化生平胶囊对大鼠胃溃疡的疗效研究

蔡 艳，车晓侠，赵 宇，王 娜，席枝侠，丁 绮（西安交通大学第二附属医院药剂科，西安 710004）

·药理·

化生平胶囊对大鼠胃溃疡的疗效研究

蔡 艳，车晓侠，赵 宇，王 娜，席枝侠＊，丁 绮（西安交通大学第二附属医院药剂科，西安 710004）

目的 研究化生平胶囊对胃溃疡大鼠模型的治疗作用。方法 采用盐酸－乙醇法制造大鼠胃溃疡模型，研究化生平胶囊对其溃疡指数、溃疡抑制率、血清及胃组织NO含量的影响，并通过光镜和电镜观察各组大鼠胃黏膜的病理变化。结果 化生平胶囊可降低胃溃疡大鼠溃疡指数、提高抑制率，提高血清及组织中NO含量；光镜和电镜结果显示，化生平胶囊可明显改善大鼠胃组织的溃疡变化。结论 化生平胶囊对大鼠胃溃疡有明显的保护作用。

化生平胶囊；胃溃疡；胃黏膜；NO

胃溃疡是消化系统常见病之一，可导致胃穿孔、出血、幽门梗阻等严重并发症，部分患者可出现溃疡恶变，严重影响患者身体健康和生活质量。目前临床上最常用的治疗方式主要为药物保守治疗，其中中药由于其毒副作用较低，在胃溃疡治疗中占有重要地位［1］。化生平胶囊是由黄芪、白及、白花蛇舌草、莪术等益气补血、收敛止血、去腐生肌、清热解毒的中药组成［2］。本实验以盐酸－乙醇制造急性胃溃疡模型，研究其治疗急性胃溃疡的疗效，为其临床应用提供依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 CX21生物显微镜，日本OLYMPUS；超薄切片机，瑞典LKB公司；游标卡尺，广州广卓精密仪器有限公司；H－600透射式电子显微镜，日本日立公司；样品处理机，德国Leica公司。

1.2 试药 化生平胶囊，由西安交通大学第二附属医院药剂科制剂室制备。盐酸雷尼替丁：阿特维斯（佛山）制药有限公司；NO试剂盒，购自南京建成生物工程研究所。

1.3 实验动物 SD大鼠，SPF级，雄性，体质量180 ±20g。由西安交通大学动物实验中心提供（SCXK（陕）2007－001）。

2 实验方法

2.1 动物分组及给药 SD大鼠48只，随机分为6组：正常对照组、胃溃疡模型组、雷尼替丁组、化生平胶囊高、中、低剂量组。造模前各组禁食不禁水48 h。按照文献方法进行胃溃疡造模［3］：正常对照组给予7.5mL·kg－1生理盐水，其余各组7.5mL·kg－1给予盐酸－乙醇混合液，1日1次，连续3d。造模后30min，化生平胶囊高、中、低剂量组分别给予化生平胶囊内容物1.92，0.96和0.48g·kg－1，雷尼替丁组给予雷尼替丁0.05g·kg－1，给药体积均为10mL。对照组和模型组给予等体积生理盐水。每天灌服1次，连续9d。

2.2 观察指标

2.2.1 溃疡指数及溃疡抑制率测定 化生平胶囊治疗9d后，禁食不禁水24h，处死大鼠，将大鼠沿腹白线切开，常规无菌操作暴露全胃，将胃的幽门和贲门用手术线扎紧，取出全胃，收集胃液后，沿胃大弯侧处剪开，用冰生理盐水冲洗干净，将胃自然展开，用滤纸吸干，放冰台上观察胃黏膜表面，观察溃疡点，用游标卡尺量取溃疡最大径和最小径，根据下列公式，分别计算溃疡指数和溃疡抑制率［4］。

溃疡指数＝（溃疡最大径－溃疡最小径）／2

2.2.2 静脉血及胃组织中NO含量的测定 标本采集：大鼠禁食不禁水24h后，用乙醚麻醉，从腹腔静脉取血4～5mL，置于不抗凝试管中，静置2～3h，以3 500r·min－1离心10min，分离血浆，取上层血清置于－20℃低温保存。将光镜、电镜取材后所剩余胃组织收集，加9倍生理盐水匀浆，以2 500 r·min－1离心10min后，取上清放入EP管中，－20℃低温保存。NO含量测定采用硝酸还原酶法，操作按照试剂盒说明书进行。

