现代技术在矿物药研究中的应用△
2015-01-23刘圣金王瑞吴德康林瑞超吴露婷房方杨欢
刘圣金,王瑞,吴德康*,林瑞超,吴露婷,房方,杨欢
(1.南京中医药大学 药学院,江苏省中药资源产业化过程协同创新中心/中药资源产业化与方剂创新药物国家地方联合工程研究中心,江苏 南京 210023;2.北京中医药大学 药学院,北京 100029)
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现代技术在矿物药研究中的应用△
刘圣金1,王瑞1,吴德康1*,林瑞超2,吴露婷1,房方1,杨欢1
(1.南京中医药大学 药学院,江苏省中药资源产业化过程协同创新中心/中药资源产业化与方剂创新药物国家地方联合工程研究中心,江苏 南京 210023;2.北京中医药大学 药学院,北京 100029)
矿物药的现代研究起步较晚,研究基础薄弱,进展相对缓慢。对矿物药的深入研究,现代技术的应用是不可缺少的手段。本文对国内外近30年的相关文献进行了较为全面地归纳总结。其主要研究手段包括显微镜技术、热分析技术、X射线衍射技术、光谱技术、电感耦合等离子体-质谱技术等,研究的内容主要包括矿种鉴定、成分分析、安全性评价、质量控制等。现代技术的发展为矿物药的深入研究增添了新途径。
矿物药;现代技术;应用进展;质量控制
矿物药是传统中药十分重要的组成部分,矿物药资源的研究与利用同植物药和动物药一样,已有几千年历史,是各族人民生存过程中无数次试用、观察而积累的实践医疗经验总结,是先人们留下的宝贵财富,极具特色。目前,矿物药的治疗范围涉及内、外、妇、儿、五官各科,临床疗效显著[1]。公元前475年前《山海经》记载了70多种矿物药;《神农本草经》载药365种,其中药用矿物46种;《本草纲目》记载矿物药355种;《中药大辞典》共收载矿物药82种;《中华本草》收载矿物药114种;2010年版《中华人民共和国药典》(一部)收录矿物药(不含化石类)24种,含矿物药的中药制剂(不含化石类)103种。此外,矿物药在蒙藏药的需求量占相当的比例,普通配方中矿物药也占50%左右,是配制有效方剂不可缺少的部分[2]。
药用矿物学是一门学科复杂、研究难度大而又趋于边缘领域的学科。矿物药种类繁多,资源丰富,有着广阔的研究前景[3]。矿物药研究自20世纪七八十年代才开始逐渐被重视[4],目前其研究发展仍较缓慢,几乎处于停滞状态。主要原因有:涉及学科复杂,人才培养脱节;应用研究难度大,发展缓慢;中西医研发评价体系差异;国家投入与支持不够;药用矿产的开发利用产业化水平低等[5]。矿物药资源的开发与利用需要既懂中医药学专业知识又懂地质学专业知识的人员相结合。与植物药与动物药相比,矿物药研究难度更大,导致目前矿物药研究处于边缘状态,其科研与创新速度也较落后[6]。
现代技术方法的应用是矿物药深入研究的重要保障,本文通过国内外近30年的相关文献研究(国外文献报道矿物药很少),对现代技术在矿物药研究中的应用情况进行了较为全面地归纳总结,以期为矿物药研究工作者提供有益的参考。
1 显微镜技术
矿物药显微鉴定主要是利用偏光显微镜来观察矿物药的光学性质,以达到鉴定矿物的目的。按矿物在薄片时的透明度不同选择偏光镜,观察其形态、光学性质并测试某些必要的物理常数。矿物药材绝大多数为透明矿物,少数为不透明矿物。透明者利用透射偏光显微镜,不透明者利用反射偏光显微镜[7]。例如石膏在偏光显微镜下鉴别特征为粒状、条柱状、纤维状,无色,低负突起,正或负延性,斜消光,干涉色一级黄,二轴(+)光性,光轴角58°;煅石膏为正突起,折射率大,干涉色达二级黄,平行消光,二轴(+)光性[8]。傅兴圣等[9]采用偏光显微镜鉴定磁石的同时,分析了其内部构造与全铁含量的相关性。
