蚕沙的薄层鉴别研究史蕾？

李柯　陈丹　等

【摘要】目的：建立蚕沙药材薄层色谱鉴别方法。方法：以1-脱氧野尻霉素、派可林酸为对照品，通过优化显色剂、展开剂及检视等条件，筛选出最佳薄层鉴别条件。结果：所有批次蚕沙药材均能检出1-脱氧野尻霉素和派可林酸，且斑点清晰、分离度高、重复性好。结论：该法可行性，专属性强，可用于蚕沙药材的质量控制。

【关键词】蚕沙；1-脱氧野尻霉素；派可林酸；薄层鉴别

【中图分类号】R284.1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）02-0018-02

蚕沙为蚕蛾科昆虫家蚕Bonbyx mori L.的干燥粪便，具有祛风除湿、活血定痛的功效，用于风湿痹痛、关节不遂、皮肤不仁、腰腿冷痛、风疹瘙痒、头风头痛、烘弦风眼[1]。现代药理和临床研究表明蚕沙有抗肿瘤、降血糖、改善和治疗贫血作用，并且成功地开发了金糖尿胶囊、生血宁片。其中1-脱氧野尻霉素（1-DNJ）和派可林酸为蚕沙降血糖、抗肿瘤、抗病毒的有效成分[2、3]。《中华人民共和国卫生部药品标准》中药材（第一册）采用TLC鉴别了蚕沙药材中含有的β-谷甾醇成分，为了更好地控制蚕沙药材质量，我们以1-DNJ和派可林酸为对照品，对蚕沙TLC鉴别条件进行了研究，为其质量标准的制定提供依据。现将结果报道如下。

1材料与仪器

1.1仪器薄层色谱数码成像系统（瑞士CAMAG公司）；超声波清洗器（武汉恒信世纪科技有限公司，型号HX-06）；硅胶G薄层板（产自德国Merck默克公司）；电热恒温干燥箱（上海跃进医疗器械厂）。

1.2试药蚕沙药材分别购自长沙市岳麓区高新大药房、济仁堂大药房、永康堂大药房、湖南上药九旺医药有限公司，均由湖南省中医药研究院李若存研究员鉴定为家蚕Bonbyx mori L.的干燥粪便；1-DNJ对照品（批号：MUST-1305502，纯度>98%），购自成都曼思特生物科技有限公司；派可林酸对照品（批号：111751-200601）和蚕沙对照药材（批号：121419-200501）均购自中国药品生物制品检定研究院；其余所用试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.11-DNJ薄层鉴别取蚕沙药材约2g，加水20mL，加热回流20min，滤过，滤液蒸干，残渣加70%乙醇5ml使溶解，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取1-DNJ对照品适量，加90%乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述供试品溶液10μl、1-DNJ对照品溶液15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（16：4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，于105℃加热至斑点明显后，再置碘蒸气中熏至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图1。

2.2派可林酸的薄层鉴别取派可林酸对照品适量，加乙醇制成每1ml含 0.25mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述供试品溶液10μl、派可林酸对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（5：4.5：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，于105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图2。

3讨论

3.11-DNJ和派可林酸为降血糖的药效物质，同时1-DNJ也是抗肿瘤、艾滋病病毒（HIV）和丙型肝炎病毒（HCV）的药效物质，故以此2种成分来衡量蚕沙药材质量的优劣比β-谷甾醇更加合理。

3.2显色剂的选择[4、5]由于1-DNJ和派可林酸分子中均无不饱和结构，不能采用紫外光灯进行检视，且GF254板也未检测到特征斑点，最后决定选用日光检视。1-DNJ为生物碱类成分，常用显色剂为改良碘化铋钾试液、吲哚醌试液；派可林酸为氨基酸类成分，常用显色剂为茚三酮试液。试验结果表明，上述显色剂对1-DNJ不灵敏，经过反复试验，发现样品与1-DNJ对照品用茚三酮试液显色，加热至斑点明显后，再置碘蒸气中熏，日光下检视，可增加显色的灵敏性。因此，采用茚三酮试液和碘蒸气作为1-DNJ的显色剂；茚三酮试液对派可林酸显紫色斑点，灵敏性好、专属性强，所以选茚三酮试液作为派可林酸的显色剂。

3.3展开剂的选择1-DNJ分子含有多个羟基，具有较强的极性。因此，考虑采用①乙酸乙酯-甲酸-水（16：3：1）；②乙酸乙酯-无水乙醇（1：2）；③三氯甲烷-甲醇-水（5：4.5：1）；④正丁醇-醋酸-水（6：1：1）作为展开剂进行试验。以乙酸乙酯-甲酸-水（16：3：1）的展开系统，分离得到的斑点最多。所以确定用乙酸乙酯-甲酸-水为展开系统，分别采用（16：3：1）、（16：4：1）、（16：5：1）不同比例进行比较，经过多次试验，确定以（16：4：1）的分离度及Rf值最为合适。派可林酸分子中含有羧基，极性较强。采用乙酸乙酯-甲酸-水（16：3：1）和三氯甲烷-甲醇-水（5：4.5：1）作为展开剂进行试验，结果发现，三氯甲烷-甲醇-水（5：4.5：1）的展开系统，分离得到的斑点分离度好，斑点非常清晰。考虑到三氯甲烷的毒性，换用二氯甲烷进行试验，但是斑点的分离度不够好。所以，最后确定以三氯甲烷-甲醇-水（5：4.5：1）为展开剂。

3.4耐用性试验选用不同厂家的硅胶G板进行了比较，结果市售4个批次的蚕沙药材与蚕沙对照药材试验均与1-DNJ和派可林酸对照品相应的位置上显相同颜色斑点，且分离度好。

参考文献

[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药材第一册[M].1992：69.

[2] 苏凤莲.高效液相色谱法测定金糖宁胶中派可林酸的含量[J].海峡药学，2001，13（3）：42.

[3] 梁明，王鹏，张会慧，等.1-脱氧野尻霉素的研究进展[J].安徽农业科学，2012，40（17）：9222.

[4] 李晓伟，易智彪，曾宝，等.巴豆生物碱薄层色谱鉴别研究[J].北方药学，2013，10（2）：3.

[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：3.

（收稿日期：2013.11.28）