绒癌细胞株BeWo合体化后对不同化疗药物敏感性变化的研究

林耀华，安瑞芳，易莉莎，张勇华

(1.南华大学附属第一医院，湖南 衡阳421001；2.西安交通大学医学院第一附属医院，陕西 西安 710061；3.广州市妇女儿童医疗中心，广东 广州 510623)

绒癌细胞株BeWo合体化后对不同化疗药物敏感性变化的研究

林耀华1，安瑞芳2，易莉莎3，张勇华2

(1.南华大学附属第一医院，湖南 衡阳421001；2.西安交通大学医学院第一附属医院，陕西 西安 710061；3.广州市妇女儿童医疗中心，广东 广州 510623)

目的 通过检测绒癌细胞株BeWo合体化前后对不同化疗药物敏感性的差异，探讨滋养细胞合体化与恶性滋养细胞肿瘤耐药的关系，为临床恶性滋养细胞肿瘤，尤其是耐药恶性滋养细胞肿瘤的治疗提供新的思路和方法。方法 利用forsoklin诱导绒癌细胞株BeWo融合；应用逆转录PCR(RT-PCR)检测Syncytin、Survivin基因在forskolin作用0、24h、48h、72h的绒癌细胞株BeWo中的表达；应用蛋白质印迹法检测Survivin、增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen，PCNA)蛋白在forskolin作用0、24h、48h、72h的绒癌细胞株BeWo中的表达；应用噻唑蓝比色分析实验(MTT)检测forskolin作用0、24h、48h、72h的绒癌细胞株BeWo的增殖以及绒癌细胞株BeWo融合前后对5-氟尿嘧啶(5-Fu)、甲氨蝶呤(MTX)、顺铂等不同化疗药物的敏感性。结果 ①forskolin作用后的BeWo细胞株中Syncytin基因的表达增强，且随着forskolin作用时间的延长，Syncytin的表达越强，于48小时达到高峰；forskolin作用后的BeWo细胞株中Survivin基因的表达下降，且随着forskolin作用时间的延长，其表达Survivin mRNA越低；②forskolin处理后的BeWo细胞株中Survivin和PCNA蛋白的表达均下降，且随着forskolin作用时间的延长，其表达越弱；③与对照组比较，forskolin处理后的BeWo细胞株的增殖能力下降，且具有统计学意义(F值分别为5.722、6.380、7.131，均P<0.05)；随着forskolin作用时间越长，BeWo细胞株增殖能力下降越明显。同对照组比较， forskolin作用48h后的BeWo细胞株对5-Fu、MTX、顺铂等不同化疗药物的敏感性增高，且具有统计学差异(F值为5.806～11.203，均P<0.05)。结论 绒癌细胞株BeWo合体化后其增殖能力下降，且其增殖相关基因Survivin、PCNA的表达也下降。绒癌细胞株BeWo合体化后对5-Fu、MTX、顺铂等不同化疗药物的敏感性均增高，推测妊娠滋养细胞合体化可能改善恶性滋养细胞肿瘤的耐药性，但妊娠滋养细胞合体化与恶性滋养细胞肿瘤耐药的关系有待进一步研究。

妊娠滋养细胞疾病；促融素；细胞融合；生存素；增殖细胞核抗原

妊娠滋养细胞肿瘤(gestational trophoblastic tumor，GTT)是由妊娠滋养细胞异常发育及增殖所致的与妊娠相关的肿瘤。我国位于该病的高发区，葡萄胎在我国的发病率是0.8‰～1.0‰。由于我国庞大的妊娠妇女基数，使得该病已经成为严重威胁我国育龄妇女生命健康的恶性疾病之一[1]。GTT对化疗十分敏感，早期患者治愈率达90%以上，但晚期及耐药的GTT治愈率仅在30 %～40 %，故解决GTT耐药复发问题已经成为该肿瘤的研究重点[2]。目前大多数相关研究主要从耐药分子机制以及联合化疗方案开发等方面探索GTT耐药问题，而对滋养细胞合体化及其与GTT耐药关系的研究尚未见报道。

1 材料和方法

1.1 材料

人绒癌细胞株BeWo购自协和医科大学基础细胞库；Ham’s F12 培养基购自Gibco公司；胎牛血清购自四季青生物公司；forskolin由华诚生物技术有限公司惠赠；PCR mix 和逆转录试剂盒购自Fermantas MBI公司；Syncytin、Survivin基因引物购自北京三博远志生物技术有限责任公司；鼠抗人Survivin多克隆抗体购自美国Santa Cruze公司；兔抗人增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)多克隆抗体购自北京博奥森生物技术公司；5-Fu、MTX、顺铂购自美国Sigma公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养和处理