2.2.3 胃黏膜光镜及电镜观察 光镜样本制作：取胃小弯侧近胃幽门部的胃组织，将其切成不超过0.4cm组织块后，置于100mL·L－1甲醛溶液中，固定24h。用纯水漂洗3次，每次15min，然后进行乙醇梯度脱水，石蜡包埋，HE染色，在光学显微镜下观察。电镜样品采用常规超薄切片技术，取胃组织，用25mL·L－1戊二醛预固定2h，磷酸盐缓冲液漂洗30min，10g·L－1四氧化锇固定液4℃固定2h，磷酸缓冲液浸洗10min，乙醇梯度脱水，环氧丙烷置换10min；环氧树脂Epon812浸透、包埋，聚合后作半超薄切片1～2μm，美蓝染色后光学显微镜下定位，瑞典LKB－Ⅴ型超薄切片机进行超薄切片50～70 nm，醋酸铀、柠檬酸铅染色后，在日本日立H－600透射式电子显微镜下观察、拍照。

2.2.4 统计学处理 统计学分析用SPSS 16.0统计软件进行分析处理。计量资料采用±s表示，多样本均数间两两比较采用单因素方差分析，组间样本比较用Dunnett－t检验。

3 实验结果

3.1 化生平胶囊对胃溃疡大鼠体质量的影响 见表1。结果表明，正常组大鼠喂养9d后，体质量增长明显，胃溃疡模型组大鼠体质量几乎无增长，化生平胶囊各给药组大鼠体质量均有一定的增长趋势，但与模型组相比，差异无统计学意义。

表1 化生平胶囊对胃溃疡大鼠体质量的影响Tab.1 The effect of Huashengping Capsules on the weight of gastric ulcer rats（±s，n＝8）

表1 化生平胶囊对胃溃疡大鼠体质量的影响Tab.1 The effect of Huashengping Capsules on the weight of gastric ulcer rats（±s，n＝8）

注：与模型组比较＊＊P＜0.01。

组别 剂量／g·kg－1造模前体质量／g造模9d后体质量／g体质量差值／g对照组 165.1±6.0 182.3±8.2 17.94±3.13＊＊模型组 － 178.6±8.4 182.1±10.0 1.25±8.50雷尼替丁组 0.05 174.1±9.7 184.8±5.6 5.35±3.20 1.92 177.1±4.5 189.4±6.3 5.81±3.92化生平胶囊组0.96 176.3±6.8 183.9±7.3 3.75±3.66 0.48 166.3±2.1 174.3±9.6 3.38±5.21

3.2 化生平胶囊对胃溃疡大鼠胃黏膜颜色形态、溃疡指数及溃疡抑制率的影响

见表2。结果表明，模型组与正常组比较，胃溃疡指数明显升高，表明造模成功。各治疗组与模型组比较，胃溃疡指数明显低，表明化生平胶囊对大鼠胃溃疡组织有明显治疗作用。

表2 化生平胶囊对胃溃疡大鼠胃黏膜颜色形态、溃疡指数及溃疡抑制率的影响Tab.2 The effect of Huashengping Capsules on the profile of the gastric mucosa，ulcer index and inhibiting rates of gastric ulcer rats （±s，n＝8）

表2 化生平胶囊对胃溃疡大鼠胃黏膜颜色形态、溃疡指数及溃疡抑制率的影响Tab.2 The effect of Huashengping Capsules on the profile of the gastric mucosa，ulcer index and inhibiting rates of gastric ulcer rats （±s，n＝8）

注：与模型组比较＊P＜0.05，＊＊P＜0.01。

组别 剂量／g·kg－1胃黏膜颜色、形态溃疡指数／mm溃疡抑制率／%对照组 表面光滑、颜色正常 0＊＊ －模型组 －表面粗糙、有明显的溃烂及黄色附着物、颜色深红2.80±0.11 0雷尼替丁组0.05 表面基本光滑、颜色浅红1.15±0.30＊＊77.78化生平胶囊组1.92 表面基本光滑、颜色浅红1.31±0.23＊＊67.85 0.96 表面基本光滑、颜色较高剂量组深1.94±0.34＊＊55.56 0.48表面较胃溃疡组明显光滑，颜色较浅，较其他组粗糙2.17±0.12＊＊48.40

