大黄蟅虫丸对大鼠慢性脂肪肝的治疗作用

魏 莹，徐守竹，刘俊田（西安交通大学医学部药理系，西安 710061）

大黄蟅虫丸对大鼠慢性脂肪肝的治疗作用

魏 莹，徐守竹，刘俊田＊（西安交通大学医学部药理系，西安 710061）

目的 观察大黄蟅虫丸对大鼠慢性脂肪肝的影响。方法 SD大鼠40只，随机分为正常对照组、模型对照组、大黄蟅虫丸高剂量组和低剂量组。采用乙醇加高脂饲料喂养建立脂肪肝模型，灌胃给予大黄蟅虫丸治疗30d，观察大黄蟅虫丸对慢性实验性脂肪肝的治疗作用。结果 大黄蟅虫丸可改善脂肪肝模型大鼠一般状况；降低肝脏质量，减小肝脏指数；降低血清TC、TG、LDL，升高HDL水平，降低血清ALT和AST活性；减少大鼠肝组织总脂肪、TC、TG含量，抑制大鼠肝组织MDA产生，升高TSOD活性；减轻肝脏脂肪性病理变化。结论 大黄蟅虫丸对大鼠慢性脂肪肝有治疗作用，作用机制与降低血脂、抗脂质过氧化作用及活血化瘀功能有关。

大黄蟅虫丸；动物模型；脂肪肝

脂肪肝［1－2］（fatty liver）是由一种或者多种原因引发的以肝脏脂类物质（一般是三酰甘油）蓄积为病理改变的肝脏疾病，不同种族、年龄及性别均可发病，以40～49岁的发病率最高，我国成人患病率为15%～25%。近年来，随着人们生活水平的提高以及饮食结构的改变，脂肪肝的发病率呈上升趋势，并且患病年龄日趋提前。目前脂肪肝的治疗尚缺乏有效的药物。因此，脂肪肝的预防、早期诊断、及时治疗非常重要。

大黄蟅虫丸是汉代医学家张仲景《金匮要略》中的经典名方，由熟大黄﹑土鳖虫﹑水蛭﹑虻虫﹑蛴螬﹑干漆﹑桃仁﹑苦杏仁﹑黄芩﹑地黄﹑白芍﹑甘草等12味中药组成。大黄、桃仁、干漆配蟅虫、水蛭、虻虫等起到攻逐破血、活血通络之功效；黄芩清热解毒，地黄、芍药、甘草滋养补虚。该方融补虚扶正、软坚散结、活血逐瘀为一体，主要用于瘀血内停、腹部肿块、肌肤甲错、目眶黯黑、潮热羸瘦、经闭不行。祖国医学认为，脂肪肝属于“积证”、“积聚”、“痰浊”、“肥气”等范畴，治疗以疏肝养血、化浊消瘀为主，提示大黄蟅虫丸对脂肪肝可能有治疗作用。本研究通过建立大鼠脂肪肝模型，比较治疗前后血清学指标及肝组织学的变化，观察大黄蟅虫丸对慢性实验性脂肪肝的治疗作用，以期为临床应用提供理论依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 AU640全自动生化分析仪（日本Olympus公司）；DRHW2恒温水浴箱（北京西城区医疗器械厂）；TDL－80－2B台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；722光栅分光光度计（上海第三分析仪器厂）。

1.2 试药 大黄蟅虫丸，广东恒诚制药有限公司生产（批号1407701）；丙二醛（MDA）测试盒（批号20141011），超氧化物歧化酶（SOD）测试盒（批号20141025），蛋白定量测试盒（批号20141016），均由南京建成生物工程研究所提供；胆固醇为Sigma公司产品（批号MKBD9436V）。

1.3 动物 SD大鼠，SPF级，雌雄各半，体质量200～250g，由西安交通大学医学部实验动物中心提供。

2 方法

2.1 大鼠脂肪肝模型的建立 将大鼠适应性饲养1周后，随机分为正常对照组10只、模型组30只，按文献方法［3－8］联合应用乙醇和高脂饲料建立慢性脂肪肝模型。正常对照组大鼠喂以标准饲料，同时灌胃给予生理盐水；模型组大鼠喂以高脂饲料（由质量分数20%猪油、质量分数0.5%胆固醇、质量分数79.5%常规饲料组成），同时灌胃给予体积分数30%乙醇，10mL·kg－1，每天1次，连续30d。

2.2 给药方法 从实验第31天起所有大鼠改为标准饲料饲养，并停止给予乙醇。将模型组大鼠随机分为模型对照组10只、大黄蟅虫丸高剂量组10只和大黄蟅虫丸低剂量组10只。正常对照组及模型对照组大鼠灌胃等容积的生理盐水，大黄蟅虫丸高、低剂量组分别灌胃给予大黄蟅虫丸1.6和3.2g·kg－1，连续30d。