BeWo细胞株用含15 %胎牛血清的 Ham’s F12培养基在37℃、5 %CO2中培养。细胞贴壁生长，0.125%胰酶和0.01%EDTA 消化传代。取指数生长期的BeWo细胞(约为70%～80%)，分为4组，用终浓度为100mmol/L forskolin分别作用0、24、48、72h。

1.2.2 RT-PCR检测Syncytin、Survivin基因的表达

常规消化并收集细胞，按总RNA提取试剂盒fast200说明提取总RNA，再按照逆转录试剂盒说明将总RNA逆转录成cDNA，之后按 PCR mix试剂盒说明进行PCR扩增。

引物：Syncytin基因：上游5′-CAACTGCTATC￣ACTCTGCCACTC-3′，下游5′ -TTCTCTTGCCTGATC￣TTGAA￣CTCC-3＇，产物大小为 169 bp；Survivin基因：上游5′-CTTCTGGGCTATGGGTGAGGTTC-3′，下游5′-TTGGCTTG￣CTGG￣TCTCTT￣CTGG-3′，产物大小为112bp；β-actin：上游5′-GTGGACATCCGCAAAGAC-3′，下游5′-AAAGGGTGTA￣ACGC￣AACT AA-3′，产物大小为 302 bp。

反应条件：Syncytin基因：94℃欲变性5min，94℃变30s，57℃退火45s，72℃延伸45s，30个循环，最后72℃延伸7min；Survivin基因：94℃欲变性5min，94℃变性30s，61℃退火45s，72℃延伸45s，30个循环，最后72℃延伸7 min；β-actin：94℃欲变性5min，94℃变30s，58℃退火45s，72℃延伸45s，30个循环，最后72℃延7min。各扩增产物经2 %琼脂糖凝胶电泳。每组实验至少重复3次。

1.2.3 Western-blot检测forskolin作用不同时间的BeWo细胞株中Survivin 蛋白及PCNA蛋白的表达

蛋白质提取：常规消化、传代细胞。当细胞增长至80%时，各培养皿更换含100mmol/L forskolin的培养基，分别作用0、24、48、72h。吸净培养基，4℃PBS洗细胞3次，将PBS吸净，加入Triple裂解缓冲液200μL，将裂解物转移至2.5mL离心管，充分混匀后离心，将上清液吸出，留待蛋白定量和实验。SDS-PAGE电泳和免疫印迹：采用Bradford法测定蛋白质浓度，以30μg/孔上样，在12%(体积分数)的SDS-PAGE凝胶中进行电泳分离，电转移法23V 12h将蛋白从SDS-PAGE凝胶转移至醋酸纤维素膜，在含0.5g/L脱脂奶粉的TBST中37℃封闭1h，分别加入一抗(鼠抗人Survivin多克隆抗体，稀释度为1:200或兔抗人PCNA多克隆抗体，稀释度为1:200)，4℃孵育过夜，TBST充分漂洗(3min×6次)，加入二抗(辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠或羊抗兔IgG，稀释:1:2 000)，37℃作用1h，TBST充分漂洗(3min×6次)，DAB显色，观察结果。数据分析采用凝胶成像系统。

1.2.4 MTT检测forskolin作用不同时间的BeWo细胞株的增殖情况

常规消化细胞，吹打均匀，调整细胞浓度为 106～107/ L，取上述细胞悬液200μL接种于96孔培养板中培养。该实验分为实验组和对照组两组。当细胞增长至80%时，取出96孔板，更换培养基，实验组用含100mmol/L forskolin的培养基继续培养24h、48h、72h，对照组用不含forskolim的培养基继续培养24h、48h、72h。加入5mg/ L的MTT 20μL，继续培养4 h，倒出培养液，加入150μL 二甲基亚砜振荡溶解10min。空白对照调零，酶联仪检测波长为490nm时各孔的吸光值(A值)。该实验过程中每组各设 8个复孔，重复6 次。

