刺五加注射液对人乳腺癌细胞体外抑制的实验研究

武均宜肖 锋王恩军靳 祎*

1.中南大学湘雅医学院，湖南 长沙 410000；2.河北大学基础医学院，河北 保定 071000

刺五加注射液对人乳腺癌细胞体外抑制的实验研究

武均宜1肖 锋2王恩军2靳 祎2*

1.中南大学湘雅医学院，湖南 长沙 410000；2.河北大学基础医学院，河北 保定 071000

目的：探讨刺五加注射液对人乳腺癌细胞MCF－7的体外增殖的影响。方法：采用MTT法测定了不同剂量的刺五加注射液对MCF－7细胞的体外增殖的抑制作用，并通过倒置显微镜观察其细胞形态的变化。结果：刺五加注射液可以抑制MCF－7细胞的增殖，量效关系良好；形态学观察到细胞凋亡。结论：刺五加注射液对MCF－7细胞增殖具有较强的抑制作用。

刺五加注射液；人乳腺癌细胞；MCF－7；增殖作用；抑制作用

刺五加又名五加参，为五加科植物刺五加的根和茎。现代医学研究表明刺五加具有抗肿瘤、抗氧化、抗血栓、提高免疫力等多方面的的作用［1－2］。据报道，刺五加及其提取物对肺癌、胃癌、艾氏腹水癌及白血病等多种肿瘤均有较强抑制作用，还可改善肿瘤化疗患者的免疫状况，提高机体的抗肿瘤功效［3－4］。本试验测定不同剂量的刺五加注射液对人乳腺癌MCF－7细胞的抑制作用，为刺五加抗肿瘤作用的研究及今后的临床应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料 刺五加注射液（批号：2007111411，黑龙江省完达山制药厂）；顺铂（批号：04080212，齐鲁制药有限公司）；MCF－7细胞 （由河北大学生命科学学院提供）；四甲基偶氮唑盐（MTT）、RPMI 1640培养液（美国Sigma公司）；0.25%胰蛋白酶消化液（美国HyClone公司）。二甲亚砜（DMSO，上海紫一试剂厂）；胎牛血清 （中国医学科学院生物工程研究所）。

1.2方法

1.2.1 细胞的培养 MCF－7细胞复苏后，贴壁生长于含10%胎牛血清，青霉素和链霉素各100U／ml的RPMI 1640完全培养液中，并置于37℃，5%CO2的培养箱中培养。

1.2.2 刺五加注射液对细胞增殖抑制率的影响 采用MTT法，将MCF－7细胞按照5×104个／ml的密度接种到96孔培养板中，试验分为以下几组：刺五加注射液组 （10、20、40μl），阴性对照组加相同剂量的生理盐水，阳性对照组加50μg／m l的顺铂，终体积为200μl／孔。培养24 h后加入5μg／μl的MTT液，继续培养4h，弃上清液，加入DMSO后磁力震荡15min，用酶标仪测定各孔吸光度A值，测定波长λ＝570nm，参考波长λ＝630nm，计算细胞增殖的抑制率：抑制率 （%）＝（对照组A值－实验组A值）／对照组A值×100%

1.2.3 细胞形态学观察 取生长状态良好的MCF－7细胞接种于48孔细胞培养板内，培养24h，实验组加入40μl／孔的刺五加注射液，对照组加入生理盐水，培养24h后在倒置显微镜下观察细胞的形态。

1.2.4 统计学分析 数据采用The SAS system 6.12统计软件进行分析。计量数据以均数±标准差表示，组间比较采用单因素方差分析，P＜0.05表示有统计学意义。

2 结果

2.1 对MCF－7细胞增殖的抑制作用 由表1可知，MCF－7细胞经不同剂量的刺五加注射液作用24h后，细胞增殖抑制率显著增加，显示较明显的细胞毒性反应，且随着药物剂量的增加，抑制率逐渐增强，显示良好的量效关系。与阴性对照组比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

2.2细胞形态学变化刺五加注射液作用MCF－7细胞后，形态学发生了显著变化（见图1）。阴性对照组MCF－7细胞贴壁良好，呈不规则长梭形或多角形，排列无方向性，细胞边缘清晰。实验组细胞经刺五加注射液作用后，细胞多数呈圆形，胞膜起皱，培养基内悬浮着较多的细胞和碎片。

3 讨论

刺五加注射液为经水醇法提取制成的灭菌制剂，含黄酮、刺五加多糖和刺五加苷等多种有效成分，已广泛应于临床多种疾病的治疗［5］。有研究显示，刺五加注射液对体外培养HeLa细胞、A549细胞的增殖均有较强的抑制作用，并能促进细胞凋亡［6、7］。本试验研究表明，刺五加注射液对体外培养的人乳腺癌MCF－7细胞增殖有较强的抑制作用，10μl／孔、20μl／孔、40μl／孔的刺五加注射液作用细胞24h后，细胞抑制率分别48.18%、60.23%和84.67%，呈现良好的剂量效应关系。说明刺五加注射液对MCF－7细胞的抑制作用在此范围内与其剂量呈正相关，即随着药物剂量的增加，抑制作用明显增强。而刺五加注射液对MCF－7细胞的抑制作用及详细机制还有待于今后深入研究。

［1］董梅，李廷利.刺五加化学成分及药理作用研究进展 ［J］.中医药学报，2011，39（3）：98－100.

［2］许妍姬.刺五加对痴呆模型小鼠记忆障碍及MDA含量、SOD和乙酰胆碱脂酶活性的影响［J］.中国老年学杂志，2010，9（30）：1238－1240.

［3］丰俊东，林代华，刘希琴，等.刺五加皂苷对人肝癌细胞株血管内皮生长因子表达的抑制作用［J］.中药新药与临床药理，2007，18（5）：339－341.

［4］Yoon TJ，Yoo YC，Lee SW，et al.Anti－metastatic activity of acanthopanax senticosus extract and its possible immunologicalmechanism of action［J］. JEthnopharmacol，2004，93（2）：247.

［5］杜秀芳，刘伟娜，詹文红.刺五加注射液的临床应用进展 ［J］.现代中西医结合杂志，2007，16（24）：3603－3604.

［6］王倩，赵刚.刺五加注射液诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡机理的研究［J］.公共卫生与预防医学，2013，24（2）：13－17.

［7］靳祎，王恩军，朱宝成.刺五加注射液对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用［J］.军医进修学院学报，2009，30（5）：729－730.

R285.5

A

1007－8517（2015）11－0014－02

2015.03.26）

河北省中医药管理局科研计划项目（2009061）。

武均宜（1995－），女，大学本科，医学检验专业，E-mail：wujunyi1688＠163.com。

靳祎（1977－），女，副教授，从事抗肿瘤中药及化学生物学研究。E-mail：jinyi2009＠163.com。