3.3 化生平胶囊对胃溃疡大鼠血清和胃组织NO含量的影响 见表3。结果显示，胃溃疡大鼠血清和胃组织中NO浓度较对照组明显降低，而雷尼替丁和化生平胶囊高、中剂量组与模型组相比，差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。

表3 化生平胶囊对胃溃疡大鼠血清和胃组织NO含量的影响Tab.3 The effect of Huashengping Capsules on the degree of acidity，pepsin activity，NO concentration of gastric ulcer rats

3.4 胃黏膜光镜、电镜观察结果 光镜观察结果显示，空白对照组大鼠胃组织结构正常，细胞排列整齐。模型组大鼠胃黏膜上皮细胞脱落坏死，有炎性渗出，组织紊乱，毛细血管扩张，有溃疡组织形成。雷尼替丁组大鼠胃组织有少量黏膜上皮细胞脱落、坏死，但整体排列较整齐，黏膜上皮细胞结构基本接近正常。化生平胶囊高剂量组大鼠胃组织有少量黏膜上皮细胞脱落坏死，结构已接近正常。中剂量组胃组织比高剂量组有较多的坏死脱落上皮组织，有肉芽生成，开始愈合，少量炎细胞浸润。低剂量组与正常组有差异，腺体结构紊乱，有大量炎细胞浸润，但比模型组有较整齐的结构组织，上皮再生。见图1。

图1 近幽门处胃黏膜组织光镜观察结果（×100）A.空白对照组；B.胃溃疡模型组；C.雷尼替丁组；D.化生平高剂量组；E.化生平中剂量组；F.化生平低剂量组Fig.1 The effect of Huashengping Capsules on the histological changes of gastric mucosa under light microscope（×100）A.control；B.model；C.ranitidine；D.Huashengping Capsules 1.92g·kg－1；E.Huashengping Capsules 0.96g·kg－1；F.Huashengping Capsules 0.48g·kg－1

电镜结果显示，空白对照组胃黏膜层结构基本完整，上皮细胞呈单层柱状排列，细胞表面可见极少量短小的微绒毛；细胞核形状不规则，核内染色质分布均匀，核仁可见；细胞质内可见到线粒体、粗面内质网及核糖体等细胞器结构，细胞近腔面有丰富的电子密度较高的分泌颗粒，细胞间连接结构清晰；胃溃疡模型组胃黏膜结构不完整，细胞排列紊乱，上皮细胞肿胀明显，部分细胞脱落，形成缺损；细胞表面未见微绒毛结构；细胞核形状不规则，电子密度降低；细胞质内线粒体肿胀，部分线粒体嵴溶解、消失，粗面内质网扩张，分泌颗粒数量不多，细胞间连接结构不清晰。雷尼替丁阳性对照组胃黏膜结构多数完整，部分上皮细胞肿胀、脱落，形成小的缺损；多数细胞结构基本正常。化生平胶囊高剂量组胃黏膜结构基本完整，上皮细胞呈单层排列，部分细胞轻度肿胀，电子密度降低；细胞核形状不规则，核内染色质分布均匀；细胞质内线粒体轻度肿胀，粗面内质网轻度扩张，分泌颗粒丰富，细胞间连接结构略清晰。中剂量组胃黏膜层结构完整，基本正常，上皮细胞呈单层柱状排列，细胞表面可见少量短小的微绒毛；细胞核内染色质分布均匀；细胞质内可见到线粒体、粗面内质网及核糖体等细胞器结构，分泌颗粒丰富，细胞间连接结构清晰。低剂量组：胃黏膜结构不完整，细胞排列紊乱，上皮细胞明显肿胀，胃黏膜表面缺损较多；细胞核形状不规则，体积较小；细胞质内可见灶状空白区域，线粒体明显肿胀，线粒体嵴溶解、消失，粗面内质网轻度扩张，分泌颗粒数量较少，细胞间连接结构不清晰。见图2。

图2 近幽门处胃黏膜组织电镜观察结果（×5 000）A.空白对照组；B.胃溃疡模型组；C.雷尼替丁组；D.化生平高剂量组；E.化生平中剂量组；F.化生平低剂量组Fig.2 The effect of Huashengping Capsules on the histological changes of gastric mucosa under electron microscope（×5 000）A.control；B.model；C.ranitidine；D.Huashengping Capsules 1.92g·kg－1；E.Huashengping Capsules 0.96g·kg－1；F.Huashengping Capsules 0.48g·kg－1