此外,尚有电子显微镜等在矿物药研究中的应用。牛超群等[10]应用扫描电子显微镜(Scanning Electronic Microscopy,SEM)和透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,TEM)观测技术,对药用矿物蒙脱石样品进行观察分析,为其鉴定提供有效依据。于新兰等[11]通过扫描电镜能谱对大青盐分析,结果显示,大青盐主要含有氧、钠、镁、铝、硅、氯、钾、钙、铁、硫等元素,且不同盐中所含杂质差异较大。崔红华等[12]通过在显微镜下动态观察磁石粒子的形态、粒径,从含铁量等为指标对磁石水飞炮制工艺和质量标准进行了研究。
2 热分析法
热分析是在程序控制温度下测量物质的物理性质与温度关系的一类技术,包括热重法(Thermogravimetry,TG)、微熵热重法(DerivativeThermogravimetry,DTG)、差热分析法(Differential Thermal Analysis,DTA)、差热扫描量热法(Differential Scanning Calorimetry,DSC)、热机械法(Thermomechanical Analysis,TMA)等。其中以TG、DSC法最为常用。TG法是一种在程序控制温度下测量物质的质量与温度关系的技术;DTA法是一种在程序控制温度下建立被测物质与参比物的温度差与温度关系的技术;DSC法是一种在程序控制温度下测量输入物质和参比物的功率与温度关系的技术。由于矿物药几乎全部为晶体,其物理性质稳定,各种热图谱更为稳定,所以热分析用于矿物药材的鉴定效果佳[13]。刘继华等[14]对不同产地的29批次赤石脂样本进行DSC及TG同步热分析,该方法可较好地测定赤石脂中所含的结晶水,可作为鉴别赤石脂及高岭石的重要手段。刘养杰[15]对白石脂矿物样品进行差热分析研究,其中所含的高岭石的吸热谷(585 ℃)和放热峰(1130 ℃)最为典型。有研究[16-18]对自然铜TG-DTA分析得出,自然铜在30~800 ℃的加热过程其实就是一个脱杂质、脱硫的过程;对雄黄样品分析得出,在273.2 ℃时发生硫化砷(AsS)由α型转变为β型的相变,304.4 ℃时为AsS的熔点,355.5 ℃时失重分解;对胆矾采用原位高温装置结合热重分析,结果表明,矿物药胆矾(CuSO4·5H2O)加热到58.92 ℃时失去2分子结晶水,形成CuSO4·3H2O,继续加热到102.26 ℃时再失去2分子结晶水,形成CuSO4·H2O,最后在198.79 ℃时失去全部结晶水,成为白色无水粉末CuSO4。张亚敏[19]对鱼脑石、方解石、白矾进行了DSC和TG分析,结果表明,鱼脑石在310 ℃及475 ℃时放热并失重;方解石在629 ℃起分解,逸出CO2,吸热并失重;白矾加温煅制时,120 ℃开始失去大量结晶水,260 ℃左右脱水基本完成,300 ℃则开始分解,但300~600 ℃分解缓慢,至750 ℃无水硫酸铝钾(煅白矾)出现脱硫过程,产生硫酸钾、三氧化二铝及三氧化二硫。
3 X射线衍射法
X射线衍射(X-ray diffraction,XRD)分析法是一种研究物质微观结构的有效手段,当某物质进行XRD分析时,该物质被X射线照射产生不同程度的衍射现象,物质组成、晶型、分子内成键方式、分子构型、构象等决定该物质产生的特有衍射图谱[20]。X射线衍射法具有分析简便、快捷,样品用量少,图谱信息量大等优点[21],在矿物药鉴定中的应用较广泛,具有广阔的前景。陈广云等[22]建立了龙齿与龙骨的X射线衍射指纹图谱能够简便、准确地鉴定龙齿与龙骨及其炮制品。吕芳等[23]通过对7个玄精石的X射线衍射Fourier图谱的分析,发现该图谱客观地反映了玄精石的内在质量特征,能对玄精石进行鉴定。温海成等[24]采用X射线衍射法对7个矿物药炉甘石样品进行成分分析,结果表明该方法能有效地对炉甘石进行鉴定。蔡学艳等[25]用XRD法鉴别礞石滚痰丸中的金礞石,结果显示,金礞石在d值为9.982处的特征峰较为明显,且不与其他组分产生干扰,其XRD图谱可作为金礞石定性的依据。农以宁等[26]用XRD法测定药用滑石粉以及其中可能存在的透闪石石棉、蛇纹石石棉、绿泥石,以控制药用滑石粉的质量。刘艳菊等[27]用XRD法优选了水飞朱砂炮制工艺。李岑等[28]用XRD分析藏药矾石结构,表明其体系中主要存在三方晶系(MgxCa1-X)CO3(空间群为R-3c)或三方晶系CaCO3(空间群为R-3c)。