冠心病老年男性患者雄激素受体CAG基因多态性重复数影响发病风险的临床研究

马和平 刘霞 刘越童 袁慧芸

[摘要]目的 探讨老年男性患者雄激素受体CAG基因多态性重复数对冠心病的发病风险影响。 方法 随机选择我院心血管内科收治的86例冠心病患者作为观察组，100例体检非冠心病患者作为对照组，采用聚合酶连反应（PCR）和直接测序法测定两组研究对象外周血雄激素受体CAG重复序列的数目，并采用多因素Logistic回归分析冠心病发病的危险因素。结果 观察组与对照组在年龄、BMI、TT、E2四项指标上差异无统计学意义（P>0.05）；但是在高血压、糖尿病、高血脂、糖尿病家族史、冠心病家族史、CAG重复数<22、CAG重复数≥22指标上，两组具有明显的差异，且具有统计学意义（P<0.05）；吸烟、高血压、糖尿病、高血脂、冠心病家族史、CAG重复数<22是冠心病的危险因素；其中CAG重复数<22是CAG重复数≥22患冠心病的危险度增加4.421倍。 结论 罹患冠心病的危险因素很多，雄激素受体CAG基因多态性重复数<22是患冠心病的主要危险因素之一。

[关键词]雄激素受体；基因多态性；冠心病；发病风险

[中图分类号]R541.4 [文献标识码]B [文章编号]2095-0616（2014）20-196-04

Study of androgen receptor CAG repeat polymorphism and coronary artery disease in elderly men

MA Heping LIU Xia LIU Yuetong YUAN Huiyun

Department of Medicine，Dongguan Liaobu Hospital，Dongguan 523400，China

[Abstract]Objective To investigate the relationship of androgen receptor CAG repeat polymorphism and coronary artery disease in elderly men. Methods 86 cases of coronary artery disease patients were randomly selected as the observation group，and 100 cases of medical non coronary heart disease were selected as control group，who were treated in our hospital department of cardiovascular internal medicine. Results Investigation of androgen receptor CAG repeat sequence number of the two groups of subjects peripheral was determined by polymerase chain reaction（PCR） and direct sequencing method.Risk factors of coronary heart disease were analyzed by multivariate logistic regression analysis.The observation group and the control group were no significant difference in the four indicators of age，BMI，TT， E2（P>0.05），but the hypertension，diabetes，hyperlipidemia，family history of diabetes，family history of coronary heart disease，CAG repeat numbers of<22，CAG repeat number≥22 of two groups had the obvious difference with statistical significance（P<0.05）.Smoking，hypertension，diabetes，hyperlipidemia，family history of coronary heart disease，CAG repeat number<22 were risk factors for coronary heart disease.Coronary heart disease risk of CAG repeat numbers<22 was 4.421 times greater than that of CAG repeat numbers≥22. Conclusion There are many risk factors of CHD.Androgen receptor gene CAG polymorphism repeat number<22 is one of the major risk factors of coronary heart disease.

[Key words]Androgen receptor；Gene polymorphism；Coronary artery disease；Onset risk

冠心病是临床上常见的一种心血管疾病，多发于中老年群体，且随着年龄的增长，冠心病的发生率有呈上升的趋势[1]。该病发病机制复杂、病程长，容易并发多种合并症，严重影响患者的生活质量。因此，对冠心病的早期发现和治疗显得尤为重要。临床研究证实[2]，雄激素受体CAG基因多态性重复数对老年男性冠心病的发生和发展具有一定的相关性。本研究主要以2011年1月～2012年12月我心血管内科收治的86例老年男性冠心病患者为研究对象，分析了老年男性患者雄激素受体CAG基因多态性重复数对冠心病的发病风险影响，具体报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本次研究86例老年男性冠心病患者来自于2011年1月～2012年12月我院心血管内科，100例正常研究对象来自于我院体检中心。纳入标准[3]：（1）老年男性冠心病患者要求经临床体格检查、患者主诉症状、心脏彩超或冠脉造影确诊；（2）所有入选对象年龄均在60～82岁之间；（3）不合并其他内分泌疾病、脏器功能衰竭；（4）体检正常者均为自愿参加此次研究。排除标准[4]：自身合并其他严重影响本次研究结果的疾病、依从性较差的研究对象。本次研究共纳入186例研究对象。观察组86例，年龄60～82岁，平均（67.4±8.4）岁，其中单支病变28例、双支病变39例、3支及以上病变19例。对照组研究对象100例，年龄60～82岁，平均（66.4±7.9）岁，两组研究对象在年龄比较上差异不具有统计学意义（P>0.05），均在签订知情同意书后开始本次研究。

1.2 实验仪器

液基因组DNA试剂盒由采用天根生化科技（北京）有限公司提供，ABI 3730xlDNA测序仪分析，北京六合华大基因科技股份有限公司提供的合成引物。

1.3 实验方法

采用聚合酶连反应（PCR）：于清晨空腹抽取受检者肘静脉血3mL，采用肝素进行抗凝，用等体积的Hanks液稀释静脉血，以800r/s的速度进行分离操作，弃除上清液，将单个细胞放在温度为-80℃的环境中保存。提取RNA，放置在Eppendorf管，加入5μgRNA，在温度为70℃的恒温箱中孵育5min，离心，加入1μL逆转录酶，在40℃的冰箱中孵育6min，合成第一链cDNA。由上海英峻生物技术有限公司合成CAG基因引物。内引物序列为：下游：5-GCAGcGAcTAccGcATcATcA-3，上游：5-GCTCTGGGACGCAACCTCTCT-3；外引物序列为下游：5-CTCTACGATGGGclTrGGGGAGAAc-3，上游：5-CGGGGTAAGGGAAGTAGGTGGAAG-3。反应条件：90℃ 30s；60℃ 40s；72℃ 60s，42个循环，最后72℃延伸300s。采用直接测序法测定两组研究对象外周血雄激素受体CAG重复序列的数目，每个标本重复测序2次。

