卵巢肿瘤组织中鸟嘌呤交换因子Dock180的表达及作用

白春侠

（辽宁省营口市中心医院病理科，辽宁 营口 115000）

卵巢肿瘤组织中鸟嘌呤交换因子Dock180的表达及作用

白春侠

（辽宁省营口市中心医院病理科，辽宁 营口 115000）

目的 分析卵巢肿瘤组织中鸟嘌呤交换因子Dock180的表达及作用。方法 选取我院收治的卵巢良性肿瘤患者40例、卵巢交界性肿瘤24例及卵巢癌患者36例为本次研究对象，采用免疫组化法SP法对其组织中Dock180蛋白的表达水平进行检测并分析。结果 在本次研究中，卵巢癌患者组织中Dock180蛋白灰度值显著高于卵巢交界性肿瘤及卵巢良性肿瘤（P＜0.05），有统计学意义。卵巢癌患者组织中Dock180蛋白的阳性表达率为66.7%，卵巢交界性肿瘤组织中Dock180蛋白的阳性表达率为33.3%，卵巢良性肿瘤组织中Dock180蛋白的阳性表达率为15.0%，卵巢癌患者组织中Dock180蛋白的阳性表达率显著高于卵巢交界性肿瘤及卵巢良性肿瘤（P＜0.05），有统计学意义。结论 鸟嘌呤交换因子Dock180蛋白在卵巢癌的发生与发展中具有重要作用，是反映卵巢癌恶性生物学行为的一项重要指标。

卵巢肿瘤组织；鸟嘌呤交换因子Dock180；表达；作用

Dock180是小GTP酶Rho家族的鸟嘌呤核苷交换因子，也就是Crk下游结合分子，其相对分子质量为180×103，在调节肌动蛋白细胞骨架与细胞形态中具有重要意义。根据大量研究可知，CrkI、Dock180以及Racl在卵巢癌恶性生物学行为中发挥着重要作用[1]。我院为研究卵巢肿瘤组织中鸟嘌呤交换因子Dock180的表达及作用，选取40例卵巢良性肿瘤患者、24例卵巢交界性肿瘤及36例卵巢癌患者为研究对象，均采用Western blot及免疫组化法SP法对其Dock180表达进行检测，现相关报道如下。

1　材料与方法

1.1组织标本：选取我院病理科2013年1月至2014年6月收集的石蜡存档标本为研究组织标本，其中卵巢良性肿瘤患者40例（均属于浆液性囊腺瘤）、卵巢交界性肿瘤24例（均属于浆液性交界性囊腺瘤）及卵巢癌患者36例（其中浆液性囊腺癌28例，黏液性囊腺癌8例）。本次研究的所有标本在取材前均未进行化疗。在36例卵巢癌患者中，最大年龄为68岁，最小年龄为24岁，平均（48.1±3.3）岁；根据FIGO分期：Ⅰ期患者6例，Ⅱ期患者11例，Ⅲ期患者19例；根据组织学分级：高分化者8例，中分化者13例，低分化者15例。所有标本均通过病理学诊断确定；使用10%的福尔马林进行固定，石蜡进行包埋处理，4 μm连续切片。

1.2试剂与方法：选择美国SANTA CRUZ公司生产的鼠抗人Dock180单克隆抗体，北京中山金桥生物有限公司生产的SP免疫组化试剂盒（SP-9002）以及DAB显色试剂盒。①Western blot。在裂解组织或细胞中提取总蛋白，采用BCA法对总蛋白浓度进行测定，取各项本上60 μg总蛋白实施SDS-PAGE凝胶电泳，转膜，封存，再依次加入一抗4 ℃过夜、二抗37 ℃反应1.5 h，采用ECL plus试剂盒显影曝光，待其凝胶成像仪照相后选择Quan-tity One图像分析软件计算所有标本的灰度值，计算目的蛋白条带的灰度值以及β-actin灰度值之间的比值，获取目的蛋白的相对表达水平。②免疫组化。对4 μm石蜡切片进行常规脱蜡、水化，使用浓度为3%的过氧化氢孵育10 min，随后进行PBS冲洗，进行微波修复抗原，加1∶500稀释的一抗4 ℃过夜、二抗37 ℃孵育0.5 h，PBS冲洗，DAB显色，并经苏木精复染，中性树脂封片，在光镜下观察、成像。

1.3阳性结果判断标准[2]：Dock180蛋白主要以细胞质中存在明显棕黄色颗粒细胞，可将其判断为阳性。根据Shimizu方法，选择5个400倍的高倍镜视野计数肿瘤细胞总数和Dock180阳性细胞数，计算出Dock180阳性细胞比例，。无阳性染色体，可记为0分；阳性细胞数小于1/3，可记为1分，阳性细胞数在1/3～2/3，可记为2分；阳性细胞数＞2/3，可记为3分；着色为多数阳性细胞呈染色记分，无显色，可记为0分；中度染色，可记为1分；强度染色，可记为2分。前述2分值之和为最终结果，其中0分可视为阴性（-），2分可视为弱阳性（+），3分可视为中度阳性（++），4分可视为强阳性（+++）。