1.2.5 MTT检测forskolin作用前后的BeWo细胞株对不同化疗药物的敏感性

常规消化细胞，吹打均匀，调整细胞浓度为 106～107/L，取上述细胞悬液200μL接种于96孔培养板中培养。当细胞增长至70%～80%时，每块培养板一半继续按原条件培养48h，另一半用含100mmol/L forskolin的培养基培养48h。更换培养基，分成3组，一组加入5-Fu，使终浓度分别为 25、50、100、200μg/mL , 一组加入MTX，使终浓度分别为 0.5、1、2、4μg/mL，一组加入顺铂，使终浓度分别为 0.5、1、2、4μg/mL，各组分别作用24h、48h。加入5mg/ L 的MTT 20μL，继续培养4h，倒出培养液，加入150μL二甲基亚砜振荡溶解10min。空白对照调零，酶联仪检测波长为490nm时各孔的吸光值(A值)。该实验过程中每组各设 8个复孔，重复6 次。

1. 3统计学处理

实验数据应用SPSS 17. 0 统计软件分析，采取重复测量设计资料的方差分析，当P<0.05 时为差异有统计学意义，P<0.01时为差异有显著统计学意义。

2 结果

2.1 RT-PCR检测forskolin作用不同时间的BeWo细胞株中Syncytin基因及Survivin基因的表达

2.1.1 RT-PCR检测forskolin作用不同时间的BeWo细胞株中Syncytin基因的表达

forskolin是一种常用的腺苷酸环化酶激活剂，其可通过诱导Syncytin基因的表达，促进滋养细胞的融合。本实验应用RT-PCR检测forskolin作用不同时间的BeWo细胞株中Syncytin基因的表达，发现forskolin作用后的BeWo细胞株中Syncytin基因的表达增强，且随着forskolin作用时间的延长，Syncytin的表达越强，于48h达到高峰，见图1。

2.1.2 RT-PCR检测forskolin作用不同时间的BeWo细胞株中 Survivin基因的表达

应用RT-PCR检测forskolin作用不同时间的BeWo细胞株中 Survivin基因的表达，发现forskolin作用后的BeWo细胞株Survivin基因的表达下降，且随着forskolin作用时间的延长，其表达Survivin mRNA越低，见图2。

图1 forskolin作用不同时间的BeWo细胞株中Syncytin基因的表达(RT-PCR)

Fig.1 Expressions of Syncytin mRNA in BeWo treaded with forskolin

for different time(RT-PCR)

图2 forskolin作用不同时间的BeWo细胞株中 Survivin基因的表达(RT-PCR)

Fig. 2 Expressions of Survivin mRNA in BeWo treaded with

forskolin for different time(RT-PCR)

2.2 Western-blot检测forskolin作用不同时间的BeWo细胞株中Survivin 蛋白及PCNA蛋白的表达

2.2.1 Western-blot检测forskolin作用不同时间的BeWo细胞株中Survivin 蛋白的表达

应用Western-blot 检测forskolin作用不同时间的BeWo细胞株中Survivin 蛋白的表达，发现forskolin作用后的BeWo细胞株Survivin 蛋白的表达下降，且随着forskolin作用时间的延长，其表达Survivin 蛋白越低，见图3。

图3 forskolin作用不同时间的BeWo细胞株中Survivin 蛋白的表达(Western-blot)

Fig.3 Expression of Survivin protein in BeWo treaded with forskolin for different time(Western-blot)

2.2.2 Western-blot检测forskolin作用不同时间的BeWo细胞株中PCNA蛋白的表达

应用Western-blot 检测forskolin作用不同时间的BeWo细胞株中PCNA蛋白的表达，发现forskolin作用后的BeWo细胞株PCNA蛋白的表达下降，且随着forskolin作用时间的延长，其表达PCNA蛋白越低，见图4。

图4 forskolin作用不同时间的BeWo细胞株中PCNA蛋白的 表达(Western-blot)

Fig. 4 Expression of PCNA protein in BeWo treaded with forskolin for different time(Western-blot)

2.3 MTT检测forskolin作用不同时间的BeWo细胞株的增殖

应用MTT检测forskolin作用不同时间的BeWo细胞株的增殖情况，结果显示forskolin作用后的BeWo细胞株的增殖能力显著下降(均P<0.05)。随着forskolin作用时间的越长，BeWo细胞株增殖能力下降的越明显(见表1，图5)。

图5 forskolin作用不同时间的BeWo细胞株的增殖情况

Fig.5 Proliferations of BeWo treaded with forskolin for different time

2.4 MTT检测forskolin作用前后的BeWo细胞株对不同化疗药物的敏感性

应用MTT检测5-Fu、MTX、顺铂等不同化疗药物不同浓度作用24h、48h对forskolin处理前后的BeWo细胞株的增殖抑制情况，结果显示同未予forskolin处理的BeWo细胞株即对照组比较，这些药物对forskolin处理48h后的BeWo细胞株的增殖抑制增强，且通过重复测量设计资料的方差分析，按α=0.05检验水准，均P<0.05，具有统计学差异(见表2至表7、图6至图11)。

