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蚕沙的薄层鉴别研究史蕾?

2015-02-02李柯陈丹

中国民族民间医药·下半月 2014年1期
关键词:茚三酮蚕沙展开剂

李柯 陈丹 等

【摘要】目的:建立蚕沙药材薄层色谱鉴别方法。方法:以1-脱氧野尻霉素、派可林酸为对照品,通过优化显色剂、展开剂及检视等条件,筛选出最佳薄层鉴别条件。结果:所有批次蚕沙药材均能检出1-脱氧野尻霉素和派可林酸,且斑点清晰、分离度高、重复性好。结论:该法可行性,专属性强,可用于蚕沙药材的质量控制。

【关键词】蚕沙;1-脱氧野尻霉素;派可林酸;薄层鉴别

【中图分类号】R284.1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517(2014)02-0018-02

蚕沙为蚕蛾科昆虫家蚕Bonbyx mori L.的干燥粪便,具有祛风除湿、活血定痛的功效,用于风湿痹痛、关节不遂、皮肤不仁、腰腿冷痛、风疹瘙痒、头风头痛、烘弦风眼[1]。现代药理和临床研究表明蚕沙有抗肿瘤、降血糖、改善和治疗贫血作用,并且成功地开发了金糖尿胶囊、生血宁片。其中1-脱氧野尻霉素(1-DNJ)和派可林酸为蚕沙降血糖、抗肿瘤、抗病毒的有效成分[2、3]。《中华人民共和国卫生部药品标准》中药材(第一册)采用TLC鉴别了蚕沙药材中含有的β-谷甾醇成分,为了更好地控制蚕沙药材质量,我们以1-DNJ和派可林酸为对照品,对蚕沙TLC鉴别条件进行了研究,为其质量标准的制定提供依据。现将结果报道如下。

1材料与仪器

1.1仪器薄层色谱数码成像系统(瑞士CAMAG公司);超声波清洗器(武汉恒信世纪科技有限公司,型号HX-06);硅胶G薄层板(产自德国Merck默克公司);电热恒温干燥箱(上海跃进医疗器械厂)。

1.2试药蚕沙药材分别购自长沙市岳麓区高新大药房、济仁堂大药房、永康堂大药房、湖南上药九旺医药有限公司,均由湖南省中医药研究院李若存研究员鉴定为家蚕Bonbyx mori L.的干燥粪便;1-DNJ对照品(批号:MUST-1305502,纯度>98%),购自成都曼思特生物科技有限公司;派可林酸对照品(批号:111751-200601)和蚕沙对照药材(批号:121419-200501)均购自中国药品生物制品检定研究院;其余所用试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.11-DNJ薄层鉴别取蚕沙药材约2g,加水20mL,加热回流20min,滤过,滤液蒸干,残渣加70%乙醇5ml使溶解,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液。取1-DNJ对照品适量,加90%乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。吸取上述供试品溶液10μl、1-DNJ对照品溶液15μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-甲酸-水(16:4:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以茚三酮试液,于105℃加热至斑点明显后,再置碘蒸气中熏至斑点清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。见图1。

2.2派可林酸的薄层鉴别取派可林酸对照品适量,加乙醇制成每1ml含 0.25mg的溶液,作为对照品溶液。吸取上述供试品溶液10μl、派可林酸对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(5:4.5:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以茚三酮试液,于105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。见图2。

3讨论

3.11-DNJ和派可林酸为降血糖的药效物质,同时1-DNJ也是抗肿瘤、艾滋病病毒(HIV)和丙型肝炎病毒(HCV)的药效物质,故以此2种成分来衡量蚕沙药材质量的优劣比β-谷甾醇更加合理。

3.2显色剂的选择[4、5]由于1-DNJ和派可林酸分子中均无不饱和结构,不能采用紫外光灯进行检视,且GF254板也未检测到特征斑点,最后决定选用日光检视。1-DNJ为生物碱类成分,常用显色剂为改良碘化铋钾试液、吲哚醌试液;派可林酸为氨基酸类成分,常用显色剂为茚三酮试液。试验结果表明,上述显色剂对1-DNJ不灵敏,经过反复试验,发现样品与1-DNJ对照品用茚三酮试液显色,加热至斑点明显后,再置碘蒸气中熏,日光下检视,可增加显色的灵敏性。因此,采用茚三酮试液和碘蒸气作为1-DNJ的显色剂;茚三酮试液对派可林酸显紫色斑点,灵敏性好、专属性强,所以选茚三酮试液作为派可林酸的显色剂。

3.3展开剂的选择1-DNJ分子含有多个羟基,具有较强的极性。因此,考虑采用①乙酸乙酯-甲酸-水(16:3:1);②乙酸乙酯-无水乙醇(1:2);③三氯甲烷-甲醇-水(5:4.5:1);④正丁醇-醋酸-水(6:1:1)作为展开剂进行试验。以乙酸乙酯-甲酸-水(16:3:1)的展开系统,分离得到的斑点最多。所以确定用乙酸乙酯-甲酸-水为展开系统,分别采用(16:3:1)、(16:4:1)、(16:5:1)不同比例进行比较,经过多次试验,确定以(16:4:1)的分离度及Rf值最为合适。派可林酸分子中含有羧基,极性较强。采用乙酸乙酯-甲酸-水(16:3:1)和三氯甲烷-甲醇-水(5:4.5:1)作为展开剂进行试验,结果发现,三氯甲烷-甲醇-水(5:4.5:1)的展开系统,分离得到的斑点分离度好,斑点非常清晰。考虑到三氯甲烷的毒性,换用二氯甲烷进行试验,但是斑点的分离度不够好。所以,最后确定以三氯甲烷-甲醇-水(5:4.5:1)为展开剂。

3.4耐用性试验选用不同厂家的硅胶G板进行了比较,结果市售4个批次的蚕沙药材与蚕沙对照药材试验均与1-DNJ和派可林酸对照品相应的位置上显相同颜色斑点,且分离度好。

参考文献

[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药材第一册[M].1992:69.

[2] 苏凤莲.高效液相色谱法测定金糖宁胶中派可林酸的含量[J].海峡药学,2001,13(3):42.

[3] 梁明,王鹏,张会慧,等.1-脱氧野尻霉素的研究进展[J].安徽农业科学,2012,40(17):9222.

[4] 李晓伟,易智彪,曾宝,等.巴豆生物碱薄层色谱鉴别研究[J].北方药学,2013,10(2):3.

[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010:3.

(收稿日期:2013.11.28)

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