吡格列酮对不稳定型心绞痛合并糖尿病患者内皮祖细胞数量及脂联素水平的影响

陈立东，肖敏，张绪国，朱艳霞，梁鹏飞，邹兆坤

· 论著 ·

吡格列酮对不稳定型心绞痛合并糖尿病患者内皮祖细胞数量及脂联素水平的影响

陈立东，肖敏，张绪国，朱艳霞，梁鹏飞，邹兆坤

目的探讨吡格列酮对不稳定型心绞痛（UAP）合并2型糖尿病患者内皮祖细胞（EPCs）数量及脂联素水平的影响。方法入选自2010年6月至2011年5月在湖北医药学院附属太和医院住院的有UAP合并2型糖尿病患者57例，随机分为吡格列酮组（n=28）和对照组（n=29），吡格列酮组应用吡格列酮（30 mg/d）治疗，对照组患者不使用噻唑烷二酮类药物。治疗前及治疗12周时通过流式细胞技术双色分析法检测所有患者外周血中EPCs占有核细胞的百分比，其中EPCs用CD34+/KDR+双标记定位，比较两组患者在干预前后内皮祖细胞数量的变化及血清脂联素水平的变化。结果两组患者在治疗前EPCs的数量无统计学差异（P＞0.05）。治疗12周时，吡格列酮组患者EPCs数量较治疗前明显增加（0.023±0.010 vs. 0.051±0.012，P＜0.01）；对照组患者EPCs数量在治疗前后无统计学差异（P＞0.05）；12周时，吡格列酮组患者EPCs数量高于对照组患者（P＜0.028）。吡格列酮组血清脂联素水平在治疗前、后有统计学差异（P＜0.05）；对照组患者血脂联素水平在治疗前、后无统计学差异（P＞0.05）；12周时，吡格列酮组患者血清脂联素水平高于对照组患者（P＜0.05）。结论 吡格列酮能够促进冠心病合并糖尿病患者EPCs的动员，提高患者血清脂联素水平。

吡格列酮；内皮祖细胞；冠状动脉粥样硬化性心脏病；2型糖尿病

近期临床研究表明，吡咯列酮能降低2型糖尿病患者心血管事件的发生率[1]，但其具体机制尚不清楚。内皮祖细胞（EPCs）对于动脉粥样硬化性疾病中血管内皮功能修复有重要的作用[2]，而且冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）患者外周血EPCs的数量与心血管不良事件的发生风险呈负相关[3]，EPCs数量可作为预测冠心病患者心脏不良事件发生风险性的重要指标。吡格列酮具有动员2型糖尿病患者内皮祖细胞的作用[4]，但对合并有糖尿病的冠心病患者是否具有类似的作用尚不清楚，本研究旨在观察吡格列酮对于冠心病合并糖尿病患者外周血中EPCs数量及血脂联素含量的影响，探讨吡格列酮改善不稳定型心绞痛合并2型糖尿病患者临床预后的可能机制。

1 资料与方法

1.1 研究对象入选2010年6月至2011年5月在湖北医药学院附属太和医院住院的不稳定型心绞痛合并2型糖尿病患者57例。入选标准：①临床确诊2型糖尿病患者且糖化血红蛋白（HbA1c）水平在6.5%～9.0%之间；②经冠状动脉造影证实为冠心病，临床表现符合不稳定心绞痛诊断标准；③住院期间接受冠状动脉支架置入治疗；④无心功能不全；⑤未合并严重肝、肾疾患者。排除标准：①已接受过噻唑烷二酮类药物治疗；②存在应用吡格列酮禁忌证，如药物过敏、心功能不全、肝肾功能异常。将入选患者随机分为吡格列酮组（n=28）和对照组（n=29），两组患者可根据病情选择磺脲类、双胍类、α-糖苷酶抑制剂等口服药物以及皮下注射胰岛素控制血糖，吡格列酮组患者应用吡格列酮（30 mg/d）治疗，其中对照组患者不使用噻唑烷二酮类药物，入选患者均要求在入院后将其血糖控制于目标水平（即空腹血糖：3.9～7.2 mmol/L，随机血糖≤10.0 mmol/L）。

1.2 冠状动脉介入治疗患者术前常规服用阿司匹林、氯吡格雷等药物，之前未服用上述药物者，按指南要求术前给予负荷量，冠状动脉介入治疗（PCI）术中应用肝素（100 IU/kg）抗凝治疗，冠状动脉支架均选用国产雷帕霉素洗脱支架（Partner支架，乐普公司），术后正规服用双联抗血小板药物至少1年。