2.3 检测指标 末次给药后禁食16h，称大鼠体质量，静脉注射乌拉坦麻醉大鼠，打开腹腔，腹主动脉采血，分离血清，用全自动生化分析仪测定血清总胆固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triglyceride，TG）、高密度脂蛋白（high density lipoprotein，HDL）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL）、丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate amin－otransferase，AST）。摘取肝脏并称质量，计算肝脏指数（肝脏指数＝肝湿质量／体质量×100）。肉眼观察肝脏外观后，取部分肝脏匀浆，用香草醛比色法［9］测定肝脏总脂肪含量及TC、TG、丙二醛（malondialdehyde，MDA）和总超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，T－SOD）。另取部分肝脏用质量分数15%的甲醛固定，石蜡包埋切片，HE染色，光镜下观察组织病理学变化。

2.4 统计学处理 使用SPASS18.0统计学软件，进行单因素方差分析法分析，计量资料均用±s表示，两组间均数比较采用t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

3 结果

3.1 大黄蟅虫丸对脂肪肝大鼠一般状况的影响 实验期间，正常对照组大鼠活动灵活，饮食正常，皮毛光泽，体质量持续增加；模型对照组大鼠精神萎靡，活动减少，饮食减少，体质量增加缓慢；给药组大鼠较模型对照组大鼠有不同程度的改善。

3.2 大黄蟅虫丸对脂肪肝大鼠体质量、肝质量、肝脏指数的影响 结果见表1。实验结果表明，大黄蟅虫丸各剂量组大鼠初始体质量与模型对照组差异无统计学意义；实验结束时模型对照组与大黄蟅虫丸各剂量组大鼠体质量差异亦无统计学意义。与正常对照组比较，模型对照组大鼠肝脏质量增加，肝脏指数增大（P＜0.01）；与模型对照组比较，大黄蟅虫丸高、低剂量组大鼠肝脏质量减轻，肝脏指数减小（P＜0.05），提示大黄蟅虫丸可减轻脂肪肝大鼠的肝肿大。

表1 大黄蟅虫丸对脂肪肝大鼠体质量、肝质量、肝脏指数的影响Tab.1 The effects of body weight，liver weight and liver index of the fatty liver rats by Dahuang Zhechong Pills ±s，n＝10）

表1 大黄蟅虫丸对脂肪肝大鼠体质量、肝质量、肝脏指数的影响Tab.1 The effects of body weight，liver weight and liver index of the fatty liver rats by Dahuang Zhechong Pills ±s，n＝10）

注：与模型对照组比较＊P＜0.05；＊＊P＜0.01。

组别 剂量／g·kg－1体质量／g肝质量／g肝脏指数／mg·g－1正常对照组 0.0 397.7±90.5 9.48±2.31 23.9±2.5＊＊模型对照组 0.0 361.1±101.1 10.05±3.21 27.7±2.5大黄蟅虫丸 1.6 356.6±92.6 9.20±2.88 25.5±1.6＊大黄蟅虫丸 3.2 363.0±95.1 8.72±1.61 24.6±3.2＊

3.3 大黄蟅虫丸对脂肪肝大鼠血脂的影响 结果见表2。模型对照组大鼠血清TC、TG、LDL增加，HDL降低，与正常对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）；与模型对照组比较，大黄蟅虫丸高剂量组大鼠血清TC、TG、LDL降低，HDL升高（P＜0.05或P＜0.01），提示大黄蟅虫丸可改善脂肪肝大鼠血脂的异常变化。

表2 大黄蟅虫丸对脂肪肝大鼠血脂的影响Tab.2 The effects of blood lipid in serum of the fatty liver rats by Dahuang Zhechong Pills ±s，n＝10）

表2 大黄蟅虫丸对脂肪肝大鼠血脂的影响Tab.2 The effects of blood lipid in serum of the fatty liver rats by Dahuang Zhechong Pills ±s，n＝10）

注：与模型对照组比较＊P＜0.05；＊＊P＜0.01。

组别 剂量／g·kg－1TC／mmol·L－1TG／mmol·L－1HDL／mmol·L－1LDL／mmol·L－1正常对照组 0.0 1.50±0.27＊0.35±0.07＊＊1.83±0.54＊0.33±0.10＊模型对照组 0.0 1.81±0.27 0.50±0.14 1.40±0.29 0.42±0.06大黄蟅虫丸 1.6 1.56±0.30 0.49±0.16 1.53±0.38 0.37±0.11大黄蟅虫丸 3.2 1.53±0.30＊0.36±0.05＊＊1.81±0.33＊＊0.33±0.10＊

