骨碎补与习用品光亮密网蕨中柚皮苷含量的比较分析

马洁

骨碎补与习用品光亮密网蕨中柚皮苷含量的比较分析

马洁

目的研究骨碎补中有效成分柚皮苷的含量与习用品光亮密网蕨中柚皮苷含量的比较。方法采用薄层色谱法对骨碎补与习用品光亮密网蕨中的柚皮苷进行鉴别。采用高效液相色谱法对骨碎补与习用品中光亮密网蕨中的柚皮苷含量进行测定。测定柚皮苷采用Hypersel C18柱；以甲醇-醋酸-水(35∶4∶65)为流动相；检测波长为283 nm。结果薄层色谱显示光亮密网蕨的色斑不明显, 高效液相色谱显示光亮密网蕨中所含柚皮苷微量。结论该方法显示骨碎补同科植物习用品光亮密网蕨和骨碎补相比, 所含柚皮苷的量较少。

骨碎补；光亮密网蕨；柚皮苷

骨碎补为中医骨伤科常用中药, 别名毛姜、猴姜、石岩姜、申姜[1］, 可疗伤止痛, 补肾强骨；外用消风祛斑[2］。其性味苦, 温。归肝、肾经。用于跌扑闪挫, 筋骨折伤, 肾虚腰痛,筋骨痿软, 耳鸣耳聋, 牙齿松动；外治斑秃, 白癜风[2］。其正品来源于水龙骨科(Polypodiaceae)植物槲蕨Drynaria fortunei (Kunze)J.Sm.的干燥根茎[2］。

光亮密网蕨, 曾为骨碎补的习用品, 为骨碎补同科植物水龙骨科(Polypodiaceae)植物光亮密网蕨Phymatodes lucida (Roxb.) Ching的干燥根茎[3］。别名为绿爬山虎、大蕨菜、猪毛蕨、青竹标。其性味涩、温、有小毒。可活血, 止痛, 接骨, 消肿。主治跌打损伤, 骨折[3］, 与骨碎补在治疗中医骨伤科疾病方面的功效相似。

骨碎补的主要有效化学成分之一为柚皮苷, 其药理作用研究较为广泛, 且对于治疗疾病机理方面研究相对深入。研究显示, 柚皮苷溶液可以提高成骨细胞株MC3T3-E1的增殖能力和分化能力[4］, 可以纠正T2DM大鼠的糖代谢和脂质代谢紊乱状况, 减轻胰岛素抵抗, 增强机体抗氧化能力, 对肝脏起到保护作用[5］。而曾作为骨碎补习用品的光亮密网蕨,因其药性有小毒, 在广西部分地区曾作为骨碎补药材使用,但光亮密网蕨中是否含柚皮苷及其具体含量的多少等, 这些问题在临床安全、有效用药的筛选使用中有重要意义。故设计试验检验光亮密网蕨中是否含柚皮苷及测定其中的具体含量, 具体方法如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器 高效液相色谱仪：日本岛津LC-10Avp高效液相色谱仪, SPDM-10Av二级管阵列检测器, Class-vp5.0色谱工作站。

1.2 试药 骨碎补从药店购买；光亮密网蕨由广西当地农民提供购得；柚皮苷购自中国药品生物制品鉴定所(批号：110722-2006610, 定性鉴别、含量测定中应用)；甲醇、乙腈均为色谱纯；水为重蒸水, 其他试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 对照溶液的制备方法 取柚皮苷对照品, 加甲醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液, 作为对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备方法 取骨碎补粉末0.5 g, 加甲醇30 ml, 加热回流1 h, 放冷, 滤过, 滤液蒸干, 残渣加甲醇1 ml使溶解, 作为骨碎补的供试品溶液。

取光亮密网蕨粉末0.5 g, 加甲醇30 ml, 加热回流1 h, 放冷、滤过、滤液蒸干、残渣加甲醇1 ml使溶解, 作为光亮密网蕨的供试品溶液。

2.1.3 薄层色谱条件 对上述三种溶液各精密吸取5 μl, 分别点于同一硅胶G薄层板上, 展开剂为甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(1∶12∶2.5∶3)的上层溶液, 薄层板经展开, 取出, 晾干,再喷三氯化铝试液, 后置紫外光灯(365 nm)下检视。

