冬春两季应加强猪流行性腹泻的综合防控

刘 钊，曾智勇，王伟丞，代振江

（1.贵州大学 动物科学学院，贵州 贵阳 550025；2.贵州省动物疫病研究室，贵州 贵阳 550025）

冬春两季应加强猪流行性腹泻的综合防控

刘 钊1，曾智勇2*，王伟丞2，代振江2

（1.贵州大学 动物科学学院，贵州 贵阳 550025；2.贵州省动物疫病研究室，贵州 贵阳 550025）

冬春两季常是“冬痢”的高发季节，近2年来该病呈现出仅以猪流行性腹泻病毒（PEDV）感染为主，而非之前的传染性胃肠炎病毒（TGEV）或TGEV和PEDV共感染为主，临床上主要表现为严重腹泻、脱水和急剧消瘦死亡为主要特征，现已给中国、美国、日本等国家的养猪业造成了巨大的损失，欧盟目前也已责令严防PEDV的传入。尽管该病在我国主要于2012前后呈现暴发流行，现多为散发，但入冬后仍需引起重视，采取积极措施予以综合防控。

猪流行性腹泻；冬痢；综合防控

冬春两季常是“冬痢”的高发季节，造成“冬痢”的主要原因是由传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）和轮状病毒(RV)等单独或混合感染引起的，但目前主要是由猪流行性腹泻病毒引起[1]。猪流行性腹泻在世界范围内流行极为广泛，如韩国、泰国、越南、日本等均有本病发生的报道。2010—2013年PEDV在中国各地呈暴发流行，造成大量哺乳仔猪的死亡，严重影响了我国养猪业的健康发展。霍金耀等人对采集于河南、山西、安徽和河北4个省份的82家猪场的粪样进行双重RT-PCR检测，结果表明PEDV阳性率高达62.2%[2]。2010—2012年，采自华中地区11个城市的182家猪场的腹泻粪样，经RT-PCR检测，PEDV阳性率高达60.44%[3]；截至2014年6月16日，猪流行性腹泻（PED）疫情在日本已扩散至38个道县的766家农场，共暴发766起疫情，98万多头猪感染，28万多头猪死亡；该病自2013年4月在美国首次发现以来，截至 2014 年6月11日，美国已有30个州的实验室在7 250个猪群中检测到PEDV阳性病例，仅2013年因PED就造成约300万头仔猪死亡，持续到2014年预计可造成700万头仔猪的死亡[4]。目前，美国及欧盟相关国家正在积极应对PEDV扩散，并对PEDV进行了大量的研究。冬春季节正值该病的高发期，尽管该病在我国主要于2012年前后呈现暴发流行，现多为散发，但仍需引起重视，采取积极措施予以综合防控。

1  病原学特征

PEDV属于冠状病毒科冠状病毒属，为球形囊膜病毒(95～190 nm)。该病毒基因组是单股正链RNA，基因组长为27 000～33 000个核苷酸(nt)，靠近3′端5 kb区域内有5个主要的开放阅读框(ORF)，可编码4种结构蛋白，即S蛋白(spike protein)、E蛋白(Envelope protein)、M蛋白(membrane protein)和N蛋 白(nucleo protein)。PEDV引起的严重腹泻脱水是导致病猪死亡的主要原因。仔猪在感染PEDV时，PEDV在仔猪空肠中后段、回肠、盲肠黏膜绒毛柱状上皮细胞内复制、增殖，由于病毒增殖首先造成细胞器的损伤，继而出现细胞功能障碍，破坏肠黏膜柱状上皮细胞，引起肠绒毛裸露、断裂、融合及肠上皮细胞内各种酶类活性降低或失活，导致营养物质吸收障碍、呈现渗透性腹泻，造成猪只脱水、腹泻，甚至衰竭、死亡[5]。

2  诊断方法

猪流行性腹泻常发于寒湿较重的季节，近年来多呈地方性流行。不同年龄段的猪对该病毒均易感，病毒感染后对初生仔猪的危害最大，常致其整窝发病，病死率极高。由于PEDV、TGEV以及RV感染所致的临床症状、流行特点和病理变化极其相似，难以根据临床表现予以准确区分，所以应用实验室手段对“冬痢”病原，尤其对PEDV进行快速准确的确诊，对于目前该类疫病的防控具有重要意义。