1.3 EPCs检测的主要试剂异硫氰酸荧光素（FITC）标记的CD34抗体购自美国BD Pharmingen公司。VEGFR-2+/KDR单克隆抗体（用藻红蛋白PE标记）、红细胞裂解液试剂盒（流式细胞专用，包含红细胞裂解液、洗液、固定液）、ELISA 试剂盒（检测脂联素）购自美国R&D公司。

1.4 EPCs数量和血脂联素水平的检测所有患者在接受PCI术后即刻及12周后抽取外周静脉血以检测EPCs数量和血脂联素的水平。EPCs数量的检测：采集外周静脉血标本，分别取100 μl加入2个15 ml的离心管中。取一管作阴性对照（未加PE标记和APC标记的抗体），另一管中加入10 μl FTIC标记的CD34抗体及10 μl PE标记的VEGFR-2+/KDR单克隆抗体，震荡混匀，室温避光孵育15 min。取200 μl红细胞裂解液，用去离子水稀释10倍后加入离心管中，震荡、混匀，室温避光孵育10 min，然后以300 g的离心力离心5 min后弃上清液。取200 μl红细胞洗液，用去离子水稀释10倍加入离心管中，再次震荡、混匀，然后以300 g的离心力离心5 min后弃上清液。加入400 μl稀释了10倍的红细胞洗液和50 μl固定液。通过流式细胞仪（美国Beckman公司)对试管中的CD34+/KDR+双标记的阳性细胞和有核细胞进行计数。以EPCs占外周血有核细胞的百分比代表作为外周血EPCs数量的统计量。血脂联素的检测采用ELISA法测定。

1.5 统计学分析应用SPSS 17.0 统计软件。计量资料用均数±标准差表示，两组间均数比较采用t检验和单因素方差分析，治疗前后组内差别比较使用协方差分析，计数资料比较采用卡方检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者的临床基本特征吡格列酮组和对照组患者的平均年龄分别为（59.6±7.5）岁和（61.0±8.6）岁，两组患者在年龄、性别构成、体质指数、冠心病危险因素方面（如合并吸烟、高血压病、血脂异常等），以及基础血糖水平、使用胰岛素治疗患者的比例等均无统计学差异（P均＞0.05，表1）。

2.2 两组患者冠状动脉病变特征及介入治疗情况比较两组患者在冠状动脉病变数量、分布位置以及复杂病变构成比例无统计学差异（P均＞0.05）；吡格列酮组患者共置入46枚支架，对照组共置入52枚支架，两组患者在PCI术中所用支架的平均长度及支架直径比较，无统计学差异差异（P均＞0.05，表2）。

表1 两组患者的临床及冠脉病变特征

表2 冠脉病变特征及介入治疗情况

2.3 EPCs数量和血脂联素的变化情况两组患者在治疗前EPCs的数量无统计学差异（P＞0.05）。治疗12周时，吡格列酮组患者EPCs数量较治疗前明显增加（0.023±0.010 vs. 0.051±0.012），治疗前后比较存在显著统计学差异（P＜0.01）；对照组患者EPCs数量治疗前后比较无统计学差异（P＞0.05）；12周时，吡格列酮组患者EPCs数量高于对照组患者（P＜0.028）（表3）。治疗12周时，两组患者血清脂联素水平均较治疗前增高，吡格列酮组血清脂联素水平在治疗后增高明显，治疗前后差异有统计学意义（P＜0.05）；对照组患者血脂联素水平治疗前后比较无统计学差异（P＞0.05）；12周时，吡格列酮组患者血清脂联素水平高于对照组患者（P＜0.05）（表3）。

3 讨论

内皮祖细胞（EPCs）亦称成血管细胞，可参与血管损伤的修复。研究已证实：EPCs在血管内皮损伤后自身修复过程中发挥重要作用[5]。目前公认EPCs 表面标记有3种：CD133、CD34和VEGFR-2（KDR），其中CD133+/CD34+/ KDR+的内皮祖细胞主要存在于骨髓中，位于外周血中内皮祖细胞表达CD133减少，但继续表达CD34，并开始表达KDR[6]，因此，本研究以表达CD34和KDR双阳性的细胞作为循环内皮祖细胞。研究显示，经吡格列酮治疗12周，入选患者CD34+/KDR+细胞数量明显增高，表明吡格列酮能提高不稳定型心绞痛合并糖尿病患者外周循环中EPCs数量。