傅兴圣等[29]采用XRD技术对矿物药磁石进行分析,结果建立了以11个共有峰为特征指纹信息的磁石XRD Fourier指纹图谱分析方法。赵翠等[30]采用XRD技术对煅硼砂样品进行定性分析,结果获得了煅硼砂的XRD指纹图谱,该方法专属性强、准确可靠,可实现对煅硼砂的鉴别和质量评价。刘静等[31]应用XRD法对11批生花蕊石和8批煅花蕊石药材进行定性分析,得出不同来源花蕊石样品粉晶XRD图谱共有峰相似度,可作为与其他矿物药进行区分鉴别的手段。韩墨等[32]采用XRD Fourier法获得了雄黄和雌黄的XRD Fourier指纹图谱,表明XRD图谱鉴定法可用于雄黄和雌黄的鉴定和识别。刘圣金等[33]采用粉末XRD技术对青礞石进行分析,结果建立了以10个共有峰为特征指纹信息的青礞石XRD Fourier指纹图谱分析方法,该方法可用于青礞石药材的鉴定与分析。李刚等[34]采用XRD法对矿物药胆矾进行了物相分析。陈丰等[35]利用本法检测滑石粉中是否含有致癌物质石棉,并为明确优质滑石的产地提供依据。曹帅等[36]采用本法对炮制前后的雄黄进行研究,通过XRD图谱的峰匹配分析和相似度分析,能非常直观地评价雄黄药材和饮片的质量。田金改等[37]采用本法对雄黄进行衍射分析,结果表明,湖南雄黄晶与湖南雄黄的主要成分为β-雄黄(As4S4)与α-雄黄(AsS),贵州思南烧黄的主要成分为二硫化二砷(As2S2),雌黄烧结石属于雌黄无定形粉末,并含有少量结晶,雌黄矿石主要由雌黄和花岗岩组成。
4 红外光谱法
红外光谱(Infrared Spectroscopy,IR)是以波长或波数为横坐标,以强度或其他随波长变化的性质为纵坐标所得到的反映红外射线与物质相互作用的谱图,该谱图能提供极其丰富的分子结构信息。红外光谱具有特征性强、取样量小、简便迅速、准确等优点[38]。IR法在中药材的鉴别方面有着较广泛的应用,在矿物药鉴定方面,也有着广阔的前景。曹先兰等[39]采用IR法对95种矿物药280多个样品进行研究,其吸收峰及谱带可以鉴别不同品种的矿物药及及其炮制品。程宾防等[40]对不同产地的29批次赤石脂样本进行IR分析,发现不同来源的赤石脂在3618 cm-1及3695 cm-1波数处存在差异,可以有效区分赤石脂及高岭石。袁明洋等[41]对8种含碳酸盐的矿物类中药近红外定性定量模型进行研究,结果该模型可以快速准确鉴别8种含碳酸盐类矿物类中药。尤淑霞等[42]利用傅里叶变换红外分析仪,分别测定白矾与其炮制品枯矾的红外光谱图谱,结果在400~4000 cm-1白矾与枯矾的红外吸收峰的峰数、峰位、峰形、峰强等存在明显差异,可以此来区别白矾与枯矾。傅兴圣等[43]对不同产地和批次的13个生磁石样品进行IR分析,建立磁石的红外光谱指纹图谱,并将其炮制品和生品进行分析比较。发现所有生磁石样品指纹图谱的相似度均大于0.97,磁石炮制后相似度和相关系数均降低,该指纹图谱可用于商品磁石的分析与品质评价。封秀娥[44]对7个地区所用无名异的样品进行IR分析,结果表明样品无名异均为褐铁矿。包贝华等[45]运用红外光谱及其二阶导数谱,对不同产地白矾及枯矾进行分析,结果表明白矾及枯矾红外光谱图具明显差异。黄必胜等[46]采用近红外光谱法对真伪龙齿进行化学成分分析,探索建立近红外光谱聚类分析模型,其可以作为验证龙齿化学成分的一种方法,也可以快速准确地鉴别真伪龙齿。刘义梅等[47]建立化石类矿物中药龙骨、龙齿、石燕和石蟹等的近红外快速识别模型,可对不同样品进行快速准确地区分。陈军等[48]利用傅里叶变换红外光谱仪测定不同来源的金礞石、青礞石样品,对所获得的指纹图谱进行特征性指认,结果不同来源的金礞石、青礞石的红外吸收光谱存在较大差异。刘圣金等[49]通过傅里叶变换红外光谱仪对不同产地和批次10份青礞石样品进行分析,建立了青礞石的傅里叶变换红外光谱指纹图谱,并分析比较青礞石炮制前后图谱变化。结果青礞石样品的指纹图谱相似度均大于0.96,炮制后相似度和相关系数均有较大程度的降低,该方法可用于青礞石炮制后的品质评价。郭啸等[50]用傅里叶变换红外光谱仪测定金礞石炮制前后的样品,比较两者的红外图谱特征,分析其变化规律。结果金礞石炮制后八面体结构羟基吸收峰减弱,水峰明显减弱,硅-氧键(Si-O)振动吸收峰峰宽增加,得出金礞石的炮制原理主要在于破坏其矿物结构并改变其中各主要金属离子的可交换性,进而改变其药性药效。
