高效液相色谱中定量分析中的误差来源及消除

钟芳芳

杭州胡庆余堂天然食品有限公司技术品质部，浙江杭州 310053

高效液相色谱中定量分析中的误差来源及消除

钟芳芳

杭州胡庆余堂天然食品有限公司技术品质部，浙江杭州 310053

高效液相色谱定量分析过程中一旦出现误差将影响结果的准确性，其误差来源主要为样品前的处理、标准品的配置，有效减小误差，可以提高分析结果的准确度，在操作过程中操作者尽量将操作误差减小到最低，有效消除误差的来源非常重要。该文主要分析了高效液相色谱中定量分析中的误差来源以及消除方法，以期为提高实验的准确性提供帮助。

高效液相色谱；定量分析；误差

高效液相色谱是色谱法的一个重要分支[1]，以液体为流动相，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相采用高压输液系统泵入装有固定相的色谱柱[2]，该方法已被广泛应用到医学、化学、农学、工业、法检等重要学科领域中。高效液相色谱中定量分析的主要目的是对已知和未知的组分进行定量分析[3]，其操作过程中的误差对结果的准确性有重要的影响，该文主要总结了高效液相色谱中定量分析中的误差来源及消除方法，现分析如下。

1 高效液相色谱法的概述

高效液相色谱法于1906年由俄国植物化学家茨维特（Tswett）首次提出[4]，1930年以后，相继出现了纸色谱、离子交换色谱和薄层色谱等液相色谱技术，1952年以后该技术得到迅速发展。高效液相色谱法具有高压、高效、高灵敏度、应用范围广以及分析速度快、载液流速快的特点，且其色谱柱可反复使用，具有流量稳定、易回收、样品不被破坏等优点，但是也具有一定的缺点—“柱外效应”[5]，且其灵敏度低于气相色谱。高效液相色谱中定量分析的基本要求：有纯物质作为标准、符合定性参数的要求、被定量组分峰要与其他组分达到分离线、选择合适定量方法。定量分析方法有标准曲线法、面积归一化法、标准加入法、内标法。

2 高效液相色谱中定量分析中的误差来源

2.1 样品前的处理

样品前的处理即样品预处理，包括进样前的称重、溶解、稀释、过滤、萃取、衍生化、液相色谱等所有操作[6]。样品处理前的主要问题为样品的萃取，萃取过程中常常出现萃取率不高且不稳定等问题，尤其在去除蛋白质的过程中，如果蛋白质变性而吸附一些组分，可降低萃取率。样品处理前的称量、溶液、稀释等过程中均可因操作不标准而出现一定的误差，称量不准确、所用仪器的精确度差、操作失误、溶剂蒸发、溶解度不够、溶液不均匀等均可影响结果的准确性。此外，流动相使用前使用真空泵进行溶剂过滤时如果流动相中有气泡存在亦会降低分析灵敏度。样品被污染、样品损失、衍生化反映不完全或多种反应物生成等均可影响结果，衍生反应可影响试验的精确度或在整个样品预处理过程中带来误差。

2.2 标准品的配置

标准品配制过程中影响准确性的因素较多。标准品的纯度、输液泵故障、检测仪器故障均可使结果产生一定的误差[7]。配置过程中的误差引起流动相的组成发生变化可对tR值大的组分产生严重影响；标准品配置过程中柱温的变化也是误差产生的原因；色谱柱可对某一组分的平衡产生影响；分离过程中可因杂质的干扰、样品自身的变化产生一定的误差；处理过程中漂移、噪音，峰形状、分辨率等均是误差的来源。

3 高效液相色谱中定量分析中的误差消除方法

3.1 选择适当的分析方法

不同分析方法的准确度不同，化学分析法对高含量组分测定的误差较小，测量的准确度较高；仪器分析法对低含量组分测定的误差较小，灵敏度较高。根据准确度及组分含量选择合适的分析方法。

3.2 试剂

高效液相色谱分析中试剂要使用分析纯、色谱纯或者优级纯，不可使用含有杂质的试剂。样品溶液必须均匀而无颗粒，处理好的样品在准备上柱前应对准光线摇动,检查样品溶液中有无颗粒。萃取用的溶剂要具有挥发性好、毒性低、杂质少、对待测样品有良好的溶解度且又与水不相混溶[8]。操作过程中要减少样品的稀释次数，正确操作。

3.3 样品预处理

如果色谱图中出现无关峰可改变过滤类型或者将过滤器浸泡在样品溶剂中并进样试验；或采用交替清洗技术。如果出现峰值比预期小则可：①严格按相同条件处理所用样品;②改变过滤器类型;③采用交替清洗技术。如果回收率差则可能为萃取不完全所致，可以改变清洗方法或增加萃取时间[9]。如果色谱峰变宽则改进清洗的方法。精确度差是可用自动化处理装置提高精度或者改进/替换衍分离、生化、萃取或其他条件，增加平行测定的次数。

3.4 标准溶液的配置

配置标准溶液时要先配置规定浓度的内标溶液，样品溶液和标准溶液中最好使用同一批次的内标溶液，增加平行测定的次数；将常用的标准溶液置于棕色溶液瓶中低温储存；配制维生素类标准品时避光或置于棕色容量瓶中避免分解。

3.5 仪器与实验环境

仪器室与其他实验室应相互隔离，仪器室内应安装空调，保持仪器与实验室清洁，注意防腐、防潮、防震，空气相对湿度应＜70%[10]。操作时正确设定仪器的参数，避免仪器故障，不盲目操作，注意仪器的日常清洁和保养[11]。仪器要高度精确。

3.6 容器

瓷类、玻璃类、石英类、塑料类等为实验室最为常用的容器[12]，根据待测样品的要求选择相应的容器。容器要清晰干净，洁净的容器是取得良好实验结果的基本条件。

综上所述，在分析过程中要仔细检查有无系统的误差，可通过对照实验校正检测结果，尽量控制操作过程中的误差，将误差降到最低，使结果的准确度更高。

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The Error Sources and Eliminate of Quantitative Analysis of High Performance Liquid Chromatography(HPLC)

ZHONG Fang-fang
Technical Quality Department,Huqing Natural Food co.,LTD of Hangzhou，Hangzhou，Zhejiang Province，310053 China

High performance liquid chromatography(HPLC)once appear in the process of quantitative analysis of the error will affect the accuracy of the results,the main error source as sample processing,in front of the standard configuration,effectively reduce the error,can enhance the accuracy of analysis results,the operator in the process of operation as far as possible to minimize the operating error,effectively eliminate the source of error is very important.This article mainly analyzes the quantitative analysis of error sources in high performance liquid chromatography(HPLC)and eliminate method,in order to offer help to improve the accuracy of the experiment.

High performance liquid chromatography(HPLC);Quantitative analysis;Error

R9

A

1672-5654（2015）12（b）-0102-03

2015-09-13）

10.16659/j.cnki.1672-5654.2015.35.102

钟芳芳（1982.5-），女，浙江杭州人，本科，工程师，研究方向：产品质量控制。