1.4 观察指标

采用统一的自制调查问卷的方式对两组研究对象进行调查，调查内容包括：患者的一般个人信息、BMI、危险因素（吸烟史、高血压、血脂、糖尿病史）、家族遗传史等。实验室检测的激素指标总睾酮（TT）、雌二醇（E2）。

1.5 统计方法

所有收集数据录入Excel2003，在SPSS10.0中进行统计分析。计量资料以（x±s）表示，采用两独立样本t检验，计数资料采用x2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对两组研究对象的一般资料进行统计分析

对两组研究对象的年龄、BMI、吸烟、高血压、糖尿病、高血脂、糖尿病家族史、冠心病家族史、TT、E2、CAG重复数<22、CAG重复数≥22指标进行单因素分析，结果：观察组与对照组在年龄、BMI、TT、E2四项指标上差异不显著（P>0.05）；但是在高血压、糖尿病、高血脂、糖尿病家族史、冠心病家族史、CAG重复数<22、CAG重复数≥22指标上，两组具有明显的差异，且具有统计学意义（P<0.05）。两组各种指标的单因素比较结果，见表1。

2.2 冠心病多因素分析

以是否患有冠心病作为应变量，CAG重复数（<22 vs≥22）、是否吸烟、是否患有高血压、是否患有糖尿病、是否有冠心病家族史、是否患有糖尿病家族史、是否具有高血脂进行多因素Logistic回归分析，结果发现：吸烟、高血压、糖尿病、高血脂、冠心病家族史、CAG重复数<22是冠心病的危险因素；其中CAG重复数<22是CAG重复数≥22患冠心病的危险度增加4.421倍。各种危险因素的OR值及P值，见表2。

3 讨论

冠心病是临床上常见的一种心血管疾病，多发于中老年群体，且男性发病数量多于女性，随着年龄的增长，冠心病的发生率有呈上升的趋势。该病发病机制复杂、病程长，容易并发多种合并症，具有较大的治疗难度。因此，对冠心病的发病机制和影响因素的研究显得尤为重要。近年来，临床上加大了对老年男性冠心病患者影响因素的研究力度，并取得了一定的进展。经研究证实[5]，雄激素受体CAG基因多态性重复数对老年男性冠心病的发生和发展具有一定的相关性。

AR是介导雄激素生理效应的主要蛋白，其3个主要结构域由不同的外显子编码，其周中，CAG重复序列多态是其中的一个外显子主要组成部分[6]。AR的功能和表达受到受到外显子CAG重复序列多态性的调控，而AR基因中的CAG重复序列多态和冠心病的关系密切相关。近年来，国内外大量研究证实[7]，雄激素具有抗缺血的功效，且雄激素水平和男性冠心病的发生呈负相关，其中，雄激素受体CAG基因多态性重复数，22是老年男性冠心病发生和发展的重要危险因素。老年男性冠心病患者的血循环睾酮水平降低，而睾酮水平的降低会一定程度上增加动脉粥硬化的风险。因此，老年男性高血压患者通过长期口服高剂量睾酮制剂对心肌缺血和心绞痛症状的改善具有一定的效果。此外，老年男性群体容易发生动脉粥样硬化，而老年男性的血循环睾酮水平会降低，表明动脉粥样硬化和睾酮的水平具有一定程度的相关性。临床研究发现[8-9]，内源性睾酮的浓度以及雄激素受体CAG基因多态性重复数和冠心病等心血管病死亡率呈负相关，其中，血清中睾酮含量每降低6nmol/L，校正多变量后老年男性冠心病的死亡率会上升约10%。

本研究通过对86例冠心病患者以及100例体检非冠心病患者采用聚合酶连反应（PCR）和直接测序法测定外周血雄激素受体CAG重复序列的数目，并采用多因素Logistic回归分析冠心病发病的危险因素，结果显示，观察组与对照组在年龄、BMI、TT、E2四项指标上差异不显著，但是在高血压、糖尿病、高血脂、糖尿病家族史、冠心病家族史、CAG重复数，22、CAG重复数≥22指标上，两组具有明显的差异，吸烟、高血压、糖尿病、高血脂、冠心病家族史、CAG重复数，22是冠心病的危险因素，其中CAG重复数，22是CAG重复数≥22患冠心病的危险度增加4.421倍，表明雄激素受体CAG基因多态性重复数，22是患冠心病的主要危险因素之一，这一结果和相关文献报道的数据相吻合[10]。因此，我们认为，雄激素受体CAG基因多态性重复数，22对是导致老年男性冠心病发生的重要因素。

综上所述，罹患冠心病的危险因素很多，包括吸烟、高血压、糖尿病、高血脂、冠心病家族史等，但雄激素受体CAG基因多态性重复数，22是患冠心病的主要危险因素之一，高血压临床诊治时，应当对患者的雄激素受体CAG基因多态性重复数进行测定，以提高诊断正确率，有效预防老年男性冠心病的发生。

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（收稿日期：2014-08-08）