直肠癌组织MRP的表达及临床意义

吴伟宏　王丰平　费胜琪　陈贵平

直肠癌组织MRP的表达及临床意义

吴伟宏王丰平费胜琪陈贵平

目的 探讨直肠癌组织中多药耐药相关蛋白（MRP）的表达情况与临床病理资料、生存情况的相关性。方法 应用免疫组化方法检测直肠癌组织中MRP的表达情况，并分析MRP表达与患者临床病理参数及预后之间的关系。结果 在194例直肠癌术后组织标本中，有86例（44.3%）存在MRP的高表达，与肿瘤组织分化程度（P=0.029）显著相关，而未发现其与直肠癌患者年龄、性别、生长方式、TNM分期等因素的相关性。生存分析发现MRP高表达的患者远期生存时间明显长于低表达组（P=0.014）。结论 直肠癌组织中MRP的表达情况与肿瘤分化程度存在关联，并影响患者的预后。

直肠癌 多药耐药相关蛋白 免疫组化

多药耐药相关蛋白（MRP）是多种恶性肿瘤产生化疗耐药的物质基础，近年来对其生理功能、转运调控等机制进行了较多研究和探讨，但是在具体临床应用中的研究不多。为此，本观察应用免疫组化方法检测直肠癌组织中MRP的表达情况，并结合临床探讨其与病理特征及预后之间的关系。报道如下。

1　临床资料

1.1一般资料 收集长兴县人民医院2007年11月至2012年9月194例直肠癌患者的术后组织标本，病理均证实为直肠腺癌，患者之前均未被诊断为其他恶性肿瘤，未行放化疗等抗肿瘤治疗。本组中男118例，女76例；年龄17～82岁，平均（56.8±11.5）岁。浸润深度：T1 2例、T2 46例、T3 141例、T4 4例。淋巴结转移：N0 87例、N1 53例、N2 108例。远处转移：阴性183例、阳性11例。病理分期：Ⅰ期28例、Ⅱ期46例、Ⅲ期109例、Ⅳ期11例。

1.2试剂与方法 MRP一抗试剂盒购自福州迈新生物工程技术公司。免疫组化：所有标本经10%甲醛固定，石蜡包埋，制成4μm连续切片；用磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作阴性对照，已知表达阳性的肿瘤组织作阳性对照。结果判断在光学显微镜下观察，以细胞结构中存在粗细一致的棕黄色颗粒为阳性，无着色或阳性细胞比例＜10%为（-），阳性细胞在10%～25%为（+），25%～75%为（++），＞75%为（+++）。参考既往文献，将其分成两组：（-）和（+）合并成低表达组；（++）和（+++）合并成高表达组。

1.3随访 随访方式为门诊+电话随访，记录完整的随访资料。定义终点事件为死亡，自确诊日期开始计算总生存期（OS），末次随访时间为2013年12月10日，失访者以最近一次有效随访日期作为截尾值处理。

1.4统计学方法 采用SPSS 18.0统计软件。采用Pearson卡方检验进行MRP表达与各项临床病理资料之间的分析。采用乘积极限法进行单因素生存分析，绘制生存曲线，用对数秩检验进行生存曲线比较。采用COX回归进行多因素生存分析，显著性检验采用Wald检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1直肠癌组织MRP表达状态 在194例直肠癌术后标本中，表达（-）者40例，表达（+）者68例，表达（++）者50例，表达（+++）者36例，MRP高表达组占44.3%（86/194）。

2.2MRP表达与直肠癌患者临床病理特征 MRP表达与肿瘤组织分化程度（P=0.029）相关，与患者性别，年龄，肿瘤局部浸润程度、淋巴结转移、远处转移、病理分期等情况均不存在统计学上的相关性（P＞0.05）。

2.3MRP表达与直肠癌患者预后 108例MRP低表达的患者中有33例在随访期内死亡，5年生存率为63.3%，而86例阴性表达的患者只有13例死亡，5年生存率为80.3%，两者之间差异显著（χ2=6.309，P=0.012）。Kaplan-Meier单因素生存分析发现：患者的总生存期（OS）在T分期（χ2=9.768，P=0.020）、N分期（χ2=14.129，P=0.001）、M分期（χ2=34.872，P=0.000）、病理分期（χ2=41.325，P=0.000）、MRP表达（χ2=6.046，P=0.014）中差异均有统计学意义，提示病理分期晚、MRP低表达等因素致患者总生存期缩短，而在性别、年龄、肿瘤大小，生长方式、分化程度等因素上无差异。患者总生存期（OS）的Cox多因素回归分析结果为T分期（P=0.033）、N分期（P=0.018）、M分期（P=0.000）、MRP表达（P=0.023）进入方程，其中MRP表达的相对危险度（relative risk，RR）为0.460（95%CI：0.236～0.899），即MRP高表达组在随访期间死亡的风险是低表达组的0.460倍。

