珍菊降压片中西药配伍减毒机制

谢家骏， 周广兴， 乔正东， 成 苗， 张国明， 王建新

（1.上海中医药大学药物安全评价研究中心，上海201203；2.复旦大学实验动物科学部，上海200032；3.上海市浦东医院，上海 201399；4.上海市中药研究所，上海 201401；5.复旦大学药学院，上海201203）

［药 理］

珍菊降压片中西药配伍减毒机制

谢家骏1， 周广兴2， 乔正东3， 成 苗4， 张国明4， 王建新5

（1.上海中医药大学药物安全评价研究中心，上海201203；2.复旦大学实验动物科学部，上海200032；3.上海市浦东医院，上海 201399；4.上海市中药研究所，上海 201401；5.复旦大学药学院，上海201203）

目的探索珍菊降压片中西药配伍减毒机制，评价其长期给药的安全性。方法将Wistar大鼠随机分为珍菊降压片3 200、800、200mg/kg剂量组、相应剂量的化药组分对照组以及空白对照组，每组30只，雌雄各半，连续给药26周，停药恢复期8周。结果化药组分对照组动物体重增长缓慢，血液红细胞数 （RBC）、血红蛋白 （HGB）、红细胞压积 （HCT）、红细胞血红蛋白 （MCH）、红细胞平均血红蛋白浓度 （MCHC）先升高后降低，血清碱性磷酸酶 （ALP）、游离氨基酸 （NEFA）上升，总蛋白 （TP）、白蛋白 （ALB）、K+、Na+、C1-下降，尿液G1u以及肝、肾、肾上腺、睾丸系数升高，部分动物肝细胞呈轻度脂肪变性，肾小管上皮细胞轻度颗粒样变性，停药后亦未见完全恢复。服用中西药配伍的珍菊降压片，200 mg/kg剂量组对化药组分所导致的异常能呈现完全的对抗，而3 200、800 mg/kg剂量组则呈现部分对抗。结论珍菊降压片中西药配伍用药具有完全或部分对抗源于化药组分所致的毒性作用，其程度与化药组分的剂量密切相关。珍菊降压片给大鼠连续26周灌胃的安全剂量为200 mg/kg，相当人临床剂量的18倍。

珍菊降压片；盐酸可乐定；氢氯噻嗪；中西药配伍；长期毒性试验；减毒机制；安全剂量

珍菊降压片是中西药物复方制剂，临床上主要用于轻、中度原发性高血压的治疗［1-3］。2013年3月，国家食品药品监督管理局发出了关于修订珍菊降压片说明书的公告 （2013年第20号通告）［4］，就该制剂含有的盐酸可乐定和氢氯噻嗪2种化药成分，强调临床合并用药时应注意并用药品与其可能的药物相互作用。鉴于该制剂自研制投放市场应用于临床至今已有40余年，虽对其降压的主要药效学作用进行了一些研究［5-8］，但对复方的安全性评价及各组分配伍的毒理学机制却少有报道。为此，本实验采用拆方的方法，就该制剂中药组分与盐酸可乐定和氢氯噻嗪2种化药成分配伍的减毒机制进行探索，并对其长期给药的安全性进行系统评价，旨在为阐明珍菊降压片中西药配伍的毒理学机制、更针对性地修订使用说明书相关内容提供实验依据。

1 实验材料

1.1 受试物 珍菊降压片 （复方）为土褐色粉末，由野菊花膏粉、珍珠层粉、芦丁、氢氯噻嗪、盐酸可乐定按100∶100∶20∶5∶0.03比例混匀，由上海雷允上药业有限公司提供，批号0508ZX。实验时用0.5%CMC蒸馏水液分别配制成2%、8%、32%的药液，随配随用。

珍菊降压片 （化药组分）为白色粉末，由氢氯噻嗪、盐酸可乐定按500∶3比例混匀，由上海雷允上药业有限公司提供，批号0508X。实验时用0.5%CMC蒸馏水液将其配制成 0.044%、0.178%、0.711%的药液，随配随用。

