淋巴细胞免疫表型联合CCL-2水平检测对复发性流产的诊断价值

宋丽，穆春华，陆晓媛

(1徐州医学院研究生学院，江苏徐州221002;2泗阳县人民医院;3徐州医学院)

复发性流产(RSA)是一类常见的妊娠疾病，其发生与多种因素相关。趋化因子在调节滋养细胞的迁移和侵袭、促进胎盘形成、调节淋巴细胞等方面具有重要作用;当趋化因子和(或)趋化因子受体表达量或活性异常时，可能导致胚胎的早期丢失。目前研究显示，淋巴免疫表型与RSA的发生具有一定的联系，但具体机制尚不明确。为此，本研究对RSA患者外周血淋巴细胞表型及趋化因子水平进行了研究。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2012年8月～2013年8月在徐州医学院附属医院妇产科门诊就诊的RSA患者60例(RSA 组)，年龄22～38(31.1±5.7)岁。超声诊断发现胚胎发育停止或者枯萎，无胎心搏动，确诊流产。患者均符合RSA的相关标准:流产次数超过2次，染色体检查正常，内分泌系统无异常，无子宫疾病。另选取同期终止妊娠的健康妇女30例作为对照组，年龄 21 ～39(30.3 ±4.3)岁，无流产史，染色体正常，妇科检查指标正常。两组年龄、孕周等差异无统计学意义(P＞0.05)。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 RSA组及对照组抽取静脉血5 mL，然后进行吸宫手术;吸宫手术收集的绒毛及蜕膜组织处理后立即用液氮冷却，低温保存。

1.2.2 淋巴免疫表型分布检测 静脉血经处理后，加入荧光标记CD127鼠抗人单抗各20 μL，避光15 min后加入500 μL溶血素，PBS洗涤离心弃去上清，流式细胞仪检测。

1.2.3 血清CCL-2水平检测 参照双抗体夹心酶标免疫分析方法的一般操作要求，对患者血清标本进行CCL-2水平检测，采用酶标仪450 nm测定吸光度，绘制标准曲线，计算CCL-2浓度。

1.2.4 绒毛、蜕膜组织CCL-2表达检测 采用蛋白免疫印迹法，参照试剂盒操作规程检测绒毛、蜕膜组织CCL-2表达情况。

1.2.5 统计学方法 采用 SPSS18.0统计软件，计量资料以±s表示，两组间符合正态分布资料比较采用t检验，不符合正态分布资料采用秩和检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清淋巴免疫表型比较 见表1。

表1 两组血清淋巴免疫表型比较(%，±s)

表1 两组血清淋巴免疫表型比较(%，±s)

组别 n CD+3 CD+4 CD+8 CD+16CD+56 CD+4CD+25CD127 RSA 组 60 56.5 ±5.6 38.1 ±6.6 25.6 ±3.1 23.2 ±2.3 7.9 ±1.2对照组 30 51.0 ±4.1 30.5 ±2.5 22.9 ±4.1 18.2 ±1.7 10.6 ±1.8 t 2.79 3.15 2.56 4.15 3.25 P 0.031 0.027 0.068 0.015 0.026

2.2 两组血清 CCL-2水平比较 RSA组、对照组 血清CCL-2水平分别为(16.1±2.1)、(9.8±4.1)g/L，RSA组CCL-2水平高于对照组(P＜0.05)。

2.3 绒毛、蜕膜组织CCL-2表达情况 RSA组绒毛及蜕膜组织中CCL-2呈现高表达状态，高于对照组表达水平。见图1。

图1 及对照组绒毛及蜕膜组织中CCL-2的表达情况

3 讨论

妊娠是指胚泡和母体组织结合的一个复杂的生理过程，类似于器官移植，将父母双方的抗体抗原进行融合、识别，并产生相关作用的一个过程［1］。免疫学认为，妊娠的过程是父方抗原成分与母体免疫系统识别产生免疫应答的过程［2］，但是妊娠结局与器官移植产生的免疫应答不同，它是一种特殊类型的同种异体移植。因此，胚胎与母体之间的免疫平衡是妊娠成功与否的关键。大量的研究证明，妊娠失败多与母体的免疫排斥有关，当胚胎与母体免疫系统产生排斥，母体免疫系统会发生免疫应答，产生免疫耐受，导致进一步的妊娠失败。但是，RSA与免疫应答及与何种免疫表型具有关联，仍然是临床研究的热点问题［3］。

RSA是无明显病理原因的多次流产，其产生的原因复杂［4～6］，临床常见的是免疫性和非免疫性RSA。非免疫性的RSA主要表现为染色体异常、生殖系统异常;而免疫性的RSA主要表现为免疫功能紊乱，其中还包括自体免疫性RSA和非自体免疫型RSA。目前关于RSA与免疫因子的关系尚不清楚，本研究希望通过RSA患者与正常人群的淋巴免疫表型的差异，寻找RSA的免疫应答机制。本研究发现，RSA 患者中分布与对照组有统计学差异，RSA患者淋巴细胞免疫表型以为主。但是，本研究仅用流式细胞仪对血清中的免疫细胞进行了荧光标记，样本量较小，其结果的真实性仍然需要进一步研究。

CCL-2是一类较为常见的趋化因子，与免疫系统应答有一定联系。趋化因子在调节滋养细胞的迁移和侵袭，促进胎盘形成，调节外周血淋巴细胞迁移、募集和归巢中起着决定性的作用［7］。当趋化因子和(或)趋化因子受体表达量或活性异常时，可能导致胚胎的早期丢失。研究表明，趋化因子与母胎之间存在非常紧密的联系，在胚胎着床及生长过程中，趋化因子产生非常重要的作用［8］。免疫学的深入研究显示，RSA与免疫应答具有密切的联系［9～11］;同时，RSA 与胚胎周围局部功能异常的细胞分泌细胞因子有关，并在调节细胞迁移侵袭、促进胎盘形成的过程中起到关键作用［12］。本研究发现，RSA患者血清CCL-2水平明显高于对照组，在绒毛及蜕膜组织中CCL-2也呈现高表达状态，进一步印证了RSA患者的趋化因子异常。

综上所述，淋巴细胞免疫表型联合CCL-2水平检测对临床诊断RSA有重要作用。

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