5 原子吸收光谱法
原子吸收光谱法(Atomic Absorption Spectroscopy,AAS)又称为原子吸收分光光度法,是根据蒸气相中待测元素的基态原子对其共振辐射的吸收强度来测定试样中该元素含量的一种仪器分析方法,其在测定痕量和超痕量元素方面有较大优势,在矿物药微量元素的测定方面起着重要的作用[51]。谭朝阳等[52]以AAS法测定铅、镉、砷、汞、铜的含量为指标,优选紫石英的炮制工艺,发现经煅淬后紫石英中所含铅、镉、砷、汞、铜等有害元素的含量均有不同程度的降低。孙绪丁等[53]以AAS法测定藏药中铁的含量,以控制藏药质量。结果表明,AAS法能安全、快速、高效地测定藏药复方制剂中的铁含量,可用于藏药及其制剂的质量控制。徐鸿等[54]用AAS法测定矿物药大青盐中氯化钠含量的测定方法,结果表明,该方法专属性强、简便易行、灵敏度高,可用于测定矿物药大青盐中氯化钠的含量。刘晓芳等[55]采用标准加入法,以AAS法测定大青盐中钾、钙、镁的含量,结果显示钾、镁的进样浓度在0.4~10.0 mg·L-1、钙在0.4~30.0 mg·L-1遵循朗伯比尔定律,该方法可用于矿物药大青盐中微量钾、钙、镁测定。傅兴圣等[56]利用AAS法分析商品磁石中水溶性铁、铅、镉和铜的含量,结果磁石药材中水溶性铁的平均质量分数为764.30 mg·kg-1,水溶性铅、镉、铜的含量均在药材的限量范围之内。刘晓芳等[57]建立了石墨炉原子吸收光谱测定大青盐中微量铅含量的方法,结果该方法专属性强、灵敏度高、简便易行,可用于矿物药大青盐中微量铅的限量控制。李薇等[58]利用AAS法测定3种石膏样品,其中锌的含量普遍高于铜,而且铜的含量差别不大,锌的含量以红石膏为最高。康莲薇等[59]等建立了AAS法来测定代赭石和红矿中微量元素钙、铜、锌、锰等的含量,发现两者微量元素有显著差异,以此来区别代赭石与红矿。赵中杰等[60]用AAS法对矿物药紫石英、花蕊石和硫黄中的微量元素进行含量测定,结果表明,紫石英、花蕊石和硫黄中含有钴、铬、铜、锰、镍、铅、锌等10多种微量元素。谭朝阳等[61]采用AAS法对紫石英在水煎液和人工胃液中铅、镉、砷、汞、铜的含量分别进行测定,结果紫石英中铅、镉、砷、汞在水煎液中的溶出率均高于在人工胃液中的溶出率。
6 原子荧光光谱法
原子荧光光谱法(Atomic Fluorescence Spectrometry,AFS),又称原子分光光度法,是介于原子发射光谱和原子吸收光谱之间的光谱分析技术。其基本原理是基态原子(一般蒸汽状态)吸收合适的特定频率的辐射而被激发至高能态,而后激发过程中以光辐射的形式发射出特征波长的荧光。AFS法在矿物药中主要用于砷、汞等元素的含量测定。陈朝军等[62]采用AFS法测定寒水石样品中砷、汞含量,结果回收率在90%~104.5%,精密度<2%,砷、汞的检出限分别为1.25×10-3、1.43×10-3μg·g-1,本方法快捷、准确、灵敏度高。张晓敏等[63]以AFS法测定自然铜、花蕊石、鹅管石、海浮石、银精石、金精石、金礞石和青礞石8种矿物药炮制前后的砷、汞含量,结果各样品炮制前后砷、汞含量差异显著。全正香等[64]采用AFS法测定藏药“君西”不同炮制品中汞含量,结果炮制后重金属汞含量明显降低,表明炮制处理过程确实可起到降低南寒水石毒性作用。傅兴圣等[65]采用AFS测定磁石炮制前后的砷的含量,结果炮制后砷未检出,表明炮制对矿物药磁石能起到减毒的作用。宋秀环等[66]采用AFS对不同粒度雄黄及其炮制品中可溶、毒性砷含量进行监测,结果显示矿物药雄黄粒度以100~200目为宜,酸水淬飞炮制最佳。傅兴圣等[67]用AFS法测定磁石中水溶性砷、汞的含量,结果水溶性砷、汞的含量均在药材的限量范围之内。