1.2 实验动物 Wistar大鼠，SPF级，体质量80～110 g，雌雄各半，由上海斯莱克实验动物责任有限公司提供，实验动物生产许可证号SCXK（沪）2003-0003。饲以鼠用全价固体高压颗粒饲料，均由相应的动物供应商提供。

1.3 检测仪器 SYSMEX F-800血液分析仪（日本东亚公司）；COBAS EMIRA PLUS生化分析仪（瑞士罗氏公司）；MA-4210尿液分析仪 （桂林市华通医用仪器有限公司）。

2 实验方法

2.1 分组及给药 将大鼠按体质量随机分成7组，分别为复方高、中、低剂量组 （3 200、800、200 mg/kg），化药组分组（71.1、17.8、4.4 mg/kg），另设对照组（0.5%CMC蒸馏水），每组30只，雌雄各半。每天灌胃1次，每周6次，连续26周，停药后观察8周，灌胃容积均为10 mL/kg。其中，高剂量组单日用药剂量为最大给药剂量，为说明书推荐的临床剂量的284倍，按人与动物体表面积折算，相当临床剂量的45倍；中剂量组单日用药剂量高于药效有效剂量，为说明书推荐的临床剂量的71倍，按人与动物体表面积折算，相当临床剂量的11倍；低剂量组单日用药剂量高于药效有效剂量，为说明书推荐的临床剂量的18倍，按人与动物体表面积折算，相当临床剂量的3倍［6］。

2.2 操作步骤 给药及恢复期间，每日观察动物的外观体征，行为活动，摄食情况，粪便性状等，每周称体质量、食耗量。给药13周、26周、停药8周时，分别取1/3动物 （雌雄各半），禁食不禁水12 h后收集尿液作尿液常规检查，眼眶动脉处采血作血液学和血清生化学检查，戊巴比妥钠麻醉后放血处死作系统尸解，取主要脏器作肉眼检查，脏器称重及换算成脏器系数，并作石蜡切片、H.E染色及组织学镜检。

2.3 检测项目

2.3.1 血液学检查 红细胞数（RBC），血红蛋白 （HGB）、红细胞压积 （HCT）、红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC）、红细胞平均体积（MCV）、网织红细胞百分率（Retic）、白细胞数（WBC）、中性粒细胞百分率 （Neut）、淋巴细胞百分率（Lymph）、单核细胞百分率 （Mono）、嗜酸细胞百分率 （Eos）、嗜碱细胞百分率 （Baso）、血小板数（PLT）、凝血时间（CT）。

2.3.2 血清生化检查 天门冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶 （ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、乳酸脱氢酶 （LDH）、总蛋白 （TP）、白蛋白 （ALB）、总胆红素 （TBIL）、尿素氮（BUN）、肌酐 （CRE）、肌酐激酶 （CK）、总胆固醇 （TCHO）、总甘油三酯 （TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白 （LDL）、游离氨基酸（NEFA）、血糖（GLU）、钾离子（K+）、钠离子（Na+）、氯离子 （C1-）。

2.3.3 尿液检查 酸碱值 （pH）、尿比重 （SG）、亚硝酸盐 （NIT）、尿糖 （GLU）、尿蛋白 （PRO）、隐血（BLD）、胆红素（BIL）、酮体（KET）、尿胆原（URO）、白细胞（WBC）。

2.3.4 脏器系数测定 心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、前列腺、睾丸、附睾、子宫、卵巢、脑湿重，并换算成脏器系数 （脏体比）。脏器系数计算公式为脏器系数（脏体比）=［脏器湿重（g）÷体质量 （g）］ ×100%。

