微波在PTAH法染心肌细胞中的应用

邓海峰　孙缦利

微波在PTAH法染心肌细胞中的应用

邓海峰孙缦利

目的 探索微波在PTAH法染心肌细胞中的应用。方法 一定强度的微波辐射结合染液对材料进行染色处理，并做石蜡切片观察。结果 在硝酸酒精固定液中浸泡一定时间后用一定强度的微波辐射一定时间，获得良好的效果；在苏木精染液中浸染2 d后，用微波辐射一定时间（45℃以内）心肌结构十分清楚。结论 利用微波结合硝酸酒精固定液固定心肌细胞效果良好,节省时间；利用微波结合苏木精染液染心肌细胞效果良好，节省时间。

微波；心肌细胞；闰盘

微波辐射能使液体中极性分子高频振动，增加液体分子间的碰撞，从而使液体内部迅速产热和某些化学反应加快。许多作者利用此原理进行了微波辐射固定组织、微波辐射结合固定液固定组织[1-2]等，均取得良好的效果，但还没发现用微波辐射结合固定液固定心肌或用微波辐射结合染液染心肌具体方法的报道，为了拓展微波在组织切片的应用，进一步探讨微波辐射在PTAH法染心肌中的作用和应用的具体方法，本文具体介绍微波辐射分别结合固定液和染液在PTAH法染心肌细胞的过程中对材料进行固定和染色的方法。

1　材料与方法

1.1材料

取鸡心(大小为1 cm×0.5 cm×0.5 cm)作为实验材料，硝酸酒精固定液[3]，苏木精染液，海尔牌H-R7751MS 型家用微波炉（750W，分6档）为微波辐射仪器。

1.2方法

1.2.1取材与固定 将材料分为6个对照组，6个实验组。对照1组固定24 h，对照2组固定30 min，对照3组固定24 h，对照4组固定24 h，对照5组固定24 h，对照6组固定24 h；实验1组固定30 min→微波3 min，实验2组固定1 h→微波3 min，实验3组固定24 h，实验4组，固定24 h，实验5组固定24 h，实验6组固定24 h。

1.2.2漂洗 70%酒精4 h→50%酒精4 h→水洗4 h以上。

1.2.3染色 对照1组浸染10 d，对照2组浸染10 d，对照3组浸染5 h，对照4组浸染1 d，对照5组浸染2 d，对照6组浸染3 d；实验1组浸染10 d，实验2组浸染10 d，实验3组浸染5 h→微波达5 min（低于45℃），实验4组浸染1 d→微波达5 min（低于45℃），实验5组浸染2d→微波达5 min（低于45℃），实验6组浸染3d→微波达5 min（低于45℃）。微波辐射的档次是根据微波辐射时间和最高温度设计并预先测试后而选定的。微波辐射方法同固定。对照3、4、5、6组分别染色5 h、1 d、2 d、3 d，实验3、4、5、6组分别染色5 h、1 d、2 d、3 d后加低档微波5 min（温度低于45℃）。

1.2.4水洗、脱水、透明、浸蜡、包埋 流水冲洗24 h，各级酒精脱水。常规透明与浸蜡，石蜡包埋。

1.2.5切片、贴片、烤片、脱蜡、封片 切片的厚度为6 µm，浮漂法贴片，二甲苯中脱蜡，中性树胶封片。

2　结果

2.1对照组结果

对照1组组织染色深，细胞结构完好，闰盘和环纹不清楚。对照2组组织染色深，细胞有收缩严重。对照3组组织染色浅且不均匀。细胞的各部分结构模糊不清。对照4、5、6组组织染色浅但较为均匀，在目镜为10倍物镜为40时可以清楚的看到细胞核、核仁，无闰盘，环纹不清楚。

2.2实验组结果

实验1、2组细胞结构完整无损伤和收缩，闰盘清楚，环纹不清楚，实验2组结果比实验1组更理想。实验3、4、5、6组组织染色较深且比较均匀，细胞结构完整，无损伤和收缩，细胞核与细胞质的分化十分明显，在目镜为10倍物镜为40时可以清楚的看到细胞核、核仁等结构，但实验3、4组看不到闰盘，实验5、6组可以清楚的看见闰盘，以实验5组效果最佳。

3　讨论

本实验结果显示染色不足的对照组无闰盘,环纹不清楚，而用相同时间进行染色然后用一定强度的微波进行处理的实验组不仅环纹清楚，有的闰盘也比较清楚，这说明微波对组织的染色具有促进作用，即在PTAH法染心肌细胞中利用微波结合硝酸酒精固定液固定心肌细胞效果良好,节省时间；在PTAH法染心肌细胞中利用微波结合苏木精染液染心肌细胞效果良好，节省时间。

[1] Loqin GR，Leonard JB，Dvorak AM. Calibration and standardization of microwave ovens for fixation of brain and peripheral nerve tissue[J]. Methods，1998，15(2)：107-117.

[2] 楚德昌. 微波在Cajal染色中的应用[J]. 生物学杂志，2003，20(2)：35-36.

[3] 杜卓民. 实用组织学技术[M]. 北京：人民卫生出版社，1998：136-137.

Application of Microwave to Stain the Myocardial Cells in the Method of PTAH

DENG Haifeng SUN Manli, Department of Physiology, Luohe Medical College, Luohe 462000, China

Objective To explore the application of microwave to stain the myocardial cells in the method of PTAH. Methods Using a certain intensity microwave combining with the stainning radiation stain the tissue, then observe the results. Results The tissues which ware soaked in nitrate alcohol fixative a certain period of time then using a certain intensity of microwave radiation a certain period of time, got good results .The tissues which ware in soaked in HE Ranye disseminated of the 2 days then using microwave radiation a certain period of time (45℃less), got good results and the structure of myocardial cells is very Clear. Conclusion Using a certain intensive microwave combination of nitric acid alcohol fixative fixing myocardial cells, got good effects and save time; using a intensive microwave combination HE Ranye staining the myocardial cells , got good effects and save time.

Microwave, Myocardial Cells, Intercalary Plate

R35

B

1674-9308（2015）09-0183-01

10.3969/j.issn.1674-9308.2015.09.157

462000 漯河医学高等专科学校生理学教研室

孙缦利，E-mail：smlsmile@163.com