图6 不同浓度的5-Fu作用24h对forskolin处理前后的BeWo细胞株的增殖抑制情况

Fig. 6 Inhibitory effects of 5-Fu with different concentrations for 24 hours on the proliferation of BeWo before and after treatment with forskolin

图7 不同浓度的5-Fu作用48h对forskolin作用前后的BeWo细胞株的增殖抑制情况

Fig.7 Inhibitory effects of 5-Fu with different concentrations for 48 hours on the proliferation of BeWo before and after treatment with forskolin

图8 不同浓度的MTX作用24h对forskolin处理前后的BeWo细胞株的增殖抑制情况

Fig.8 Inhibitory effects of MTX with different concentrations for 24 hours on the proliferation of BeWo before and after treatment with forskolin

图9 不同浓度的MTX作用48h对forskolin处理前后的BeWo细胞株的增殖抑制情况

Fig.9 Inhibitory effects of MTX with different concentrations for 48 hours on the proliferation of BeWo before and after treatment with forskolin

图10 不同浓度的顺铂作用24h对forskolin处理前后的BeWo细胞株的增殖抑制情况

Fig.10 Inhibitory effects of Cisplatin with different concentrations for 24 hours on the proliferation of BeWo before and after treatment with forskolin

图11 不同浓度的顺铂作用48h对forskolin处理前后的BeWo细胞株的增殖抑制情况

Fig.11 Inhibitory effects of Cisplatin with different concentrations for 48 hours on the proliferation of BeWo before and after treatment with forskolin

3 讨论

3.1 细胞融合

细胞融合是指在外力(诱导剂或促融剂)作用下，两个或两个以上的异源(种、属间)细胞或原生质体相互接触，从而发生膜融合、胞质融合和核融合并形成杂种细胞的现象。细胞融合在细胞生物界中是非常少见的现象。在人体组织中存在3种典型的合胞体组织，即合体滋养细胞层、横纹肌纤维、软骨或破骨细胞。晶状体纤维可能也具有融合活性。细胞融合是一种特殊的分化途径，在生物体的正常生长、发育过程中起了非常重要的作用。在正常妊娠过程中，胎盘绒毛组织中细胞滋养细胞通过增殖、分化，最终融合形成合体滋养细胞，在胎盘正常结构的形成和维持胎儿正常生长、发育等方面起了重要作用。目前关于滋养细胞合体化的具体机制尚不明了。有研究认为这可能与滋养细胞特异性表达的一种膜糖蛋白Syncytin有关。

Syncytin是人类内源性逆转录病毒基因HERV-WE1编码的膜糖蛋白。正常情况下它仅表达于胎盘滋养层，促进滋养层细胞融合形成合胞体滋养层[3-4]。Syncytin的表达受到多种因素的影响。有资料显示，低氧、超氧化物歧化酶-1 (Superoxide Dismutase-1，SOD-1)可以抑制Syncytin的表达，而粒细胞-巨噬细胞刺激因子、内皮生长因子、forskolin、环腺苷酸 (Cyclic Adenosine monophosphate，cAMP)、地塞米松、雌激素、人绒毛膜促性腺激素 (human chorionic gonadotropin，hCG)、神经胶质细胞缺失-1 (glial cells missing-1，GCM-1)等可以诱导Syncytin的表达[5]。forskolin是一种常用的腺苷酸环化酶激活剂，其可以通透细胞，激活腺苷酸环化酶，引起细胞内cAMP水平的升高。国内外许多研究证实forskolin可以通过诱导Syncytin的表达，促进细胞的融合。Borges等[6]应用细胞质荧光标记方法来观察forskolin诱导绒癌细胞株Bewo融合，结果发现两种不同细胞质荧光染料标记的细胞在forskolin作用下共同培养一段时间后同一细胞的细胞质中出现了两种不同的荧光，且于forskolin作用48h达到高峰，说明forskolin可以诱导BeWo细胞株融合，且于forskolin作用48h达到高峰。本研究应用RT-PCR检测了forskolin作用不同时间后的BeWo细胞株中Syncytin mRNA的表达，结果发现Syncytin在forskolin处理后的细胞中表达增强，且随着forskolin作用时间的延长，其表达越强，并于48h达到高峰，证实了forskolin可以诱导Syncytin基因的表达。