目前，针对上述病原有多种检测方法，如病毒的分离鉴定、反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）、荧光定量RT-PCR和胶体金免疫技术等。其中，反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法已成为应用最为广泛的方法之一。

王伟丞等[6]根据分离到的GZ-ZY株的M基因序列建立了PEDV的RTPCR检测方法，根据GenBank中登录的PEDV参考毒株M基因序列，利用PrimePremier 6.0设计1对特异性引物，扩增目的片段大小约为681 bp。上游引物：5’-TCGGAATTCATGTCTA ACGGTTCT-3’，下游引物：5’-ACGC TCGAGTTAGACTAAATGAAG-3’，用所设计的特异性引物进行RT-PCR扩增，反应体系为50µL，其中2 ×1Step Buffer25µL，总RNA 5µ L，PrimeScriptTMOne Step Enzyme Mix 2µL，PEDV上下游引物各1µ L，RNase Free H2O 16µL。反应条件：50 ℃ 40 min；94 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35个循环；72 ℃延伸10 min。此法可有效检出粪样及细胞中的PEDV。此 外，D.S.Song等建 立的PEDV、TGEV、RV的多重RT-PCR方法检测157份仔猪临床腹泻病料，PEDV、TGEV、RV阳性率分别为26.3%、2.7%和13.2%，该方法敏感性高、特异性强，具有较高的临床实用价值[7]。

尽管病毒分离鉴定是疫病确诊的经典方法，但由于PEDV的分离培养敏感细胞主要系Vero传代细胞，且培养条件较为苛刻，难以实现临床样品的快速准确诊断。

3  综合防控

该病的发生主要是冬春交替之际，寒湿困于脾胃，机体抵抗力下降，病毒侵入机体而引起，因仔猪脾胃发育不全故最易发病[8]。当前猪流行性腹泻的防治仍无特效方法，所以加强饲养管理，加强防疫和对症治疗显得尤为重要。

3．1 加强饲养管理

3.1.1 完善消毒措施

加强常规清洗与消毒。若猪场暴发猪流行性腹泻，应首先迅速隔离发病猪只，并严密观察对症治疗防止脱水；对猪舍进行彻底的清洗和消毒。病死猪需经深埋、泼洒烧碱或生石灰等进行无害化处理。

3.1.2 注意气候变化

该病多发于冬春季节。原因是冬春季节气温变化频繁、气温比较低，如果此时猪舍保温措施不够，导致仔猪机体抵抗力下降，很容易诱发仔猪的流行性腹泻，因此一定要注意猪舍保温。

3.1.3 防止交叉感染

应严格控制猪场内外的猪和人员流动，进出车辆要进行严格消毒。禁止生产区工作人外出，严禁饲养员之间串舍。新引进的种猪，必须隔离饲养30 d以上，确认健康后才能入群饲养，最好是实行“全进全出”的饲养方式。

3.1.4 提高猪群的营养水平

饲喂优质饲料，适当提高猪群日粮的蛋白质、氨基酸、维生素和微量元素等水平；给仔猪饲料添加柠檬酸，改善仔猪肠道微生态平衡，保证仔猪充足的饮水，可以在一定程度上降低PED的发生率[9]。

3．2 免疫预防

3.2.1 疫苗免疫

告别了依赖国外高价疫苗的时代，目前国内有很多生物制品公司都已经研制出免疫猪流行性腹泻病毒的疫苗，多为基于CV777株的猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗。一般主动免疫接种后7 d产生免疫力，免疫期为6个月。仔猪被动免疫的免疫期至断奶后7 d。使用方法为按说明书上的头份、剂量配制好疫苗后，后海穴位注射，进针时保持与直肠平行或稍偏上。妊娠母猪于产仔前20～30 d每头注射1.5 mL；其所生仔猪于断奶后7～10 d每头注射0.5 mL。未免疫母猪所产3日龄以内仔猪每头注射0.2 mL。体重25～50 kg育成猪每头注射1 mL，体重50 kg以上成猪每头注射1.5 mL。进针深度：3日龄仔猪0.5 cm，随猪龄增大而加深，成猪4 cm。

3.2.2 关于免疫预防的一点思考

1）返饲的问题。很多学者在暴发 PED 后主张采用返饲的方法，但很多人并没有掌握正确的方法。返饲只是个紧急应对措施，必须在短期内集中进行，使种猪群尽快度过带毒和排毒期，千万不能把返饲当作一种免疫方法应用[10]。鉴于其危险度，目前笔者不建议使用返饲进行PEDV的免疫。