4 讨论

盐酸－乙醇模型是大鼠胃溃疡较为经典的模型之一。盐酸因直接腐蚀胃壁组织，导致胃黏膜血液循环障碍，组织坏死，诱发胃肠溃疡，乙醇可增加细胞膜通透性，破坏胃肠黏膜的屏障而引起胃肠溃疡，同时因刺激作用加剧胃肠蠕动，造成胃肠的机械性损伤［5］。本实验采用盐酸－乙醇制造急性胃溃疡模型，经定量（胃溃疡指数、溃疡抑制率、NO含量）和定性（胃组织病理切片）研究证实，胃溃疡模型制造成功。使用化生平胶囊后，胃溃疡大鼠溃疡指数降低，溃疡抑制率提高。光镜和电镜结果均表明，化生平胶囊不同剂量组可使胃溃疡大鼠胃黏膜组织肿胀减轻，炎性渗出减少，肉芽组织形成，细胞超微结构逐步趋于正常，表明化生平胶囊具有明显的黏膜保护作用。

胃溃疡发生的机制比较复杂，目前研究认为，黏膜损害因素与保护因素之间的平衡失调是造成胃溃疡的重要原因［6－7］。在消化性溃疡的发生过程中，胃黏膜血流量的正常供应是重要的保护因素之一。其中NO被认为是胃溃疡发生中重要的胃黏膜保护性因子，它可扩张黏膜血管，增加血流量，改善黏膜血运异常［8］。本研究表明，模型组在胃溃疡发生时，伴随着溃疡指数的增加，血清和胃组织NO含量均明显降低，化生平胶囊高、中、低剂量组能使血清和胃组织NO含量均明显升高，表明化生平胶囊的修复胃黏膜作用可能与刺激胃黏膜合成或释放NO、增加胃黏膜血流量有关。

［1］张小超，陈鹏，何波，等.八味肉桂胶囊抗消化性胃溃疡作用实验研究［J］.中成药，2013，35（10）：2259－2262.

［2］席枝侠，蔡艳，车晓侠，等.化生平胶囊的急性毒性研究［J］.医药导报，2014，33（1）：98－99.

［3］蒋灵芝，熊平，曾文峰.手参散剂治疗急性胃溃疡的实验研究［J］.中药材，2009，32（7）：1119－1122.

［4］梅雪婷，许东晖，王胜，等.姜黄素固体分散体对大鼠胃溃疡的疗效研究［J］.中国中药杂志，2009，34（22）：2920－2923.

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［6］符健，韩丽，邢桂兰，等.秋茄提取物抗大鼠实验性胃溃疡作用研究［J］.中国药理学通报，2007，23（10）：1379－1383.

［7］潘华峰，付蓉，赵自明.洛赛克对胃溃疡大鼠胃黏膜保护作用与机理实验研究［J］.辽宁中医药大学学报，2011，13（6）：17－19.

［8］Ma L，Wallace J L.Endothelial nitric oxide synthase modulates gastric ulcer healing in rats［J］.Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol，2000，279（2）：341－346.

Effect of Huashengping Capsules on gastric ulcer rats

CAI Yan，CHE Xiaoxia，ZHAO Yu，WANG Na，XI Zhixia＊，DING Qi（Department of Pharmacy，the Second Affiliated Hospital of College of Medicine，Xi′an Jiaotong University，Xi′an 710004，China）

Objective To study the effect of Huashengping Capsules on gastric ulcer rats.Method Hydrochloric acid and alcohol were used to make gastric ulcer model on rats and the content of Huashengping Capsules was administrated.The ulcer index，inhibiting rate of astric ulcer，NO concentration in serum and stomach，and the histological change on electron microscope were observed.Results Huashengping Capsules decreased the ulcer index and NO content in serum and stomach，meanwhile increased the inhibiting rate of astric ulcer.Histological ulcer was improved by Huashengping Capsules.Conclusion Huashengping Capsules have protective effect on gastric ulcer rats.

Huashengping Capsules；gastric ulcer；gastric mucosa；NO

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.04.015

R965

A

1004－2407（2015）04－0373－04

2014－11－19）

陕西省中医药管理局基金（ZY28）

蔡艳，女，主管药师，硕士

＊通信作者：席枝侠，女，主任药师，硕士