红景天苷对大鼠肠系膜动脉舒缩作用及调控机制的研究*

孙卫卫，徐 鹏，崔英凯，刘海燕，曹雪滨△

(1．河北北方学院，河北张家口 075000;2．解放军第252医院心内科，河北保定 071000)

红景天苷对大鼠肠系膜动脉舒缩作用及调控机制的研究*

孙卫卫1，徐 鹏2，崔英凯2，刘海燕2，曹雪滨2△

(1．河北北方学院，河北张家口 075000;2．解放军第252医院心内科，河北保定 071000)

目的:探讨红景天苷(salidroside，SAL)对大鼠离体肠系膜动脉的舒缩作用及调控机制。方法:应用DMT微血管张力测定法和ELISA法研究红景天苷对血管的影响及机制。结果:SAL对KCl预处理的血管环起收缩作用;对PE预处理的血管起舒张作用，其中内皮完整血管比去内皮血管舒张明显;L-NAME抑制SAL舒血管，亚甲蓝、吲哚美辛对SAL舒血管无影响;SAL升高血管NO和NOS。结论:SAL对血管具有收缩和舒张双重作用，缩血管可能与电压依赖性钙通道有关;舒血管可能与抑制内钙释放有关，具有与NO释放和NOS合成有关的内皮依赖性，但与环氧合酶途径无关。

红景天苷;肠系膜动脉;NO;Ca2+;DMT系统

红景天被誉为“雪域人参”，具有养心安神、补肾、调经等功效。研究发现，红景天具有抗疲劳、抗氧化、强心改善循环、护肝、抗衰老、抗缺氧预防高原反应、抗辐射、抗病毒、抑制肿瘤等作用［1］。红景天苷(salidroside，SAL，C14H20O7，分子量300.3)是红景天的主要有效成分之一，具有抗缺氧、抗氧化应激、保护血管内皮、抑制脑缺血再灌注损伤、改善神经细胞损伤、改善心肌缺血、抗心肌细胞凋亡、抑制钙超载、调节免疫等多种药理作用［1-2］。离体血管舒缩功能的调节大致包括内皮细胞机制，即通过NO等血管舒张因子介导舒血管作用与平滑肌细胞机制，即通过外钙内流及内钙释放调节血管平滑肌细胞内Ca2+含量。目前红景天苷对血管作用机制的研究多集中在大容量血管上，而对阻力血管的作用及机制未见报道，同时鉴于外周阻力血管舒缩功能在血压及外周组织、器官血流量的调节中具有重要作用。故本实验旨在探讨红景天苷对离体肠系膜动脉的舒缩作用及调控机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 设备 丹麦DMT微血管张力测定仪(DMT)，澳大利亚Powerlab生物信号采集处理系统(AD Instrumengts公司)。

1.1.2 药物与试剂 乙酰胆碱(acetylcholine，ACh)、去氧肾上腺素(phenylephrine，PE)、左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)、亚甲蓝(methylene blue)、吲哚美辛(indomethacin，Indo)购于Sigma公司。红景天苷(salidroside，SAL)购于上海英轩生化试剂有限公司，KCl等无机试剂均为国产分析纯。

1.1.3 实验动物 SD雄性大鼠，体质量300 ～350 g，购于北京军事医学科学院实验动物中心。

1.2 方法

1.2.1 大鼠肠系膜动脉环制备［3］SD大鼠断头处死后迅速取出带系膜肠管。显微镜下分离血管2级动脉分支，剪取1.5～2mm动脉环。根据实验需要，用大鼠触须摩擦血管环内表面去内皮。将肠系膜动脉环固定于DMT浴槽内传感器钳夹上，已加入Krebs-Henseleit(K-H)液(mmol·L－1:NaCl118，KCl4.7，KH2PO41.2，MgSO4·7H2O 1.2，NaHCO325，CaCl22.5，Glucose 10，pH=7.4)的浴槽中恒速通以95%O2和5%CO2混合气体，保持温度37℃，血管环在K-H液中平衡20 min后标准化，经过标准化的血管环孵育45 min，每隔15 min换1次K-H液。用KCL(60 mmol·L－1)预收缩，待收缩幅度稳定后洗脱，重复2次，以诱发血管的最大收缩幅度。待血管稳定后加入PE(1 μmol·L－1)收缩，收缩达峰值稳定后，加入ACh(1 μmol·L－1)观察血管环的舒张反应。若加ACh后使PE预收缩的血管舒张＞90%，可以认为内皮完整，＜5%认为去内皮成功［4］。设定PE引起的最大收缩幅度为100%，已加入药物引起的血管张力幅度与PE引起的最大收缩幅度的比率反映血管张力变化［5］。