2）疫苗免疫效果的检测。酶联免疫吸附试验（ELISA）是世界卫生组织（WHO）推荐使用的检测病毒的标准方法。此法具有敏感性强、特异性强、简便、快速等优点，每次可测多个样品，特别适于基层猪场大批猪血清样品抗体水平的普查。但是目前市面上还没有商业化的猪流行性腹泻的ELISA试剂盒以供使用，亟待研究开发。

3．3 治疗与保健

本病无特效药，主要是对症治疗。猪只被感染后，如果不予以相应能量物质的补充，会导致猪只消耗自体营养储备，加剧机体免疫水平下降，因此，应当对有症状和无症状的猪都进行补液，补充易消化、适口性好的饲料，增加营养，增强体质。

4  “血浆蛋白粉”传播源的不确定性

2011年起至今，猪流行性腹泻并未离开我们的视野，它暴发在大洋彼岸。2013年5月，猪流行性腹泻在美国、加拿大先后暴发。加拿大食品检验局(CFIA)发布公告称，血浆蛋白粉有可能是引发猪流行性腹泻的罪魁祸首。血浆蛋白粉营养全价、平衡，富含多种功能性蛋白和未知促生长因子，能提高消化酶的分泌量和活性，提高饲料利用率，并且可以在一定程度上缓解应激。但是也有学者认为：饲料中的蛋白质含量已经足够，如果再添加血浆蛋白粉，会造成机体蛋白质摄入量过多，蛋白质在体内的分解产物聚积也会影响正常的肝肾功能，增加肝肾负担，同时还会造成免疫力低下；过多还容易造成仔猪腹泻；血浆蛋白粉如果灭活不彻底，很有可能带有某些病毒，造成疾病传播。因此，为了规范使用血浆蛋白粉，中国农业部制定了《饲料原料目录》并于2013年1月1日起施行，其中明确规定：以屠宰食用动物得到的新鲜血液分离出的血浆为原料，经灭菌、喷雾干燥获得的产品。原料应来源于同一动物种类，不得使用发生疫病和变质的动物血液。

[1] 徐汝宪，吴柳锋，张世广，等. 冬春季仔猪腹泻的病因及防控措施[J]. 中国畜牧兽医文摘， 2014(3)： 156.

[2] 张海明，田野，王艳丽，等. 猪流行性腹泻病毒流行病学调查综述[J].猪业科学， 2014，31(3)： 90.

[3] 杨丽梅， 马力， 徐倩倩， 等. 我国猪病毒性腹泻的诊断与流行病学调查研究概况[J].动物医学进展， 2014，35(2)：115-119.

[4] 朱迪国，宋建德，袁丽萍，等. 2013—2014年全球猪流行性腹泻重大疫情分析[J].中国动物检疫， 2014(10)：42-46.

[5] 杨德全，鞠厚斌，葛菲菲，等. 猪流行性腹泻病毒研究现状[J].畜牧与兽医，2013， 45(8)： 110-114.

[6] 王伟丞，曾智勇，梁海英，等. 猪流行性腹泻病毒贵州株的分离及M基因序列分析[J].贵州农业科学， 2014，42(6)：101-103.

[7] Song D S，Kang B K，Oh J S，et a1.Multiplex reverse transcription-PCR for rapid differential detection of porcine epidemic diarrhea virus，transmissible gastroenteritis virus，and porcine group A rotavirus[J].J Vet Diagn Invest，2006，18(3)：278-281.

[8] 张攀.猪流行性腹泻病毒细胞培养适应的初步研究[D].上海：东华大学，2014.

[9] 郭锐，田永祥，周丹娜，等. 猪流行性腹泻的综合防制[J]. 国外畜牧学：猪与禽， 2013，33(10)： 85-87.

[10] 陈志林，卫恒习，李 莉，等. 返饲对仔猪流行性腹泻的防控效果[J].猪业科学， 2014，31(5)： 132-135.

2014-11-21）

刘钊（1989-），男，在读硕士，研究方向：动物传染病病原分子生物学。E-mail:491486510@qq.com

曾智勇（1978-），男，教授，博士，硕士生导师，从事动物传染病病原分子生物学研究。