谭朝阳等[68]用AFS法对全国14个市售紫石英药材中砷、汞进行测定,结果砷、汞的含量范围分别为0.516 9~178.935 4、0.058 2~1.614 1 mg·kg-1,建议应加强对紫石英药材中有害元素的检测及控制,以保证其用药安全。许珺辉等[69]用氢化物发生-原子荧光光谱法测定无机砷(Ⅲ)、砷(V)、有机单甲基胂酸(MMA)、二甲基胂酸(DMA)4种形态砷含量,结果4种形态砷能实现完全分离,测定精密度、准确度良好,方法较为简便、准确、可靠,适用于分离测定雄黄及含雄黄的中成药中4种形态砷的含量。成红砚等[70]用AFS法测定炉甘石中砷、汞的含量,方法简便快速、准确性好,结果表明市售炉甘石砷含量严重超标。刘晓芳等[71]用AFS法测定矿物药大青盐中总砷和总汞的含量,结果该方法专属性强、简便易行、灵敏度高,可用于矿物药大青盐中有害元素总砷和总汞的限量控制。李峰等[72]对8组16种相近的矿物药进行鉴别研究,发现荧光光谱法鉴别矿物药具有主观误差小、用样量少、图谱简洁、易于鉴别、准确快速等特点,为矿物药鉴别提供了新方法。荧光光谱法在对外形相似、成分相近、来源混淆的矿物药的鉴别方面有较好的效果,尤其对天然矿物与人工合成品以及有毒矿物的鉴别具有重要意义。
7 电子探针技术
电子探针分析是以聚焦的高速电子来激发出试样表面组成元素的特征X射线,对微区成分进行定性或定量分析的一种材料物理试验,又称电子探针X射线显微分析((Electron Probe X-ray Microanalysis,EPMA),其可鉴别元素的种类和浓度。周剑雄等[73]用电子探针对滑石质量进行检验,判定样品中杂质主要为白云石,其含量为15%~20%。张志杰等[74]通过电子探针对自然铜不同炮制品矿相及化学成分进行分析,结果发现自然铜煅烧后成分发生了较大变化,其中黄铁矿(FeS2)变为磁黄铁矿(Fe1-xS),黄铜矿煅烧后铜元素含量降低,而邻近的磁黄铁矿中铜元素含量增加,铜元素在磁黄铁矿中形成了固体溶液,提高了分散度;自然铜醋淬品中铅、硫等元素含量降低,在煅透的部位,铅的含量不足生品的1/10。汪寅夫等[75]利用电子探针技术对雄黄进行研究,得出电子探针检测砷、氧等元素的赋存状态,可以有效地对雄黄的质量进行评价。郑曙等[76]利用电子探针波谱对准确定量分析方解石的方法进行了研究。
8 拉曼光谱法
拉曼光谱(Raman spectra)是一种散射光谱,它的产生基于光与分子的非弹性碰撞。拉曼光谱技术在有机化合物结构鉴定、高分子蛋白分析、临床检验、晶体和材料研究等方面有着广泛应用[77]。廖晴等[78]采用拉曼光谱法对不同雄黄样品进行鉴别分析,拉曼光谱及其二阶导数谱均在182、234、271、342 cm-1等波数位置出现了特征性较强的拉曼振动峰,拉曼光谱能较好地反映出雄黄的特征吸收峰,具有快速、简便、准确等优点。张志杰等[79]用拉曼光谱对我国药用雄黄的样品构型进行研究,结果确认试验所采集的我国雄黄矿石、药用雄黄饮片及中成药制剂中所使用的雄黄均为α-As4S4。
9 穆斯堡尔谱法
穆斯堡尔谱法(Mössbauer spectroscopy)类似一种指纹鉴定技术,能有效地鉴定不同的矿物和不同来源的同一种矿物。矿物药研究通常是选择矿物的常量元素和微量元素进行分析,而穆斯堡尔谱可从矿物相结构、内磁场、粒度、类质同象替代和离子交换等方面进行研究。利用穆斯堡尔谱测定矿物中铁的氧化状态、电子组态时不但快速准确,而且需要样品量少(约100 mg),利用穆斯堡尔谱法研究药用矿物是一种有意义的大胆尝试。高国冶等[80]采用穆斯堡尔谱法对自然铜、磁石、代赭石、余粮石、蛇含石、云母、青礞石、金礞石、阳起石、麦饭石、赤石脂、白石脂、黄石脂等进行了研究。
10 联用技术