3.2 细胞融合与细胞凋亡

在细胞滋养细胞合体化过程中细胞滋养细胞分化到一定阶段出现可逆的凋亡早期事件，如Caspase-3、6、7、8、10、14等表达，尤其是Caspase-3、6、8的活化、磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine，PS)的外移[7-8]。Rote等[9]研究发现采用siRNA技术抑制Caspase-8表达，可以抑制促融剂forskolin引起的绒癌细胞株BeWo的融合。Caspase-8活化、PS外移是触发滋养细胞合体化的重要原因，也是成熟合体滋养细胞的标志性结构。巧合的是，Caspase-8活化、PS外移也特征性地出现在细胞凋亡早期。本研究应用MTT检测了forskolin作用不同时间的BeWo细胞株的增殖情况，结果发现同对照组比较，forskolin处理后的BeWo细胞株的增殖能力下降，且随着forskolin作用时间的延长，其增殖能力下降越明显，说明forskolin诱导融合后的BeWo细胞株的增殖能力下降，推测融合后的BeWo细胞株增殖能力的下降可能与其融合过程中出现细胞凋亡早期事件有关。

Survivin基因由Ambrosini 等首次从人类基因组库中分离出来，是迄今最强的凋亡抑制蛋白，具有抑制细胞凋亡、促进细胞增殖、参与细胞周期调控、参与并促进血管形成等功能，是联系细胞凋亡和细胞周期的重要因子，其主要表达于胚胎和发育的胎儿组织中，在大多数分化成熟的正常成人组织中没有表达[10-11]。PCNA由Miyachi等首次发现，其广泛表达于各类组织的增殖细胞中，是一种与细胞周期相关的多肽链，在DNA主链复制、修复，正常细胞周期循环中必不可少，同时也是一种细胞周期调控蛋白，存在于细胞核中，作为DNA聚合酶的辅助蛋白，直接参与细胞增殖过程中DNA复制，其表达水平反应肿瘤细胞增殖情况[12-13]。Survivin、PCNA蛋白都是与细胞增殖相关的蛋白，它们的表达下降说明细胞增殖下降，细胞凋亡增加。

本研究应用Western-blot检测了forskolin作用0、24h、48h、72h的绒癌细胞株BeWo中Survivin、PCNA蛋白的表达情况，结果发现forskolin处理后的BeWo细胞株Survivin和PCNA蛋白的表达均下降，且随着forskolin作用时间的延长，其表达越低，进一步证实了融合后的绒癌细胞株BeWo的增殖能力下降，其细胞凋亡增加。

3.3 细胞凋亡与恶性滋养细胞肿瘤耐药

肿瘤的发生是一个多途径、多步骤的过程。原癌基因、癌基因的激活和抑癌基因的失活，扰乱了细胞正常的增殖、分化调控，导致细胞增殖失控。而细胞凋亡的抑制，导致细胞存活期延长，死亡率下降。细胞的过度增殖和细胞凋亡的抑制打破了细胞增殖和凋亡的平衡，破坏了机体内细胞的平衡，导致肿瘤的产生。肿瘤细胞增殖与凋亡的失调关系表现为：①细胞增殖增强，细胞凋亡减弱；②细胞增殖不增强，而细胞凋亡显著减弱；③细胞增殖和凋亡均增强，但前者明显超过后者。

肿瘤治疗的目的在于杀伤肿瘤细胞，临床上的化学药物治疗、放射治疗、热疗以及一些生物治疗的重要机制之一是引发肿瘤细胞凋亡。放射治疗和化学药物治疗是目前临床上治疗肿瘤最常用的方法，其治疗肿瘤的机制虽是多方面的，但近来许多研究发现放疗和化疗均可引起肿瘤细胞凋亡，可能是肿瘤细胞死亡的主要方式。放疗辐射可引起肿瘤细胞的DNA无法修复的损伤。p53、bcl-2、bax基因参与了放疗引起的细胞凋亡。许多抗肿瘤化疗药物如烷化剂、顺铂、氮芥类化合物、DNA拓扑异构酶抑制剂、干扰微管药物等则可能通过p53诱导细胞凋亡。

肿瘤细胞对抗癌药物产生抗药性是肿瘤化疗失败的主要原因之一，因此，肿瘤的抗药性仍是有待解决的一大难题。随着对细胞凋亡研究的深入，人们认识到细胞凋亡与肿瘤细胞的抗药性有着内在的密切关系，细胞凋亡的抑制在肿瘤细胞抗药性的形成过程中起一定的作用。