3.4 大黄蟅虫丸对脂肪肝大鼠肝功能的影响 结果见图1。模型对照组大鼠血清ALT和AST升高，与正常对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）；与模型对照组比较，高剂量大黄蟅虫丸可降低血清ALT和AST活性（P＜0.05或P＜0.01），提示大黄蟅虫丸可减轻脂肪肝大鼠的肝损伤，具有保肝作用。

图1 大黄蟅虫丸对脂肪肝大鼠血清中ALT和AST含量的影响Fig.1 The effects of ALT and AST in serum of the fatty liver rats by Dahuang Zhechong Pills±s，n＝10）

3.5 大黄蟅虫丸对脂肪肝大鼠肝组织总脂肪、TC、TG含量的影响 结果见表3。模型对照组大鼠肝组织总脂肪、TC、TG增加，与正常对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；与模型对照组比较，大黄蟅虫丸减少大鼠肝组织总脂肪、TC、TG含量（P＜0.05或P＜0.01），提示大黄蟅虫丸可减少脂质在肝组织的蓄积。

表3 大黄蟅虫丸对脂肪肝大鼠肝组织总脂肪、TC和TG含量的影响Tab.3 The effects of the TC and TG in fatty liver rats by Dahuang Zhechong Pills ±s，n＝10）

表3 大黄蟅虫丸对脂肪肝大鼠肝组织总脂肪、TC和TG含量的影响Tab.3 The effects of the TC and TG in fatty liver rats by Dahuang Zhechong Pills ±s，n＝10）

注：与模型对照组相比＊P＜0.05；＊＊P＜0.01。

组别 剂量／g·kg－1总脂肪含量／mg·g－1prot TC／μmol·L－1TG／μmol·L－1正常对照组 0.0 189.1±40.1＊18.56±2.73＊48.10±13.04＊模型对照组 0.0 233.4±42.6 21.69±3.57 66.21±22.86大黄蟅虫丸 1.6 191.0±17.0＊＊18.57±1.93＊52.51±13.54大黄蟅虫丸 3.2 192.6±27.9＊15.69±4.31＊＊48.04±14.95＊

3.6 大黄蟅虫丸对脂肪肝大鼠肝组织脂质过氧化的影响 结果见表4。模型对照组大鼠肝组织MDA增多，T－SOD减少，与正常对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.01）；与模型对照组比较，大黄蟅虫丸减少大鼠肝组织MDA产生，升高T－SOD活性（P＜0.05或P＜0.01），提示大黄蟅虫丸具有抗脂质过氧化作用。

表4 大黄蟅虫丸对脂肪肝大鼠肝组织脂质过氧化的影响Tab.4 The effects of liver lipid peroxidation of the fatty liver rats by Dahuang Zhechong Pills ±s，n＝10）

表4 大黄蟅虫丸对脂肪肝大鼠肝组织脂质过氧化的影响Tab.4 The effects of liver lipid peroxidation of the fatty liver rats by Dahuang Zhechong Pills ±s，n＝10）

注：与模型对照组比较＊P＜0.05；＊＊P＜0.01。

组别 剂量／g·kg－1MDA／nmol·mg－1prot T－SOD／U·mg－1prot正常对照组 0.0 1.17±0.19＊＊ 2.22±0.26＊＊模型对照组 0.0 1.65±0.41 1.90±0.21大黄蟅虫丸 1.6 1.41±0.48 2.18±0.25＊大黄蟅虫丸 3.2 1.21±0.51＊ 2.34±0.37＊＊

3.7 大黄蟅虫丸对脂肪肝大鼠肝脏形态学的影响结果见图2。大鼠处死后，肉眼可见正常对照组大鼠肝脏呈鲜红色，边缘锐利，表面光滑，指压有弹性。模型对照组大鼠肝脏呈浅黄色，肝脏体积增大，形状饱满，肝包膜完整，表面光滑，边缘变钝，质软，与周围组织有轻度粘连，切面呈油腻状。大黄蟅虫丸给药组大鼠肝脏有不同程度的改善，表面呈浅红色，无油腻状，指压有弹性，体积缩小。

图2 大黄蟅虫丸对脂肪肝大鼠肝脏组织病理学的影响（×200）A.对照组；B.模型组；C.低剂量组；D.高剂量组Fig.2 The effects of liver tissue pathology of the fatty liver rats by Dahuang Zhechong PillsA.normal control；B.model control；C.low－dose group；D.high－dose group