每一种分析技术及方法均有其适用范围和局限性,将单一的分析技术联合起来应用能获得更丰富的信息,从而获得更佳的定性、定量效果。在矿物药研究中,应用较广泛的联用技术有电感耦合等离子质谱(Inductively Coupled Plasma-Mass Spectrometry,ICP-MS)、电感耦合等离子体发射光谱法(Inductively Coupled Plasma-Atomic Emission Spectroscopy,ICP-AES)、电镜-能谱仪(Scanning Electron Microscope-Energy Dispersive Spectrometer,SEM-EDS)、高效液相色谱-电感耦合等离子质谱(High Performance Liquid Chromatography-Inductively Coupled Plasma-Mass Spectrometry HPLC-ICP-MS)、离子交换高效液相色谱-氢化物发生-原子荧光光度法(High Performance Liquid Chromatography-Hydride Generation-Atomic Fluorescence Spectrometry,HPLC-HG-AFS)等。
10.1 ICP-MS联用
ICP-MS以ICP作为质谱仪离子源,其优势在于获得了进样条件和样品激发所需要的可控、无玷污的高温环境,将样品快速完全地引入到一个对所有过程都有足够滞留时间的环境。可以同时测量周期表中大多数元素,获得样品中常量、痕量元素定量数据,是一种多元素分析技术。与传统无机分析技术相比,ICP-MS技术具备更低的检出限、更宽的动态线性范围、更少的干扰、较高的分析精密度和分析速度等优点,在当今前沿分析技术中具有无可替代的地位。刘圣金等[81]采用ICP-MS检测了青礞石药材中的25种元素,其中硅、铁、镁、铝、钙、钾、钠7个元素为主要成分,累积贡献率达到90.7%,并建立了青礞石的无机元素指纹图谱。傅兴圣等[82]对磁石ICP-MS分析得出,铁、硅、镁、钙、铝、钾、锌为磁石主要成分,累积贡献率达到87.874%。范丽波等[83]用ICP-MS法对矿物药花蕊石中9种无机元素进行了分析,结果认为花蕊石中硒、铜是该药中作用最大的元素或最特征的元素。相关研究[84-85]采用ICP-MS法测定玄明粉芒硝中无机元素的含量,结果测定了矿物药玄明粉中的20种元素、芒硝中的24种元素,建立了玄明粉、芒硝微量元素的指纹图谱,为矿物药玄明粉、芒硝的安全性评价及其质量标准的制定提供了科学的参考依据。王欣美等[86]选用安宫牛黄丸等3种含矿物药的中成药,用ICP-MS测定其中总重金属和酸可溶性重金属的含量,结果得出酸可溶性重金属含量限度可作为药物质量控制指标之一。汤家铭等[87]采用ICP-MS法研究口服雄黄后砷在孕大鼠体内的分布和排泄途径,结果砷在不同脏器内蓄积与给药剂量有关,其中以全血、脾、胎盘、肺内砷含量较高,口服雄黄主要经肠道排泄,而组织内蓄积的砷可能经肾脏排泄。
10.2 ICP-AES联用
ICP-AES是以等离子体为激发光源的原子发射光谱分析方法,可进行多元素的同时测定,能构建样品所含元素发射各自的特征谱线,具有检出限低、准确度高、线性范围宽、元素覆盖范围广且可实现多种元素同时测定等优点,在矿物药元素分析中也多有应用。李丽敏等[88]利用ICP-AES法测定玄明粉、炉甘石中钙、钠、锌元素,结果显示该法简便、灵敏、可靠,可较好地应用于矿物药及其复方制剂中的元素测定。李钢等[89]用ICP-AES法对雄黄样品中锌、钙、锰、铁、铜、镁、镉、铬、铅、铝等进行测定,其中锌、锰、铜、镉、铬未检出。赖红伟等[90]采用ICP-AES法测定了麦饭石口服液中微量元素和稀有元素含量,结果表明其中含有钴、硼、锶、碘、钼、硅、氟、磷、镍9种微量元素和镧、铈、钕、钐、钆、镝、镱、铒、镨、钪10种稀有元素;微量元素中碘含量最多,氟最少,锗未检出;稀有元素中钕含量最多,镝、铈和镨较少,镥、钬、钷、铽、铥、铕6种稀有元素未检出。陈吉等[91]采用ICP-AES法测定4种牛黄解毒片中酸可溶性重金属和总重金属的含量,结果4种成药中总金属含量均超过国家行业标准限量及美国药典限量,而酸可溶性重金属含量均低于其总重金属含量,基本符合或接近国家标准。