影响精子的环境因素与精液稀释技术

焦万洪 （四川省盐边县农牧局畜牧站 617100）李莉 （四川省盐边县桐子林镇畜牧兽医站 617100）

影响精子的环境因素与精液稀释技术

焦万洪 （四川省盐边县农牧局畜牧站 617100）李莉 （四川省盐边县桐子林镇畜牧兽医站 617100）

对环境因素的分析利于精液稀释和保存，有利于延长精子存活的时间和提高精子的受精能力，在动物的繁育、育种和遗传资源保护等领域意义重大。

1 影响精子的环境因素

1.1 温度

精子在相当于体温即37～38℃时，可保持正常的代谢和运动状态，在精子活率检查时，最好是在这一温度下进行。当温度继续上升时，精子的代谢提高，运动加剧并很快死亡。低温对精子的影响是比较复杂的：经适当稀释的精液，当温度缓慢降低时，精子的代谢和运动会逐渐减弱，一般在5℃左右基本停止运动呈休眠状态；但是，未经处理的精液，即使骤然降低到15～10℃以下时，也会使精子遭到伤害，这一现象叫 “冷休克”。为防止这一现象的发生，对精液采用稀释，加入防 “冷休克”物质 （卵黄、奶等）和缓慢降温等措施。

1.2 渗透压

是指由于细胞膜内外的溶液浓度不同，而造成的膜内外的压力差。在高渗透压溶液中，精子内部的水分会向外渗出而脱水，而使精子干瘪死亡；在低渗溶液 （蒸馏水、常水）中，外界溶液的水分会向精子内部渗入，引起精子膨胀变形而死亡。精子最适宜的渗透压是与精清相等的渗透压，相当于290～360mOsm分子浓度。

1.3 酸碱度

新鲜精液的pH为7，可用pH试纸或特殊的仪器测知。在一定的限度内，酸性环境对精子有抑制作用；碱性环境则有激发作用。超过一定限度均会引起精子的死亡。对精子适宜的酸碱度应为弱酸性、中性到弱碱性 （pH6.9～7.5）。常利用酸抑制的原理，将稀释精液的pH调节到7以下，使精子的运动和代谢处于抑制状态，将精液在室温下得到保存。另外，在精液的常温保存过程中，精子代谢产生的乳酸会使精液的pH降低，因此在精液的稀释保存时要加一定量的缓冲物质，以维持pH平衡。

1.4 光照

直射的阳光对精子有激发作用，加速精子的运动和代谢，不利于精子的存活，所以精液应尽量避免阳光直射。或者用棕色玻璃容器收集和贮存精液。

1.5 常用的化学药物

常用的消毒药物，即使浓度很低，也足以杀死精子，应避免接触精液。但某些抗菌素类药物 （青霉素、链霉素等以及磺胺类药物），在适当的浓度下，不但对精子无毒害作用，而且还可以抑制精液中细菌的繁殖，对精液的保存和受精有利。吸烟所产生的烟雾，对精子有强烈的毒害作用，在精液处理时要严禁吸烟。

2 精液的稀释与配制

2.1 稀释液的组成成分

2.1.1 营养类物质

用于提供营养以补充精子生存和运动所消耗的能量。常在稀释液中加入的营养物质主要有果糖、葡萄糖、卵黄和奶类 （鲜全奶、脱脂乳或纯奶粉）等。

2.1.2 保护类物质

2.1.2.1 缓冲物

保持精液适当的pH，利于精子存活。常用缓冲物质有柠檬酸钠、酒石酸钾钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾等，以及近年来应用的三羟甲基氨基甲烷 （Tris）、乙二胺四乙酸 （EDTA）等。

2.1.2.2 抗冻物

在精液的低温和冷冻保存过程中需降温处理，精子易受冷刺激，常发生冷休克，造成不可逆的死亡，所以加入一些防冷刺激物质有利于精子的生存。常用的抗冻剂为甘油、乙二醇、二甲基亚砜 （DMSO）等，此外卵黄、奶类也具有保护作用。

2.1.2.3 抗菌物

在精液稀释液中加入一定剂量的抗生素，以利于抑制细菌的繁衍。常用的抗生素有青霉素、链霉素以及氨苯磺胺等。

2.1.3 其他添加剂

2.1.3.1 酶类

如过氧化氢酶能分解精子代谢过程中产生的过氧化氢，消除其危害，维持精子活率；β-淀粉酶促进精子获能，提高受胎率。

2.1.3.2 激素类

添加催产素、前列腺素可促进母畜生殖道的蠕动，有利于精子向受精部位运行而提高受胎率。

2.1.3.3 维生素类

如维生素B1、维生素B2、维生素B12、维生素C等，能改善精子活率。

2.2 稀释液种类与配制

2.2.1 稀释液配方

（1）为扩大精液量，增加配种头数为目的，将采集的新鲜精液，立即用简单的等渗糖类溶液或奶类、生理盐水作为稀释液稀释进行输精的即用稀释液。

（2）用于精液常温短期保存，一般pH较低的常温保存稀释液。

（3）用于精液低温保存，具有含卵黄和奶类为主的抗冷休克物质的低温保存稀释液。

（4）用于精液冷冻保存，其稀释液成分较为复杂，具有糖类、卵黄，还有甘油或二甲基亚砜等抗冻剂的冷冻保存稀释液。

2.2.2 稀释液的配制

配制稀释液原则上是现用现配。如隔日使用和短期保存（1周），必须严格灭菌、密封，放在0～5℃冰箱中保存。但卵黄、抗生素、酶类、激素等物质，必须在使用前添加。配制稀释液用水应为新鲜、无菌的蒸馏水或重蒸水。药品最好用分析纯，称量药品必须准确，充分溶解，过滤，消毒。新鲜的鸡蛋卵黄。所有配制用品都必须认真清洗和严格消毒。卵黄及抗生素等必须在稀释液冷却后加入。

2.3 精液稀释的方法

凡进行保存的精液，必须稀释，切忌原精保存，而且在采精后，应立即稀释。用于稀释精液的稀释液必须和精液是等渗的。精液在稀释前首先检查其活率和密度，然后确定稀释倍数。将精液与稀释液同时置于30℃左右的恒温箱或水浴锅内，进行短暂的同温处理，稀释时，将稀释液沿器皿壁缓慢加入，并轻轻摇动，使之混合均匀。如做高倍稀释 （20倍以上）时，分两步进行，先加入稀释液总量的1/3～1/2，混合均匀后再加入剩余的稀释液。稀释完毕后，再进行活率密度检查，如活率与稀释前一样，则可进行分装、保存。