1.2.2 累积浓度SAL对KCl预收缩血管环的影响 以不同累积浓度的SAL直接作用于KCl(60 mmol·L－1)预收缩的血管环，加药组(n=6)采用累积加药法，每2 min增加 SAL浓度(10－8，10－7，10－6，10－5，10－4mmol·L－1)，加入SAL后观察SAL对血管环的作用。对照组(n=6)以K-H液代替SAL累积加入，并比较加药组与对照组之间血管张力变化。

1.2.3 累积浓度SAL对PE预收缩血管环的影响 以不同累积浓度的SAL分别作用于PE(1 μmol·L－1)预收缩的内皮完整血管环和去内皮血管环，内皮完整给药组(n=6)和去内皮给药组(n=6)均采用累积加药法，具体方法如“1.2.2”所述，比较内皮完整组与去内皮组之间血管张力变化。K-H液对照组(n=6)以K-H液代替SAL累积加入，ACh阳性对照组(n=6)以ACh代替SAL累积加入。比较内皮完整给药组与K-H液对照组及与ACh阳性对照组之间血管张力变化。

1.2.4 SAL对分别经L-NAME、吲哚美辛、亚甲蓝孵育后PE预处理的内皮完整血管环的影响分别以L-NAME、吲哚美辛、亚甲蓝(0.1 mmol·L－1)孵育内皮完整血管环20min后，以PE(1 μmol·L－1)预收缩，观察累积浓度SAL的血管舒张作用;K-H液对照组(n=6)以K-H液代替SAL累积加入。并分别与K-H液对照组比较，观察血管张力变化。

1.2.5 肠系膜动脉组织中NO和NOS的测定

取SD大鼠20只，按随机数字表法分为SAL组和对照组，制备肠系膜动脉标本，显微镜下分离所有1 ～3级肠系膜动脉(每只大鼠分离出的血管作为一个标本)，放入浴槽中并加入10 mL K-H液，恒速通以95%O2和5%CO2混合气体，SAL组中加入SAL (10－4mol·L－1)，对照组以K-H液代替SAL加入，37℃孵育30 min后取出标本，血管以冷生理盐水冲洗干净，滤纸吸干称重、剪碎，以9倍冷生理盐水一起在冰浴下匀浆，匀浆液以3000 r/min离心15 min，取上清液。利用酶联免疫吸附试验(ELISA)法分别测定2组中NO和NOS的含量。

1.2.6 统计学方法 实验结果用SPSS 17.0软件进行统计分析，全部数据以均数±标准差(±s)表示，2组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。

2 结果

2.1 累积浓度SAL对KCl预收缩血管环作用

图1显示，内皮完整血管环给药组和对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，给药组具有30%以上的收缩率，说明SAL可收缩KCl预处理的大鼠血管环。

2.2 累积浓度SAL对PE预收缩血管环的作用

图2显示，内皮完整给药组分别和K-H液对照组、ACh阳性对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。内皮完整给药组具有40%以上的舒张率，说明SAL可舒张PE预收缩的内皮完整血管环，其舒张强度弱于ACh。去内皮给药组与内皮完整给药组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，说明SAL可舒张PE预收缩的去内皮血管环，但舒血管能力降低。

2.3 SAL对分别经L-NAME、吲哚美辛、亚甲蓝孵育后PE预处理的内皮完整血管环的影响

图3显示，L-NAME组与K-H液对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)，在SAL的浓度达10－4mol·L－1时血管舒张率由孵育前的48.75%下降至21.45%，说明经过一氧化氮合酶抑制剂L-NAME预处理后，SAL的舒血管作用受到明显抑制。亚甲蓝组与吲哚美辛组分别与K-H液对照组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.4 SAL对肠系膜动脉组织中NO和NOS含量的影响

图4显示，SAL组测得NO和NOS含量均高于对照组，2组比较差异有统计学意义(PNO＜0.05，PNOS＜0.01)。

3 讨论

SAL及其制剂能够调节动脉张力，是一种新兴的血管活性药物，目前在临床上已广泛用于冠心病、心力衰竭、心律失常、高血压、脑血管病的防治。本实验在首次观察SAL对离体大鼠肠系膜阻力血管舒缩作用时发现，红景天苷对KCl预处理的血管有明显缩血管作用，对PE预收缩的肠系膜血管环有显著舒张作用，但舒张效果不如ACh，可见SAL对阻力血管具有收缩和舒张双重调节作用。