朱玲珍[92]采用原子发射光谱对青礞石与金礞石及其炮制前后的元素组成进行测定,结果两者元素组成具有较大差异,对《中华人民共和国药典》2010版中二者的性味、功能主治完全一致的记载提出质疑。丁霞等[93]采用ICP-AES测定生煅金、白云母溶出液中宏微量元素的含量,结果表明两者存在明显差别,白云母溶出液各元素含量均明显超过金云母,白云母煅后,钾/钠比值降低,钙、镁等元素含量增大,煅制的金云母溶出液中镁含量增大,钙含量降低。蒋秋桃等[94]采用ICP-AES法检测湘产朱砂中重金属的含量,结果显示该方法简便、准确,可同时检测朱砂中镉、铬、铜、铅含量。夏明衍等[95]采用该方法测定中药银精石与金精石中的微量元素,分析比较二者在元素种类和含量上的差别,两药材含铅和砷的量均较高,从而提示银精石与金精石均有小毒。张萍等[96]建立了ICP-AES法测定不同产地滑石粉中10种无机元素分析方法,分析不同产地滑石粉中的元素组成及含量,结果镁为其主要元素,钙、铝、铁为微量元素,重金属及有害元素中铅、砷、汞、铬均有部分样品检出,提示滑石粉的安全性应得到重视。Liu等[97]采用ICP-AES对禹余粮生品和两种炮制品(醋淬品和明煅品)无机元素以及其水煎液中的无机元素进行测定和比较,结果发现三者样品和水煎液中无机元素的含量和种类差异均有统计学意义(P<0.05)。
10.3 SEM-EDS联用
扫描电镜能对各种固体材料的物质表面形貌进行观察,配合能谱仪可以同时进行显微组织形貌的观察和定性分析等,尤其适用于微区、定点、定位、非破坏性分析。SEM-EDS能将物体放大30万倍,可以进行形态观察、元素成分等分析,进而获取样品的形态、细微特征、无机成分、结构等物理、化学性质信息[98]。陈宪平等[99]用SEM-EDS对雄黄、雌黄进行分析,结果显示雄黄和雌黄在元素配比上存在着明显差异,雄黄中砷与硫的重量百分比为1.27∶1,雌黄中砷和硫重量百分比为1∶1.25,雌黄中硫的比例明显高于雄黄。李钢等[89]利用SEM-EDS对雄黄样品进行分析,结果表明雄黄除了主要元素砷、硫外,还含有少量硅、钙及微量元素钾、镁、铁、铝、铅等。
10.4 HPLC-ICP-MS联用
HPLC-ICP-MS联用技术是目前元素形态分析的有效途径。李丽敏等[100]采用HPLC-ICP-MS联用技术分析6种不同价态砷,对雄黄及5种不同处方含雄黄复方制剂中可溶性砷的形态进行了研究。陈秋生等[101]建立了HPLC-ICP-MS测定含雄黄中药制剂中可溶性砷形态含量的分析测定方法,结果应用阴离子色谱柱10 min内成功分离4种形态砷:亚砷酸盐砷(Ⅲ)、砷酸盐砷(Ⅴ)、一甲基砷(MMA)和二甲基砷(DMA),方法简便、灵敏、准确、重现性好,可用于含雄黄中药制剂中可溶性砷形态的分析测定。Chen等[102]采用HPLC-ICP-MS法研究雄黄在大鼠体内代谢过程中5种价态砷的分布情况,结果表明该方法可用于雄黄代谢过程中砷的形态分析。有研究[103-104]采用HPLC-ICP-MS测定Beagle犬灌服不同剂量雄黄及六神丸后各组织中砷的形态分布,结果随着雄黄的服用剂量增大,Beagle犬组织中总砷含量和亚砷酸盐砷(Ⅲ)与二甲基砷酸(DMA)浓度增大。含相同剂量雄黄的六神丸组与雄黄组相比,多数组织中总砷含量降低,所有组织中的砷(Ⅲ)和DMA浓度均降低,而肝、脾、肾中的砷甜菜碱(AsB)浓度升高。
10.5 HPLC-HG-AFS联用
HPLC-HG-AFS联用技术也可以用于元素形态分析,有研究者[105-106]采用HPLC-HG-AFS测定雄黄在水、人工胃液、人工肠液中可溶性砷(Ⅲ)的含量,结果发现雄黄在人工胃液及人工肠液中砷(Ⅲ)的溶出量均高于在水中砷(Ⅲ)的溶出量,从而增加了雄黄对机体的毒性;利用该法测定雄黄中可溶性砷盐砷(Ⅲ)的含量来优选雄黄水飞炮制方法的最佳工艺条件,为雄黄炮制品的制备工艺和质量评价提供了一定的科学依据。
11 小结
综上所述,在矿物药研究中涉及的现代技术主要有显微镜技术、热分析技术、X射线衍射技术、光谱技术(红外光谱、吸收光谱、荧光光谱、拉曼光谱等)、穆斯堡尔谱法及多种联用技术等。涉及的研究领域主要包括矿物药的鉴定、炮制加工工艺筛选、全元素分析、元素价态分析、成分构型分析、安全性评价、质量控制等方面。