光镜下可见正常对照组大鼠肝小叶大小形态一致，肝细胞排列规则，肝细胞核、浆着色正常，未发现变性、坏死、炎症等病理表现。模型对照组大鼠肝小叶结构存在，肝细胞弥漫性肿大，肝细胞浆内可见一些大小不一的空泡，细胞核被挤向一侧，胞浆内充满大小不等的脂滴；肝组织可见点状坏死，门管区可见单核细胞，淋巴细胞浸润。大黄蟅虫丸低剂量组大鼠肝脏脂肪性病理变化程度较模型对照组有一定程度减轻，肝细胞排列规则，部分肝细胞浆内有大小不一脂肪空泡，肝细胞可见少量点状坏死散在，门管区亦可见单核细胞、淋巴细胞浸润；大黄蟅虫丸高剂量组大鼠肝脏脂肪性病理变化明显减轻，肝小叶结构正常，肝细胞排列规则，细胞胞浆内脂滴明显减少。

4 讨论

脂肪肝是由多种疾病和病因引起的肝细胞脂肪变性，当肝脏对脂肪合成能力增加和（或）转运入血的能力下降时，脂质在肝内蓄积过多，超过肝湿质量的5%或组织学上50%以上的肝实质脂肪化时，即为脂肪肝。资料显示，长期大量进食高脂类的食物，在小肠生成和吸收的游离脂肪酸和甘油增加，进入血液的脂肪乳糜微粒也增加，最终使肝脏摄取大量的脂肪酸合成脂肪。当脂肪在肝脏合成的量超过肝脏的转运能力时，就造成脂肪的蓄积，形成脂肪肝。过量饮酒时摄入的酒精也会导致脂肪肝，酒精在肝脏代谢过程中消耗大量辅酶与细胞色素，造成肝脏代谢紊乱，导致脂肪在肝脏的代谢障碍而形成脂肪肝［10－11］。本研究结合目前国人的饮食结构，给予高脂饮食联合口服乙醇建立大鼠脂肪肝模型，该模型与人类脂肪肝模型相似，这为深入研究脂肪肝的发病机制、寻找脂肪肝治疗的有效药物提供了理想的动物模型。

本研究表明，模型大鼠精神萎靡，活动减少，饮食减少，体质量增加缓慢；肝脏质量增加，肝脏指数增大。同时，模型大鼠血清TC、TG、LDL增加，HDL降低，说明有高脂血症存在；血清ALT和AST升高，提示大鼠肝功能轻度异常；肝组织总脂肪、TC、TG增加，肝细胞呈现出典型的脂肪变性，这些均与人类脂肪肝的表现相似。灌胃给大黄蟅虫丸30d后，上述的异常变化均有不同程度减轻，特别是大鼠肝组织总脂肪、TC、TG含量减少，肝脏脂肪性病理变化减轻，说明肝脏脂质蓄积减少，而且血清肝功能指标基本恢复正常。实验结果也表明，高剂量大黄蟅虫丸的作用强于低剂量。已知脂肪肝的发生与肝组织脂质过氧化物过多有关［12－13］，氧应激脂质过氧化作用在脂肪肝的形成机制中发挥着重要作用［14］。本实验测定了肝组织MDA的含量和T－SOD活性，MDA代表肝组织脂质过氧化的程度，T－SOD代表肝组织清除脂质过氧化产物的能力。结果表明，脂肪肝模型大鼠肝组织MDA增多，T－SOD减少；大黄蟅虫丸可增强T－SOD活性，减少脂质过氧化产物的含量。结果证明，大黄蟅虫丸对大鼠慢性脂肪肝有治疗作用，作用机制与降低血脂、抗脂质过氧化作用及活血化瘀功能有关。本研究结果为大黄蟅虫丸临床用于治疗脂肪肝提供了实验依据。

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Therapeutic effect of Dahuang Zhechong Pills on chronic fatty liver in rats

WEI Ying，XU Shouzhu，LIU Juntian＊（Department of Pharmacology，Health Center，Xi′an Jiaotong University，Xi′an 710061，China）

Objective To observe the effect of Dahuang Zhechong Pills on chronic fatty liver in rats.Methods Forty SD rats were randomly divided into 4groups：normal control，model control，two doses of Dahuang Zhechong Pills.The model of fatty liver was established with alcohol plus high－fat diet.Dahuang Zhechong Pills were administered intragastrally for 30days.Results Dahuang Zhechong Pills improved the general state of rats，decreased liver weight and liver－body weight index，reduced TC，TG，LDL level as well as ALT and AST activities，and increased HDL concentration in serum.In addition，Dahuang Zhechong Pills decreased total lipids，TC，TG，MDA and elevated T－SOD activity in hepatic tissue.Dahuang Zhechong Pills relieved histopathological changes in liver as well.Conclusion Dahuang Zhechong Pills produce a therapeutic effect on chronic fatty liver in rats，and the action mechanisms are related to lowering blood lipids，anti－oxidative effect and removing blood stasis.

Dahuang Zhechong Pills；animal model；fattyliver

R965

A

1004－2407（2015）04－0382－05

2014－12－20）

魏莹，女，硕士研究生

＊通信作者：刘俊田，男，教授，博士生导师