2.3.5 组织学镜检 心、肝、肾、脑、主动脉血管、子宫、卵巢、睾丸、附睾、前列腺。

3 实验结果

3.1 一般症状 在整个实验过程中，受试物各剂量组及对照组动物活动正常，粪便成形，未见有死亡。

3.2 体质量与食耗量变化 化药组分低剂量组动物给药后体质量增长开始放缓，其中雌、雄动物分别自给药12、6周开始差异显著 （P＜0.05或P＜0.01），停药8周后雄性动物体质量仍未见明显恢复 （P＜0.05或P＜0.01）。而复方低剂量组动物在整个给药及停药恢复期间体质量增长基本正常，与化药组分组比，差异显著 （P＜0.05）。复方中剂量组动物给药后，体质量增长放缓程度有所下降，虽部分时间点与相应剂量化药组分组比，差异显著 （P＜0.05或P＜0.01），但与对照组比仍呈明显下降 （P＜0.05或P＜0.01）；复方高剂量组动物给药后体质量增长放缓程度与相应剂量化药组分组，比未见任何改善，见图1～3。

整个给药和停药恢复期间，各组动物食耗量未见明显异常，同时间各剂量组与对照组比无显著差异（P＞0.05）。

3.3 血液学检测 给药13、26周及停药8周时，复方及其化药组分各剂量组动物WBC、Neut、Lymph、Mono、Eos、Baso、PLT、CT等指标均未见有明显异常。

复方及其化药组分低剂量组：在给药13、26周及停药8周时，大鼠RBC、HGB、HCT、MCV、 MCH、MCHC平均值与相应对照组比均无显著性差异 （P＞0.05）。

图1 珍菊降压片中西药配伍 （低剂量）对大鼠体质量经时变化的影响Fig.1 Effect of Zhenju Jiangya Tablets（low dose）on the changes of body weight of rats w ith time

图2 珍菊降压片中西药配伍 （中剂量）对大鼠体质量经时变化的影响Fig.2 Effect of Zhenju Jiangya Tablets（m idd le dose）on the changes of body weight of ratsw ith time

图3 珍菊降压片中西药配伍 （高剂量）对大鼠体质量经时变化的影响Fig.3 E ffect of Zhen ju Jiangya Tablets（high dose）on the changes of body weight of rats w ith time

化药组分中、高剂量组：在给药13周时，RBC、HGB、HCT、MCH、MCHC明显升高。其中，中剂量组HGB、高剂量组RBC、HGB、HCT、MCHC差异显著（P＜0.05或P＜0.01）；在给药26周时，RBC、HGB、HCT、MCH、MCHC明显降低 （P＜0.05或P＜0.01），呈先亢进后抑制态势，停药8周时亦未见完全恢复。

复方中、高剂量组：在给药13周时，中剂量组HGB、MCH、高剂量组RBC、HGB、HCT与相应化药组分组比，具有明显的降低作用 （P＜0.05或P＜ 0.01）；给药26周时，HGB与相应化药组分组比，具有明显的升高作用 （P＜0.05或P＜0.01）；停药8周时，与相应化药组分组比，同样具有升高RBC、HGB、HCT、MCHC的作用（P＜0.05或P＜0.01）。

其余各用药组大鼠各时点各项血液学指标平均值与相应对照组比，均无显著性差异 （P＞0.05），见表1。

表1 珍菊降压片对大鼠血液学指标的影响 （）Tab.1 Effect of Zhenju Jiangya Tablets on blood indicators of rats（）

表1 珍菊降压片对大鼠血液学指标的影响 （）Tab.1 Effect of Zhenju Jiangya Tablets on blood indicators of rats（）

注：与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与相应剂量的化药组分组比较，+P＜0.05，++P＜0.01