矿物药的现代研究涉及中医药、地质学、矿物学等领域,学科跨度大,现代技术的发展以及多学科的交叉互补也给矿物药的现代研究注入了新鲜血液。
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Applications of Modern Technology in Study of Mineral Chinese Medicine
LIU Shengjin1,WANG Rui1,WU Dekang1*,LIN Ruichao2,WU Luting1,FANG Fang1,YANG Huan1
(1.Schoolofpharmacy,NanjingUniversityofChineseMedicine;JiangsuCollaborativeInnovationCenterofChineseMedicinalResourcesIndustrialization;NationalandLocalCollaborativeEngineeringCenterofChineseMedicinalResourcesIndustrializationandFormulaeInnovativeMedicine,Nanjing210023,China;2.Schoolofpharmacy,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China)
The research of mineral Chinese medicine started late,the research foundation is weak and the progress is relatively slow.The application of modern technology is an indispensable means of in-depth study of mineral Chinese medicine.In this paper,related research are summarized based on domestic and foreign literature in recent 30 years.Research methods include microscopy,thermal analysis,x-ray diffraction,spectroscopy,inductively coupled plasma-mass spectrometry and so on.The main contents of the study include mineral identification,component analysis,safety evaluation,quality control etc..The development of modern technology has added a new approach to the study of mineral Chinese medicine.
Mineral Chinese medicine;modern technology;application progress;quality control
10.13313/j.issn.1673-4890.2015.9.001
2015-01-16)
国家自然科学基金项目(81303178);江苏省自然基金项目(BK20130957);江苏省高校优势学科建设工程资助项目(二期);江苏高校品牌专业建设工程资助项目(PPZY2015A070)
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吴德康,教授,研究方向:中药鉴定与品质评价、矿物药研究;Tel:(025)85811511,E-mail:wudekang2008@126.com