1.4统计学分析：本次研究的所有数据均选用SPSS18.0统计软件进行分析，计量资料用（）表示，用t检验；计数资料用（%）表示，用χ2检验，当满足P＜0.05时，表示差异有统计学意义。

2　结 果

2.1Western blot检测Dock180在三种卵巢组织中的表达分析：卵巢癌患者组织中Dock180灰度值为（1.054±0.113），卵巢交界性肿瘤组织中Dock180灰度值为（0.517±0.125），卵巢良性肿瘤组织中Dock180灰度值为（0.419±0.073）。卵巢交界性肿瘤与卵巢良性肿瘤组织中Dock180灰度值比较，无统计学意义（P＞0.05）；且卵巢癌患者组织中Dock180灰度值显著高于卵巢交界性肿瘤及卵巢良性肿瘤（P＜0.05），有统计学意义。

2.2免疫组化法检测Dock180蛋白在三种卵巢组织中的表达分析：Dock180蛋白一般存在于细胞的细胞质内，少数表达在细胞核内，呈棕色或棕黄色颗粒，且为弥漫性表达。卵巢良性肿瘤中Dock180（-）34例，（+）2例，（++）2例，（+++）2例，阳性表达率为15.0%；卵巢交界性肿瘤中Dock180（-）16例，（+）4例，（++）2例，（+++）2例，阳性表达率为33.3%；卵巢癌中Dock180（-）12例，（+）7例，（++）8例，（+++）9例，阳性表达率为66.7%；卵巢癌患者组织中Dock180蛋白的阳性表达率显著高于卵巢交界性肿瘤及卵巢良性肿瘤（P＜0.05），有统计学意义。

3　讨 论

卵巢癌是临床常见的一种女性生殖系统恶性肿瘤，病死率极高，对患者的生活质量及健康影响较大。由于有效筛选手段的缺乏，导致约有67%的卵巢癌患者在确诊时已经出现远处转移现象，已基本丧失了手术治疗的机会，预后效果较差，临床一般采用肿瘤细胞灭减术以及以铂类药物为主的化疗手段治疗[3]。恶性肿瘤细胞发生浸润以及转移的主要条件为肿瘤细胞动力的增加，这与细胞信号传导关系密切[4]。在本次研究中，卵巢癌患者组织中Dock180灰度值为（1.054±0.113），均高于卵巢交界性肿瘤及卵巢良性肿瘤组织中Dock180灰度值，差异有统计学意义；且卵巢癌组织中Dock180阳性表达率为66.7%，均高于高于卵巢交界性肿瘤（33.3%）及卵巢良性肿瘤（15.0%），组间差异有统计学意义（P＜0.05）。由此可知，Dock180表达在卵巢癌组织中最为明显。

Dock180是Rho家族GTP酶的鸟苷酸转换因子，但不具有其他鸟苷酸转换因子的DH-PH（Db1）结构域，主要含有可直接特异性结合Rac并调控Rac酶活性的结构域。其中Rho家族GTP酶主要有Rac、RhoG、Cdc42等，都是调节肌动蛋白细胞骨架与细胞形态的关键分子。鸟嘌呤交换因子Dock180在人体细胞内信号结合物下游，可直接和Crk的SH3结构域进行特异性结合，并将上游细胞内信号直接传递至下游的小分子GTP酶的Racl中，经激活Racl来调节细胞骨架肌动蛋白，在细胞增殖基因表达与质膜转运中具有重要作用。一旦在细胞信号传导中信号分子传导发生异常，则可发生肿瘤病变[5]。因此用Western blot以及免疫组化法检测对卵巢癌、卵巢交界性肿瘤及良性肿瘤组织中 Dock180蛋白进行半定量式检测，可有效掌握Dock180在女性卵巢癌组织中的表达情况及在该恶性肿瘤发生、发展中的作用，可作为卵巢癌诊断以及反应其恶性生物学行为中的新型标志物。

[1] 高一萌,张瑜,李文燕,等.C3G/Rap1和 Dock180/Racl信号通路在卵巢癌浸润中的作用[J].第三军医大学学报,2012,34(11):1031-1034.

[2] 王瑾.Elmo1协同Dock180对细胞运动及卵巢癌恶性浸润的作用[D].重庆:重庆医科大学,2011.

[3] 罗淑娟,车亚玲,彭慧娟,等.C3G在卵巢癌组织中的表达及其在SKOV3细胞增殖中的作用[J].第三军医大学学报,2012,35(14): 1471-1474.

[4] 张瑜,高一萌,李文燕,等.鸟嘌呤核苷交换因子Dock180与Elmol在卵巢癌细胞中的共表达[J].第三军医大学学报,2012,34(13): 1277-1280.

[5] 王辉,令狐华,姚珍薇.鸟嘌呤交换因子Dockl80在卵巢肿瘤组织中的表达和意义[J].重庆医科大学学报,2011,36(5):517-520.

R737.31

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1671-8194（2015）30-0070-02