低剂量 中剂量 高剂量 低剂量 中剂量 高剂量（给药13周，n=10）观察指标 对照组 化药组分组 复方组WBC/（×103/μL） 6.88±2.87 7.72±3.89 6.44±2.23 7.75±1.81 6.92±4.45 7.79±3.40 7.00±4.15 RBC/（×106/μL） 9.54±0.57 9.75±0.95 10.13±1.27 10.63±1.04**9.53±0.80 9.44±0.49 9.44±0.58++HGB/（g/dL） 170±9 168±11 188±18* 194±13** 168±13 165±8++ 167±8++HCT/% 53.9±3.1 55.0±5.2 57.7±6.4 59.3±5.8* 53.1±4.4 52.8±4.2 52.4±2.8++MCV/fL 56.6±2.8 56.4±1.2 57.1±2.8 55.8±1.8 55.7±2.3 55.8±2.1 55.6±1.7 MCH/pg 17.9±0.8 17.3±1.5 18.6±1.2 18.3±0.8 17.7±0.5 17.5±0.7+ 17.7±0.6 MCHC/（g/dL） 316±9 308±29 326±15 328±14* 317±10 313±19 319±11 PLT/（×103/μL） 918±97 835±248 897±174 921±251 755±198* 971±125 922±199 Retic/% 0.51±0.23 0.52±0.34 0.52±0.24 0.52±0.33 0.52±0.26 0.51±0.19 0.52±0.23 Neut/% 19.5±4.0 21.3±4.4 19.8±3.5 22.9±3.2 19.6±2.4 21.8±4.6 24.3±2.1**Lymph/% 76.1±4.2 73.6±4.7 76.5±3.6 71.7±2.3**75.4±2.8 73.7±4.9 72.1±2.0*Mono/% 2.6±1.5 3.4±2.1 2.0±1.5 3.8±1.9 3.0±1.6 3.0±1.9 2.1±1.3+Eos/% 2.0±1.2 1.7±0.8 1.7±0.7 1.6±0.7 2.0±0.9 1.5±1.0 1.5±0.7 Baso/% 0.2±0.2 0.2±0.1 0.1±0.2 0.2±0.1 0.3±0.2 0.1±0.2 0.2±0.3（给药26周，n=10）WBC/（×103/μL） 5.88±1.26 4.72±1.02 5.58±1.32 5.11±1.46 5.60±0.77+ 6.72±1.72 4.88±1.38 RBC/（×106/μL） 9.67±0.91 9.25±0.63 9.12±0.42 8.94±0.44*9.44±0.57 9.51±0.60 9.43±0.99 HGB/（g/dL） 177±14 164±8 164±6* 160±8** 167±7 172±9+ 171±14+HCT/% 54.8±4.2 52.0±3.5 51.4±3.2 50.4±2.4**53.2±2.8 53.9±3.3 53.2±5.1 MCV/fL 56.8±1.7 56.3±1.9 56.4±1.0 56.4±1.0 56.4±2.9 56.8±1.4 56.5±2.7 MCH/pg 18.3±0.4 17.8±0.6 17.9±0.3* 17.9±0.4 17.8±0.7* 18.1±0.4 18.2±0.6 MCHC/（g/dL） 323±10 317±16 318±10 318±7 315±7 318±13 323±16 PLT/（×103/μL） 939±128 944±108 951±133 804±150* 855±154 781±207+ 823±242 Retic/% 0.51±0.28 0.50±0.27 0.52±0.33 0.53±0.25 0.52±0.26 0.50±0.25 0.53±0.25 Neut/% 22.2±3.7 24.6±3.0 25±3.6 25.1±2.8* 21.8±4.9 24.2±4.8 23.4±2.6 Lymph/% 72.8±3.8 71.3±2.7 71.3±3.8 71.5±3.1 73.4±3.7 71.4±5.4 73.1±2.8 Mono/% 3.0±1.6 1.8±1.7 2.0±0.9 1.8±0.9 2.9±1.6 2.0±1.2 1.6±0.7*Eos/% 2.0±1.1 1.7±1.1 1.7±1.2 1.6±0.7 1.9±0.9 2.4±1.2 1.9±1.1 Baso/% 0.3±0.2 0.2±0.2 0.3±0.2 0.1±0.2 0.3±0.1 0.4±0.2 0.2±0.2（停药8周，n=10）WBC/（×103/μL） 5.73±1.53 5.63±1.03 4.64±1.05 5.38±2.26 5.03±1.51 6.16±1.34+ 5.09±1.00 RBC/（×106/μL） 10.26±0.73 9.90±0.59 9.06±0.29** 9.21±0.39**9.90±0.75 10.00±0.58++10.34±1.00++HGB/（g/dL） 187±10 157±5** 159±5** 161±4** 178±11 178±7*++ 181±13++HCT/% 57.2±3.4 55.8±2.5 51.7±1.2** 51.8±2.3**55.5±3.5 56.0±1.8++ 57.7±4.3++MCV/fL 55.9±1.9 56.4±1.4 57.1±1.6 56.2±1.4* 56.2±1.4 56.1±1.8 55.9±1.9 MCH/pg 18.2±0.5 17.7±0.8 17.5±0.9 17.5±0.8** 17.9±0.6 17.8±0.5 17.6±0.5*MCHC/（g/dL） 326±7 314±11** 307±10** 312±12 319±6* 318±4**++ 314±8**PLT/（×103/μL） 922±111 955±139 948±97 970±85 940±83 883±110 892±124 Retic/% 0.52±0.29 0.49±0.26 0.54±0.30 0.53±0.20 0.53±0.19 0.51±0.26 0.54±0.23 Neut/% 19.7±1.9 20.7±2.3 19.5±2.1 20.5±2.1 20.5±1.7 19.9±1.4 20.1±1.1 Lymph/% 77.1±2.1 75.7±2.4 77.8±2.3 76.9±2.4 77.0±1.8 77.1±1.7 77.1±1.1 Mono/% 1.3±1.1 1.7±0.7 1.1±0.3 1.3±0.7 1.3±0.7 1.4±0.5 1.3±0.5 Eos/% 1.9±0.7 1.9±0.7 1.5±0.7 1.3±0.7 1.2±0.6*+ 1.6±1.0 1.5±0.5 Baso/%0.3±0.2 0.2±0.1 0.1±0.2 0.3±0.3 0.2±0.2 0.4±0.2 0.2±0.2