外周血中EPCs所占数量比可以作为预测血管恢复能力和心血管病危险程度的可靠指标。其数量的减少提示血管内皮的自我修复能力降低、同时心血管疾病的发生风险增高[3]。在有关糖尿病患者的研究中发现，与非糖尿病患者相比，糖尿病患者外周血中EPCs 数量明显减少，且与糖尿病的严重程度呈负相关。目前认为，糖尿病患者EPCs数量减少导致内皮修复功能失调是促进动脉粥样硬化性疾病进展的重要因素之一[7]。 结合本研究的结果提示，吡格列酮能够促进糖尿病患者EPCs的动员，因此在改善机体血管内皮修复能力、抑制冠状动脉粥样硬化性疾病进展方面能够发挥有益的作用。

本研究还发现，吡格列酮能提升不稳定心绞痛合并糖尿病患者血脂联素的水平。既往体外研究也发现，吡格列酮能够通过直接激活转录区上游的启动子增加脂联素mRNA的转录水平，进而促进脂肪组织分泌脂联素[8]。脂联素是一种由脂肪组织合成分泌的有胰岛素增敏作用的调节激素，该激素能够通过减轻内皮细胞炎性损伤、减少泡沫细胞形成及抑制血管平滑肌细胞增殖、迁移等多种途径发挥抗动脉粥样硬化的作用[9]；近来研究还发现，脂联素还具有抑制EPC凋亡[10]、改善EPC内皮修复能力的作用。本研究结果提示，吡格列酮可能通过上调机体血脂联素的分泌水平，进一步促进机体EPC的动员、增殖过程。

迄今已有多项临床研究证实吡格列酮可以降低2型糖尿病高危患者心脑血管不良事件的风险性，但其中的具体机制目前尚不清楚。本项研究的结果显示，吡格列酮可能通过提升血脂联素的水平、促进机体EPC动员等途径改善冠心病合并糖尿病患者的临床预后，但由于本研究入选的患者例数较少，这一结论尚有待于更大样本量的研究来证实。

表3 外周血中EPCs数量和脂联素的变化情况

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Influences of pioglitazone on quantity of endothelial progenitor cells and adiponectin level in patients with unstable angina pectoris complicating diabetes

CHEN Li-dong*, XIAO Min, ZHANG Xu-guo, ZHU Yan-xia, LIANG Peng-fei. ZOU Zhao-kun*Department of Emergency, Taihe Hospital, Hubei University of Medicine, Shiyan 442000, China.

ObjectiveTo investigate the influences of pioglitazone on quantity of endothelial progenitor cells (EPCs) and adiponectin level in patients with unstable angina pectoris (UAP) complicating type 2 diabetes mellitus (T2DM).MethodsThe patients (n=57) were randomly divided into pioglitazone group (n=28) and control group (n=29), and pioglitazone group was treated with pioglitazone (30 mg/d) and control group was not given TZD drugs. The percentage of peripheral EPCs in karyocytes was detected by using flow cytometry and double color analysis before treatment and 12 w after treatment, and EPCs were localized with CD34+/KDR+ double labeling. The changes of quantity of EPCs and level of serum adiponectin were compared between 2 groups before and after treatment.ResultsThe quantity of EPCs had no statistical difference between 2 groups before treatment (P＞0.05). After treatment for 12 w, the quantity of EPCs increased significantly in pioglitazone group (0.023±0.010 vs. 0.051 ±0.012, P＜0.01), and had no statistical difference in control group (P＞0.05). The quantity of EPCs was higher in pioglitazone group than that in control group 12 w after treatment (P＜0.028). The level of serum adiponectin had statistical difference in pioglitazone group before and after treatment (P＜0.05), while had no statistical difference in control group (P＞0.05). The level of serum adiponectin was higher in pioglitazone group than that in control group 12 w after treatment (P＜0.05).ConclusionPioglitazone can improve the mobilization of EPCs and level of serum adiponectin in patients with UAP complicating T2DM.

Pioglitazone; Endothelial progenitor cells; Coronary atherosclerosis; Type 2 diabetes mellitus

R541.4

A

1674-4055(2015)01-0069-03

2014-05-19）

（责任编辑：田国祥）

442000 十堰，湖北医药学院附属太和医院急诊科

邹兆坤,E-mail:mqrrp@163.com

10.3969/j.1674-4055.2015.01.22