KCl和PE虽然都是通过增加细胞内钙离子浓度引起血管收缩，但机制各异，KCl引起平滑肌细胞去极化，激活细胞膜上的电压依赖性钙通道，导致细胞外钙内流。而PE主要通过作用于α1-肾上腺素受体，激活磷脂酶C，产生二酰基甘油(DAG)和三磷酸肌醇(IP3)，其中IP3与肌浆网IP3受体结合引起肌浆网钙库内钙释放，胞内钙离子浓度升高，此过程称为IP3受体诱导的钙释放［6］。而DAG可以通过激活蛋白激酶C(PKC)、磷酸化L型钙通道，使外钙内流增加［7-8］。但以前者为主，后者发挥作用甚小。

在本实验中，SAL使KCl预处理的血管收缩，说明SAL对外周阻力血管的收缩机制可能与电压依赖性钙通道有关。这与之前张勇等［9］研究发现，红景天苷对KCl预收缩的兔离体胸主动脉环具有舒张作用不同。基于不同部位，血管分布的多少、形态、功能、种类等各不相同，受体的分布、机制也存在差异［10］，故推测这种不同可能与种属、部位器官、血管粗细差异有关。

SAL能够舒张PE预收缩的去内皮血管，提示SAL可能主要抑制PE介导的内钙释放。SAL舒张PE预收缩的内皮完整血管，提示SAL舒血管作用还可通过内皮源性舒血管因子介导。

一般认为，内皮源性舒血管因子主要包括NO、前列腺素类物质(如PGI)、内皮依赖性超极化因子(EDHF)［11］。其中NO是前体L-精氨酸在一氧化氮合酶的作用下生成的，可激活血管平滑肌细胞的可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)，进而增加环鸟苷酸(cGMP)在胞内的水平，cGMP浓度的增加可抑制细胞外Ca2+内流和Ca2+释放，降低胞内钙离子浓度或敏感性，引起血管平滑肌舒张［12-13］。而前列环素(prostacyclin，PGI2)是花生四烯酸在花生四烯酸限速酶环氧合酶(cyclooxygenase，COX)的作用下转变成的另一种内皮舒张因子，它可作用于血管平滑肌产生环磷腺苷酸(cAMP)，引起细胞内钙离子浓度的下降，使血管舒张［14］。可见，L-NAME和亚甲蓝二者抑制NO舒血管作用是通过不同途径实现的，吲哚美辛是通过抑制PGI2合成，从而使前列环素舒血管活性降低。

此外，去除内皮或经L-NAME预处理SAL的舒血管作用明显减弱，而亚甲蓝、吲哚美辛孵育对SAL的舒血管作用无影响。因此，推测SAL舒血管作用存在部分内皮依赖性，并通过ELISA法进一步证实这与血管内皮释放NO和促进NOS合成有关，与前列环素的合成和释放无关。

综上所述，SAL对大鼠离体肠系膜阻力血管的双重调节作用(收缩和舒张)可能由多种机制共同参与，即缩血管机制主要与电压依赖性钙通道的开放有关。舒血管机制主要包括与NO释放、NOS合成有关的内皮机制和与抑制细胞内钙释放有关的非内皮机制，但SAL对阻力血管的这种双重调节机制仍有待我们进一步的深入研究。

［1］ 申佳佳，王真，李电东，等．红景天有效成分的药理作用及机制的研究进展［J］．国际老年医学杂志，2012，33(5):206-210．

［2］ 靳荣光，王秋娟，刘继平，等．红景天苷治疗冠心病相关药理作用研究进展［J］．西北药学杂志，2013，28(2):213-215．

［3］ LiLu，WuTao， REN Lei-ming． Exhaustiveswimming differentially inhibits P2X1receptor-andα1-adrenoceptormediated vasoconstriction in isolated rat arteries［J］．Acta Pharmacologica Sinica，2012，33:221-229．