3.4 血清生化检测 化药组分低剂量组：在给药13、26周时，大鼠GLU、TP、ALB、HDL有所下降。其中给药13周时GLU、TP、ALB、HDL、给药26周时ALB与对照组比，具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01），而同剂量复方组大鼠上述指标均未见有明显异常。

化药组分中、高剂量组：在给药13、26周时，大鼠TP、ALB、K+、Na+、C1-下降，ALP、NEFA上升。其中，给药13周时中剂量组NEFA、K+，给药26周时中剂量组K+、Na+、C1-、高剂量组ALB、K+、Na+与对照组比，具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）；停药8周时，GLU、ALP、K+、Na+、C1-指标恢复正常，但中剂量组CREA、HDL、NEFA、高剂量组TG、HDL、NEFA仍明显下降 （P＜0.05或P＜0.01）。复方中、高剂量组指标变化情况同中、高剂量化药组分组。

其余各用药组大鼠各时点各项血液生化学指标平均值与相应对照组比，均无显著性差异 （P＞0.05），见表2。

表2 珍菊降压片对大鼠血清生化学指标的影响（）Tab.2 Effect of Zhen ju Jiangya Tablets on serum biochem ical indexes of rats（）

表2 珍菊降压片对大鼠血清生化学指标的影响（）Tab.2 Effect of Zhen ju Jiangya Tablets on serum biochem ical indexes of rats（）

