纱条覆盖，无菌纱布覆盖，绷带固定包扎。A组、B组创面除不撒药物外，其余处理同C组、D组，均每天换药1次，仔细观察压疮创面肉芽组织生长及愈合情况。

1.5 检测指标和方法 4组均于治疗5 d时分别于创面边缘取材,组织常规固定、包埋、连续切片、HE染色,VEGF免疫组织化学染色标记，光镜下观察并摄片。免疫组化标记以棕黄色颗粒状沉积为阳性，明确阳性血管内皮细胞和毛细血管后，由显微图像分析系统进行低倍镜下(×10)观看，随机选取2个视野,计算阳性毛细血管数及阳性毛细血管面积[6]。

2 结 果

2.1 大鼠VEGF免疫组化标记镜下表现 C组及D组大鼠压疮创面VEGF标记毛细血管数量及增生的血管内皮细胞明显较多，见图1和图2。而B组 大鼠压疮创面VEGF标记毛细血管数量及增生的血管内皮细胞明显较少，见图3。

2.2 大鼠压疮创面VEGF标记毛细血管情况比较 C组、D组大鼠创面VEGF标记毛细血管数量和毛细血管面积均明显高于B组(P均<0.01)，且C组明显高于D组(P<0.05)。见表1。

3 讨 论

图1 A组VEGF免疫组化标记镜下表现(×10)

图2 D组VEGF免疫组化标记镜下表现(×10)

图3 B组VEGF免疫组化标记镜下表现(×10)

表1 各组大鼠压疮创面VEGF标记毛细血管情况比较

注：①与B组比较，P<0.01;②与D组比较，P<0.05。

目前由于压疮是生理学、病理学、组织学等学科共同研究的焦点问题，因不同研究存在侧重点不同和研究方向差异，使压疮的形成机制呈现多学派争鸣的局面。压疮形成机制有缺血性损伤学说、再灌注伤学说、细胞变形学说等，但理论界普遍支持缺血性损伤学说。该学说认为压疮的实质是组织受压变形后毛细血管被阻断导致局部缺血，各层组织同时发生相应的病理改变,包括水肿、吞噬细胞浸润、横纹肌溶解消失、胶原纤维透明性变等[7]。结合压疮致病机制，西医认为压疮的治疗主要是解除压力压迫，积极局部换药，预防创面感染，加强全身营养以及必要时手术治疗等。但临床往往治疗效果差，创面迁延不愈。压疮的难以愈合不仅降低了患者的生活质量，而且极大地消耗了医药及护理费用。

中医认为,压疮的成因为局部脉络瘀阻或复感邪毒,瘀毒互结而致局部红肿溃破成腐成脓,加之患者多为气血虚衰, 疮口不能自愈。针对压疮病因宜选用解毒疏散、活血化瘀、收敛生肌之中药,效果颇佳[8]。蒲黄压疮散由蒲黄粉、大黄、黄连、白芨中药组成，其中蒲黄粉为香蒲科植物水烛香蒲( 狭叶香蒲)、东方香蒲或同属植物的干燥花粉，蒲黄粉含有黄酮类组分，而黄酮类组分中的苷类具有显著活血化瘀作用，故蒲黄粉为重要的传统化瘀药物，具有行血和破血的功效[9]。另外研究表明, 蒲黄水溶液体外对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌及Ⅱ型副伤寒杆菌均有较强抑制作用和抗炎作用[10]。故组方中的蒲黄对压疮创面的感染预防和治疗有极其重要的作用。大黄中的主要成分为蒽醌衍生物、大黄酸、大黄素和芦荟大黄素等， 具有清热解毒、活血化瘀、解痉功能,并具有较强的抗菌作用[11]；大黄粉外敷具有活血祛瘀、抑菌消炎、收敛和消除局部性炎水肿的作用[12]。黄连为毛茛科植物，具有清热燥湿、泻火解毒之功效。白芨性微寒,味苦、甘、涩，具有收敛止血、清热利湿、消肿止痛之功效，临床上广泛用于治疗咯血、吐血、外伤出血、疮疡肿毒、皮肤郓裂、肺结核吐血、溃疡病出血等病症[13]。四味中药合用，覆盖于压疮创面，具有的清热解毒、活血化瘀、抗炎、消肿止痛、收湿敛疮之功效。

VEGF是一种特异地作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子, 既能使血管内皮细胞增殖、迁移，又能增加血管的通透性，使血管中的大分子物质进入细胞外基质中,有利于新生血管和基质的细胞生长[14]。VEGF在压疮愈合过程中表达比较丰富，其在压疮愈合过程中起决定性作用。本实验结果也显示蒲黄压疮散及云南白药均可增加大鼠创面VEGF的表达，能有效改善压疮创面局部的血液循环，促进血管及纤维组织的增生,进而促进创面的修复。但蒲黄压散效果更好。

综上所述, 蒲黄压疮散可以有效改善压疮创面局部的血液循环，促进血管及纤维组织的增生,与该方具有的清热解毒、活血化瘀、抗炎、消肿止痛、收湿敛疮之功效相一致，为临床应用蒲黄压疮散治疗压疮提供了实验依据。

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Influence of Pollen Typhae Bedsore Powder on VEGF in rat model of pressure ulcer wound

LIU Peng1, ZHOU Jun2

(1.Shangluo Vocational and Technical College, Shangluo 726000, Shannxi, China; 2.The Affiliated Hospital of Shaanxi University of Chinese Medicine, Xianyang 712000, Shaanxi, China)

Objective It is to observe the influence of Pollen Typhae Bedsore Powder (PTBP) on vascular endothelial growth factor (VEGF) in rat model of pressure ulcer wound.Methods 40 rats were randomly divided into sham operation control group (group A), model group (group B), PTBP group (group C) and Yunnan Baiyao group (group D).The animal model of pressure sore was constructed by magnetic compression sustained ischemic damage.After the success of modeling, the animals were given routine dressing PTBP in group C and with Yunnan Baiyao in group D.5 days respectively to the wound edge tissue based, conventional fixed, embedded, serial section, HE staining, the expression of VEGF were observed under light microscope and photographed by immunohistochemical staining.Results The number of capillaries marked by VEGF and the number of capillary capillary area in rats of group C and D wound were higher than those of group B (allP<0.01), and those of group C were higher than group D (P<0.05).Conclusion PTBP can effectively improve the local blood circulation of decubitus ulcer, promote blood vessels and fibrous tissue hyperplasia, thereby promoting wound repair.

Pollen Typhae Bedsore Powder; pressure sore; vascular endothelial growth factor

刘鹏，男，讲师,硕士,从事免疫学教学与科研、病原微生物与临床疾病关系研究。

陕西省教育科学“十二五”规划课题(SGH140934)

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.15.004

R-332

A

1008-8849(2015)15-1606-03

2015-01-25