HSV-2对血管内皮样细胞ECV304的致病特性

田丽茹

（黑龙江省杜尔伯特蒙古族自治县腰新乡卫生院，黑龙江　大庆　166200）

HSV-2对血管内皮样细胞ECV304的致病特性

田丽茹

（黑龙江省杜尔伯特蒙古族自治县腰新乡卫生院，黑龙江大庆166200）

通过对单纯疱疹病毒2型（HSV-2）进行研究，探讨其血管内部的皮样细胞-ECV304的致病特性，并在实验室环境下使得HSV-2对血管内部的皮样细胞ECV304进行感染，从而对其进行细致的观察。通过观察可知，在HSV-2感染管内部的皮样细胞ECV304一天时间内，能够检查到潜伏的有关转录体基因发生感染现象。在经历感染后的第二天时间，可以发现细胞开始出现病变现象，可以得出，HSV-2对血管内部的皮样细胞ECV304具有较强的感染性，从而对ECV304产生破坏作用

HSV-2；血管内皮样细胞ECV304；细胞；病变

HSV-2属于α疱疹病毒类型，大部分在新生儿感染和外生殖器的感染中出现［1］。通过最近几年研究发现其和宫颈癌的发生有着较多的联系。而血管内皮样细胞ECV304属于具有较强增殖活性的一种细胞，和肿瘤等相关病症有着一定的相似性，所以通过使HSV-2对ECV304进行感染，从而可以研究HSV-2在人体内引发细胞感染的因素，为未来的实际治疗工作做好铺垫。

1　材料与方法

1.1病毒、细胞与相关使用试剂

广东第一医院提供了HSV-2，而西南医院肾内科实验室则提供了血管内皮样细胞ECV304。通过杭州的相关生物制品公司购买了胎牛血清，通过武汉博士德生物有限公司购买了羊抗鼠二抗等相关试验必备用品。

1.2对细胞的培养和病毒接种工作

把HSV-2病毒接种到Vero的细胞里，在经过6天后对其进行滴度测试。将ECV304按照正常的培养方式进行培养，并将其接种到胎牛血清的MEM生长的培养基中，等到实际成熟时，将HSV-2在36℃的环境下安放1 h，在放入牛血清培养基中急性培养，并且从第二天开始每隔1天进行1次细胞对照试验，这个过程可以利用高倍显微镜和高清数码相机进行拍摄［2］。

1.3LAT基因蛋白的检查工作

通过运用间接免疫荧光法对LAT蛋白进行检测。具体而言，在六个孔板内插入ECV304的细胞盖玻片，在进行感染试验的1 h后，将2%多聚甲醛同0.1%的X-100的温度稳定30 min，并用1/5的养血清进行PBS稀释，20 min稀释3次，再通过荧光显微镜进行观察

1.4HSV-2对ECV304生长的影响

运用MTT对HSV-2对ECV304生长的影响进行测量，当细胞形成单层的时候，就将病毒放入悬液中放在36℃的培养箱中进行培养，并用具有PBS的洗液洗涤2次，后去除旧液，进行摇晃，并且用EL340酶联免疫仪测量每孔的OD数值，测量16次，运用相关软件，进行测验。

2　结果与分析

2.1对GADPH和LAT基因的相关测试

运用RT-PCR扩增GADPH和LAT基因进行测试，从而可知，当感染体感染后，会增加约148 bp的特异性条带，而且呈阴性。而受感染的血管内部的皮样细胞ECV304则增加约485 bp。

2.2经受HSV-2感染的ECV304观测

当ECV304受到HSV-2感染后，相关细胞逐渐发生病变反应，具体说来就是细胞会逐渐扩增，并且发生核膜位移变化，而接种两天后，其感染加剧，细胞核破裂，在第四天后，发生细胞脱落现象，多核细胞破裂。

2.3电镜下感染的ECV304形态

通过电镜对受到HSV-2感染的ECV304进行观察可以发现，开始阶段对比细胞核正常，并且细胞的膜和核膜都是具有整体性，核仁较为清晰，染色质无异常现象；而在ECV304感染半天后，ECV304细胞开始逐渐发生变化，细胞之间开始互相融合，并且可以发现较为显著的空泡现象，期内有一些没有成熟的病毒分子；在ECV304感染一天后，可以发现多核巨细胞，并且对照组的线粒体结构较为明显，受到感染的细胞体出现空泡化现象、自噬化现象［3］。

3　结 论

在临床医学中，宫颈癌、动脉硬化是较为常见的疾病，虽然我国目前医学水平已经取得了极大的进步，但是对于这些疾病的病因还不了解。血清流行病相关专家通过研究发现HSV-2和宫颈癌、动脉硬化有着较为密切的关系，在本文的试验中，通过对受感染的细胞进行测试，可以发现ESC-2缺失可以使得ECV304受到感染，而且可以存活和繁衍，使受到感染的细胞感染程度加剧，在宿主体内逐渐变多，从而影响宿主的生命健康［4］。

通过具体的试验可以发现，当血管内部的皮样细胞ECV304受到HSV-2感染后，会使得ECV304受到改变，通过改变可以使得次集体逐渐产生抗体，而抗体则可以和皮内细胞的抗原互相结合，从而使补体激活，进而使得皮内细胞受损。而对病毒的增殖曲线进行研究可以发现由于HSV-2的自我繁殖，使得具有感染性病毒的颗粒出现，它的出现既可以让血管局部区域得到病毒滴度上升，从而为病毒进入周围的实质细胞提供便利，也可以让ECV304的新陈代谢功能产生变异。

在这次试验中通过对受到感染后的ECV304进行研究，可以发现细胞的具体变化程度，这表明HSV-2对于ECV304具有较为直接的影响，HSV-2作为重要的感染因素，一旦进入细胞体内，会导致细胞外貌的改变，从而引发人体内的免疫功能，导致新陈代谢混乱的现象［5］。这些年的研究可以表明HSV-2和很多疾病的发生有关，已经严重的影响了人们生活健康，在本次试验中研究了HSV-2对于感染细胞具体的形态变化，为今后研究克制HSV-2的工作提供了相关的理论依据。

［1］ 徐 放，遇广辉，王 普，等.抗HSV-2单链抗体和碱性磷酸酶融合蛋白的制备［J］.浙江工业大学学报，2014，42（1）：45-49.

［2］ 李成德，李 玲，欧丽红，等.宫颈病灶HSV-2感染及其与宫颈癌的关联性［J］.海南医学，2014，（16）：2395-2397，2398.

［3］ 郭立方，王 荣，贾正平，等.氨甲喋呤对映体对ECV304细胞抑制作用及其机制［J］.中国药理学通报，2010，26（2）：213-216.

［4］ 陈小义，徐忠伟，王 娜，等.哇巴因对血管内皮细胞ECV304细胞凋亡及胞内游离钙离子和活性氧浓度的影响［J］.中国药理学与毒理学杂志，2010，24（4）：241-248.

［5］ 刘 宁，薛耀明，朱 波，等.低浓度葡萄糖诱导ECV304细胞损伤机制的初探［J］.南方医科大学学报，2010，30（10）：2314-2317.

本文编辑：杨 志

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ISSN.2095-6681.2015.020.004.02