2.1.4 结果 紫外光灯(365 nm)下显示, 两种供试品的色谱中, 骨碎补的供试品色谱与对照品的色谱在相对应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点, 而光亮密网蕨的供试品色谱在对照品色谱相对应的位置上显示较微弱的荧光斑点。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件 美国热电C18色谱柱(Hypersi 填料,4.6×250 mm,5μm), 柱温设定30℃；进样量为10 μl, 流动相是甲醇-醋酸-水(35∶4∶65)；检测波长为283 nm, 流速1.0 ml/min。理论踏板数按柚皮苷峰计算, 应不低于3000。按此色谱条件测定, 柚皮苷的保留时间约为8 min。

2.2.2 对照品溶液的制备 取柚皮苷对照品适量, 精密称定, 置锥形瓶中, 加甲醇30 ml, 加热回流3 h, 放冷, 滤过, 滤液置50 ml量瓶中, 用少量甲醇分数次洗涤容器, 洗液滤入同一量瓶中加甲醇至刻度线摇匀即可。

2.3.3 供试品溶液的制备 取骨碎补粗粉约0.25 g, 精密称定, 置锥形瓶中, 加甲醇30 ml, 加热回流3 h, 放冷, 滤过, 滤液置50 ml量瓶中, 与对照品溶液的制备相同, 用少量甲醇分数次洗涤容器, 洗液滤入同一量瓶中, 加甲醇至刻度, 摇匀, 即得骨碎补供试品溶液。

取光亮密网蕨粗粉约0.25 g, 精密称定, 置锥形瓶中, 加甲醇30 ml, 加热回流3 h, 放冷, 滤过, 滤液置50 ml量瓶中,同法, 加甲醇至刻度, 摇匀, 即得光亮密网蕨供试品溶液。

2.3.4 结果 高效液相色谱结果经计算显示光亮密网蕨中柚皮苷的含量很少。

3 结果

上述试验结果表明：光亮密网蕨和骨碎补中均含有柚皮苷成分, 但和骨碎补相比, 光亮密网蕨中柚皮苷的含量较少。

4 讨论

该方法能够清晰显示出中药骨碎补与同科植物习用品光亮密网蕨中所含柚皮苷多少的不同, 方法简单, 试验结果明确, 具有一定的意义。同时试验结果表明光亮密网蕨中含柚皮苷但含量较少, 而作为骨碎补习用品的光亮密网蕨, 因其药性有小毒, 在已明确柚皮苷含量较少的情况下, 考虑到临床用药的安全、有效, 其能否作为骨碎补的代用品应做进一步的筛选考察。另外, 光亮密网蕨与骨碎补虽均可用于骨伤科疾病, 但两者的功效并不完全相同, 鉴于中药所含成份的多样性, 以及我国药用资源的严峻现状, 应对光亮密网蕨所含成份以及不同成份治疗疾病的机理进行深入研究, 以期发现光亮密网蕨的主要药用成份, 进而对其进行新的分类归属而不是将其作为骨碎补的习用品用于临床。

[1]徐国钧, 王强, 曾金虎, 等.中草药彩色图谱.福建:福建科学技术出版社,1989:298.

[2]国家药典委员会.中国药典(一部).北京：中国医药科技出版社,2010.

[3]谢宗万, 范崔生, 朱兆仪.全国中草药汇编.北京:人民卫生出版社,1975:617.

[4]丁佩惠, 唐琪, 陈莉丽.柚皮苷对小鼠成骨细胞MC3T-E1增殖、分化、和矿化得影响.中国中药杂志,2009,34(13):1712.

[5]周燕文, 时雪峰.柚皮苷对实验性2型糖尿病大鼠的作用研究.中国药师,2012,15(4):471.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.02.162

2014-11-03］

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