沙棘果实化学成分的分离与鉴定

【摘 要】目的：探讨沙棘果实中的化学成分.方法：使用HPLC柱色谱分析和Sephadex LH20、硅胶柱等方法对沙棘果实提取物进行分离纯化，通过核磁共振氢谱、碳谱和物质的理化性质等数据来确定所分离化合物的结构.结果：实验共得到β谷甾醇、β豆甾醇、5羟基糠醛、胡萝卜苷、4羟基苯甲酸、齐墩果酸、2羟基丁二酸4甲酯、3，4二羟基苯甲酸和γN（2呋喃基甲基）丁胺酸等9种化合物.结论：将沙棘萃取物进行化学和波谱法分离鉴定可有效分离鉴定沙棘有效成分.

【文献标识码】A

文章编号：20956894（2015）0412302

收稿日期：20150115；

接受日期：20150130

作者简介：郭 震.Email：guozhen141＠sina.com

0　引言

沙棘（Hippophae rhamnoides Linn.）属于蔷薇目胡颓子科沙棘属植物，由于其耐寒、耐酷热、耐风沙及干旱的气候，在我国西北部地区大面积生长 ［1］.在中医中讲沙棘性温，味酸涩，主要有消食化滞、祛痰止咳、活血化瘀等功能，此外还能降低胆固醇、治愈心绞痛、防治冠状动脉粥样硬化性心脏病等作用，因此具有很高的药用价值，被正式收入《中华人民共和国药典》 ［2］.有研究 ［3］报道，沙棘中主要的成分有萜类、黄酮类和皂苷类，本研究将沙棘果实的萃取物进行分离，通过理化性质和广谱数据分析进行鉴定，得到了一定的结果，现报道如下.

1　材料和方法

1.1 一般材料 选择我国西北地区生产的中国沙棘（H.rhamnoides subsp.sinensis）的果实作为研究材料.

1.2 试验仪器 MPS3显微熔点测定仪；ARX300核磁共振仪；薄层色谱硅胶GF254；柱色谱硅胶；葡聚糖凝胶Sephadex LH20等.

1.3 试验试剂 甲醇、乙醇、硫酸、石油醚、乙酸乙酯、氯仿、正丁醇等.

1.4 方法 使用95%体积分数的乙醇将新鲜的中国沙棘果实5 kg进行3次提取回流，每次2 h，得到乙醇回收浸膏215 g.将上述得到的浸膏悬浮于水中，分别使用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇等有机溶剂进行萃取，依次得到85 g、15 g、30 g、46 g的回收浸膏.使用石油醚丙酮在硅胶柱中对石油醚层萃取物进行洗脱，反复纯化后经HPLC分离得到化合物A和化合物B.氯仿层萃取物反复纯化后得到化合物C、D；乙酸乙酯层萃取物使用氯仿甲醇梯度洗脱后经硅胶柱反复纯化，再经葡聚糖凝胶Sephadex LH20纯化得到化合物1和5，正丁醇层萃取物分离使用氯仿甲醇梯度洗脱后经硅胶柱反复纯化，使用葡聚糖凝胶Sephadex LH20纯化后得到化合物2、H，经HPLC分离得到化合物I和A.

2　结果

化合物A：其在石油醚中呈白色针晶，在体积分数为10%的硫酸乙醇溶液中呈紫色，LiebermannBurchard反应呈阳性，和已知的标准品β谷甾醇的理化性质完全一致.

化合物B：在氯仿甲醇洗涤液中呈白色针晶，在体积分数为10%的硫酸乙醇溶液中呈紫色，LiebermannBurchard反应呈阳性，和已知的标准品β豆甾醇的理化性质完全一致.

化合物C：其甲醇溶液为无色油状物，在体积分数为10%的硫酸乙醇溶液中为墨绿色，其理化性质和波普数据与报道的一致，初步鉴定为5羟基糠醛 ［4 ］.

化合物D：在甲醇氯仿溶液中为白色颗粒状结晶，在体积分数为10%的硫酸乙醇溶液中呈紫色，LiebermannBurchard反应呈阳性，和已知的标准品胡萝卜苷的理化性质完全一致.

化合物E：甲醇溶液中呈白色针状结晶，溴甲酚绿、三氯化铁铁氰化钾反应呈阳性，是一类含有酚羟基的羧酸类物质，其理化性质和波普数据与化合物4羟基苯甲酸一致.

化合物F：易溶于氯仿，其熔点为304～306℃，LiebermannBurchard反应呈阳性，其光谱分析结果为齐墩果烷性三萜的特征碳信号，理化性质和波谱数据和文献报道齐墩果酸一致 ［5］.

化合物G：其溴甲酚绿反应呈阳性说明其含有COOH，根据其化学结构中存在甲氧基、亚甲基碳信号等谱学规律、碳谱、氢谱等相关数据可推测其为2羟基丁二酸4甲酯.

化合物H：为白色针晶，熔点198～200℃.溴甲酚绿、三氯化铁铁氰化钾反应结果均为阳性，说明该物质中同时含有酚羟基的羧酸类物质，其波谱结果和理化性质与3，4二羟基苯甲酸完全一致.

化合物I：为物色结晶，其溴甲酚绿反应呈阳性，光谱分析结果显示其含有亚甲基质子信号和芳香质子信号，其理化性质和γN（2呋喃基甲基）丁胺酸.

3　讨论

沙棘中含有较高的生物活性成分，作为经济树种，其果实生物活性成分的提取工艺有很多种，其中沙棘黄酮、沙棘果胶、沙棘黄色素等提取的工艺各不相同 ［6］.本研究从沙棘果实原材料中分离得到九种化合物，通过化学、谱学方法对这九种化合物进行鉴定，有黄酮类化合物、芬酸类化合物、甾醇类化合物、脂类化合物等，分别为β谷甾醇、β豆甾醇、5羟基糠醛、胡萝卜苷、4羟基苯甲酸、齐墩果酸、2羟基丁二酸4甲酯、3，4二羟基苯甲酸和γN（2呋喃基甲基）丁胺酸.

综上所述，使用硅胶柱、色谱方法等可有效分离鉴定沙棘中的有效成分.