［4］ 陈强，朱欢欢，张媛媛，等．辣椒素对大鼠肠系膜阻力血管的舒张作用及其机制［J］．浙江大学学报:医学版，2013，42 (2):178-183．

［5］ 张博男，储金秀，韩淑英．荞麦花叶总黄酮的舒张血管作用及其机制［J］．中国药理学通报，2010，26(7):952-956．

［6］ Eckert R E，Karsten A J，Utz J，Ziegler M．Regulation of renal artery smooth muscle tone by alpha 1-adrenoceptors:role of voltage-gated calcium channels and intracellular calcium stores ［J］．Urol Res，2000，28(2):122-127．

［7］ Ford W R，Broadley K J．Effects of adenosine receptor agonists on induction of contractions of phenylephrine of guinea-pig aorta mediated via intra-or extracellular calcium［J］．Gen Pharmacol，1999，33(2):143-50．

［8］ Kamishima T，Quayle JM．Ca2+-induced Ca2+release in cardiac and smooth muscle cells［J］．Biochem Soc Trans，2003，31 (5):943-946．

［9］ 张勇，颜天华，马莹，等．红景天苷对离体胸主动脉环的舒张作用及其机制［J］．中国新药杂志，2009，18(17):1672-1676．

［10］ 王庭槐．血管生理［M］//姚泰，曹济民，潘小力．生理学．北京:人民卫生出版社，2005:170-191．

［11］ Zintzaras E，Kitsios G，Stefanidis I．Endothelial NO synthase gene polymorphisms and hypertension:a meta-analysis［J］．Hypertension，2006，48(4):700-710．

［12］ 刘洪，李荣亨．气虚血瘀证与血管内皮细胞相关因子的研究进展［J］．中国中医基础医学杂志，2005，11(7):553-556．

［13］ Friebe A，Koesling D．Regulation of nitric oxide-sensitive guanylyl cyclase．Circ Res，2003，Acta Pharmacol Sin，2012，33(2):221-229．

［14］ Feletou M，Huang Y，Vanhoutte PM．Endothelium-mediated control of vasculartone:COX-1 and COX-2 Products［J］．Br J Pharmacol，2011，164(3):894-912．

Vasomotor Effect of Salidroside on Rat Mesenteric Artery and Its Regulatory Mechanisms

SUN Wei-wei1，XU Peng2，CUI Ying-kai2，LIU Hai-yan2，CAO Xue-bin2△
(1．Hebei North University，Zhangjiakou 075000，China; 2．Department of Cardiology，No．252 Hospital of PLA，Baoding 071000，China)

Objective:To observe vasomotor effect of salidroside(SAL)on rat mesenteric artery，and to explore its underlying regulatory mechanisms．Method:Tension was measured by DMT system to evaluate the vasomotor effect of SAL on rat endothelium-intact and endothelium-denuded mesenteric aortic rings．Different antagonists and ELISA method were used to illustrate the mechanisms of vasomotor effect of SAL．Result:① SAL had significantly vasoconstrictive effect on mesenteric aortic rings precontracted by KCl．②SAL relaxed endothelium-intact and endothelium-denuded mesenteric artery precontracted by PE in concentration-dependent manner，while the vasodilation of endothelium-intact mesenteric artery was significantly stronger than that of endothelium-denuded one．③L-NAME attenuated the vasodilation of endothelium-intact mesenteric artery induced by SAL，while neither indomethacin nor methylene blue affected it．④ Using ELISA，SAL can significantly increase NO and NOS of mesenteric artery．Conclusion:The results indicate that SAL plays a dual role of vasoconstriction and vasodilation in regulating mesenteric artery．Vasoconstriction may be associated with voltage-dependent calcium channel，while vasodilation may be associated with inhibition of intracellular calcium release．Besides，vasodilation shows endothelium dependence，which is related to NO released and NOS synthesized，regardless of the COX pathway．

Salidroside;Mesenteric artery NO;Ca2+DMT System

R285．6

A

1006-3250(2015)03-0345-03

2014-12-19

全军医学科技“十二五”科研项目及重点项目(13WS11J058)-部队官兵应激情况下重要器官损伤的预警与综合防治;后勤科研项目、面上项目(CBJ13J006)-力竭心脏损伤的钙通道调控机制和药物干预作用的研究

孙卫卫(1986-)，女，河北保定人，在读硕士，从事中医药的临床与研究。

△通讯作者:曹雪滨(1966-)，男，河北保定人，主任医师，教授，医学博士，研究生导师，从事心血管药理与临床研究，Tel:0222-58548，E-mail:cxb252@aliyun．com。