本研究正是基于上述理论，根据滋养细胞合体化过程中出现细胞凋亡早期事件和合体化的滋养细胞处于细胞分化终末期，脱离了细胞周期，不具有细胞增殖的能力，利用forskolin诱导绒癌细胞株BeWo融合，并应用MTT检测了BeWo细胞株融合前后对5-Fu、MTX及顺铂等不同化疗药物的敏感性，发现与融合前的BeWo细胞株比较，融合后的BeWo细胞株对上述不同化疗药物的敏感性均增高，且两者间的差异通过重复设计资料的方差分析，按α=0.05检验水准，均P<0.05，具有统计学意义，即绒癌细胞株BeWo融合后对化疗药物的敏感性增高，说明滋养细胞合体化后可以改善其对化疗药物的敏感性，推测诱导滋养细胞融合可能可以改善恶性滋养细胞肿瘤的耐药。但滋养细胞合体化后对化疗药物敏感性增高的具体机制目前尚不明了，滋养细胞合体化与恶性滋养细胞肿瘤耐药的关系有待进一步研究。

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[专业责任编辑：杨文方]

Changes of sensitivity of choriocarcinoma cell line BeWo to different chemotherapy drugs after fusion

LIN Yao-hua1, AN Rui-fang2, YI Li-sha3, ZHANG Yong-hua2

(1.FirstAffiliatedHospitalofNanhuaUniversity,HunanHengyang421001,China；2.FirstAffiliatedHospitalofXi’anJiaotongUniversity,ShaanxiXi’an710061,China；3.GuangzhouWomenandChildren’sMedicalCenter,GuangdongGuangzhou510623,China)

Objective To develop a new therapy for gestational trophoblastic tumor (GTT), especially drug-resistant GTT in clinics through researching the changes in the sensitivity of BeWo before and after fusion to different chemotherapy drugs and exploring the relationship between syncytial fusion of trophoblast cells and drug resistance of GTT. Methods Forskolin was utilized to induce intercellular fusion of choriocarcinoma cell line BeWo. The expressions of Syncytin and Survivin mRNA in choriocarcinoma cell line BeWo treated with forskolin for 0, 24, 48 and 72 hours were detected by RT-PCR, while Western-blot was used to detect the expressions of Survivin and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) proteins in BeWo treated with forskolin for 0, 24, 48 and 72 hours. The proliferations of choriocarcinoma cell line BeWo treated with forskolin for 0, 24, 48 and 72 hours and the sensitivity of BeWo to 5-Fu, MTX and Cisplatin before and after fusion were detected by MTT. Results The expression of Syncytin gene in BeWo cell line treated with forskolin increased, and with the prolonging of treatment, the expression was higher and reached its peak at 48 hour. The expression of Survivin gene in BeWo cell line treated with forskolin declined, and with the prolonging of treatment, the expression was lower. After treatment with forskolin, the expressions of Survivin and PCNA proteins in BeWo cell line declined, and as the cell line were treated longer, the expressions were lower. Compared with the control group, the proliferation of BeWo cell line treated with forskolin decreased with statistical significance (Fvalue was 5.722, 6.380 and 7.131, respectively, allP<0.05). The decrease of proliferation of BeWo cell line was more serious when treatment with forskolin was longer. Compared with the control group, BeWo cell line treated with forskolin for 48 hours were more sensitive to 5-Fu, MTX and Cisplatin, and the differences were significant (Fvalue ranged 5.806-11.203, all P<0.05). Conclusion The proliferation of choriocarcinoma cell line BeWo decreases after fusion, and the expressions of related Survivin and PCNA genes in these cells also decrease. Choriocarcinoma cell line BeWo is more sensitive to 5-Fu, MTX and Cisplatin after intercellular fusion. So it can be speculated that intercellular fusion of trophoblast cells may improve drug resistance of malignant GTT. However, the relationship between intercellular fusion of trophoblast cells and drug resistance of malignant GTT needs further researches.

gestational trophoblastic disease; Syncytin; cell fusion; Survivin; proliferating cell nuclear antigen

2015-06-07

林耀华(1983-)，女，住院医师，硕士，主要从事妊娠滋养细胞肿瘤研究。

安瑞芳，主任医师。

10.3969/j.issn.1673-5293.2015.06.026

R711.7

A

1673-5293(2015)06-1189-06