3　讨论

MRP是一种由1531个氨基酸组成的膜磷蛋白，结构序列分析提示其属于转运系统的ABC超家族的成员，自1992年被Cole等［1］在非P-gp介导的MDR小细胞肺癌细胞株上发现报道后，大部分研究都是在其产生肿瘤耐药的机制方面进行。近年来的临床研究均认为MRP高表达会降低化疗疗效［2，3］，但患者的生存是否获益，则根据肿瘤类型及研究方法的不同，存在意见不一的情况［4，5］。

本资料用免疫组化方法对194例直肠癌术后组织中MRP的表达情况进行检测，发现直肠癌组织中MRP的高表达率为44.3%（86/194）。将MRP表达与患者临床资料进行分析，发现与肿瘤组织分化程度相关，该现象在其它肿瘤中亦有类似报道。Koshiyama等［6］在卵巢癌的研究中发现93% 的G1中存在MRP高表达，高于G2/G3的44%（P＜0.05），提示MRP在直肠癌的组织分化过程中发挥一定作用，其表达水平高可使组织分化较好。

在预后方面，患者的OS在MRP低表达组明显长于高表达组（P=0.014），这提示直肠癌术后患者的预后和MRP表达相关。这与很多研究认为MRP高表达会降低患者生存率的结论相反，从既往已知的机制解释，MRP主要是通过减少细胞内化疗药物聚集浓度而发生耐药［7，8］，进而导致存在肿瘤负荷的患者无法获得有效的化疗，肿瘤不能得到有效控制，生存时间也就相应变短。但不同于这些研究，本资料的入选人群均为术后患者，肿瘤负荷已基本消除，不存在原发肿瘤对化疗耐药的情况，而在此种状态下MRP的高表达能使患者的生存获益，这提示MRP的作用机制可能存在另外一种未知的途径，值得进一步研究。

1 Cole SP，Bhardwaj G，Gerlach JH，et al. Overexpression of a transporter gene in a multidrug-resistant human lung cancer cell line. Science， 1992，258：1650～1654.

2 Morrow CS， Peklak-Scott C， Bishwokarma B， et al. Multidrug resistance protein 1 （MRP1， ABCC1） mediates resistance to mitoxantrone via glutathione-dependent drug efflux. Mol Pharmacol， 2006， 69（4）：1499～1505.

3 魏学明，顾国利，任力，等.多药耐药基因产物在大肠癌组织中的表达及临床意义. 世界华人消化杂志，2009，17（24）：463～2468.

4 Xu Y， Wang L， Zheng X， et al. Positive expression of p53， c-erbB2 and MRP proteins is correlated with survival rates of NSCLC patients. Mol Clin Oncol， 2013，1（3）：487-492.

5 Yu Z， Peng S， Hong-Ming P， et al. Expression of multi-drug resistancerelated genes MDR3 and MRP as prognostic factors in clinical liver cancer patients. Hepatogastroenterology， 2012，59（117）：1556～1559.

6 Koshiyama M， Fujii H， Kinezaki M， et al. Immunohistochemical expression of topoisomerase IIalpha （Topo IIalpha） and multidrug resistance-associated protein （MRP）， plus chemosensitivity testing，as chemotherapeutic indices of ovarian and endometrial carcinomas. Anticancer Res， 2001，21：2925～2932.

7 Zaman GJR， Flens MJ， van Leusden MR， et al. The human multidrug resistance-associated protein MRP is a plasma membrane drug-efflux pump. Proc Natl Acad Sci USA 1994， 91（19）： 8822～8826.

8 Breuninger LM， Paul S， Gaughan K， et al. Expression of multidrug resistance-associated protein in NIH/3T3 cells confers multidrug resistance associated with increased drug efflux and altered intracellular drug distribution. Cancer Res. 1995， 55 （11）： 5342～5347.

313100 浙江省长兴县人民医院外科（吴伟宏 王丰平费胜琪）

310022浙江省肿瘤医院大肠科（陈贵平）