低剂量 中剂量 高剂量 低剂量 中剂量 高剂量（给药13周，n=10）观察指标 对照组 化药组分组 复方组AST/（IU/L） 173±25 162±24 177±20 166±27 177±23 174±27 177±22 ALT/（IU/L） 52.9±8.1 42.9±7.3** 48.1±9.1 48.5±12.0 47.5±8.4 49.6±6.7 46.9±8.1 BUN/（mmo1/L） 6.33±0.85 6.42±0.61 6.55±0.71 6.55±1.30 6.54±0.88 6.25±0.96 6.47±1.17 GLU/（mmo1/L） 4.70±0.52 3.62±0.93**4.12±0.54 4.76±1.02 3.91±0.95 4.27±0.51 3.83±0.56**+ALP/（IU/L） 49.6±16.9 52.4±18.2 54.8±21.5 59.0±12.4 50.9±17.0 55.7±12.2 60.6±16.3 TBIL/（μmo1/L） 10.11±3.28 9.71±4.35 9.90±2.96 8.86±3.86 9.49±3.66 9.35±3.67 8.47±4.17 TP/（g/L） 60.4±5.3 54.3±3.4** 57.9±5.2 55.5±6.5 56.5±5.5 57.9±3.5 53.0±2.6**ALB/（g/L） 34.8±1.6 32.8±1.7* 34.7±2.0 33.5±2.5 33.3±2.0 34.9±2.1 32.3±1.3**CHOL/（mmo1/L） 1.70±0.19 1.60±0.18 1.67±0.18 1.85±0.29 1.57±0.23 1.75±0.16 1.70±0.15 CREA/（μmo1/L） 64.1±7.4 64.7±9.6 63.2±7.0 63.1±7.7 58.4±7.8 66.8±10.0 64.2±6.4 CK/（U/L） 1432±237 1438±263 1444±185 1282±564 1540±134 1463±233 1354±388 LDH/（IU/L） 791±119 714±129 839±118 728±133 806±84 832±114 782±102 TG/（mmo1/L） 1.07±0.52 0.88±0.40 0.98±0.47 0.95±0.25 0.88±0.43 1.07±0.54 1.04±0.44 HDL/（mmo1/L） 1.87±0.16 1.61±0.28* 1.88±0.13 2.04±0.18* 1.76±0.21 1.91±0.17 1.87±0.13+LDL/（mmo1/L） 0.29±0.05 0.28±0.06 0.27±0.04 0.31±0.06 0.30±0.12 0.29±0.07 0.30±0.06 NEFA/（mmo1/L） 1.80±0.62 2.13±1.01 2.56±0.77* 1.91±0.36 1.88±0.83 2.08±0.51 2.37±0.92 K+/（mmo1/L） 7.15±0.19 6.91±0.32 6.81±0.16** 6.92±0.33 7.11±0.48 7.27±0.47++ 6.99±0.29 Na+/（mmo1/L） 145±2 146±3 144±2 144±2 143±7 142±2** 142±2**+C1-/（mmo1/L） 103±2 104±2 103±2 102±1 102±5 101±2**++ 102±2*（给药26周，n=10）AST/（IU/L） 160±19 165±25 166±26 157±15 167±14 173±22 172±26 ALT/（IU/L） 57.5±6.4 54.2±15.1 51.1±11.1 47.6±9.9 53.4±6.7 52.5±9.0 57.0±16.6 BUN/（mmo1/L） 6.44±0.56 5.97±0.89 6.03±0.83 6.15±0.40 6.73±0.64 6.56±1.03 6.80±1.48 GLU/（mmo1/L） 5.07±0.56 4.98±0.90 5.02±0.58 5.18±0.69 4.85±0.33 4.84±0.53 5.03±0.96 ALP/（IU/L） 46.0±16.2 46.4±14.9 50.2±19.9 56.6±15.7 48.4±18.3 54.7±18.8 59.4±18.2 TBIL/（μmo1/L） 13.08±2.52 13.44±1.99 14.11±2.08 12.35±1.71 12.74±1.37 13.52±3.76 12.78±2.34 TP/（g/L） 73.5±6.2 70.2±6.1 73.1±8.2 71.9±5.2 74.4±3.9 73.7±8.3 72.5±9.6 ALB/（g/L） 37.1±1.5 35.7±1.4* 36.4±1.8 35.0±2.7* 37.5±1.8 36.9±2.6 35.2±1.0**CHOL/（mmo1/L） 2.27±0.36 2.22±0.59 2.15±0.43 2.14±0.45 2.23±0.24 2.07±0.44 2.16±0.41 CREA/（μmo1/L） 54.3±7.3 48.6±5.2 53.2±9.2 55.6±7.1 55.6±3.5 49.7±6.4 49.0±8.9 CK/（U/L） 1875±228 1874±307 1929±134 1786±185 1867±115 1951±226 1890±346 LDH/（IU/L） 973±221 1035±206 955±210 983±196 997±203 944±250 1005±258 TG/（mmo1/L） 1.40±0.75 1.27±0.69 1.34±0.67 1.18±0.48 1.24±0.56 1.56±0.76 1.35±0.57 HDL/（mmo1/L） 2.95±0.32 2.82±0.41 2.87±0.50 2.64±0.52 2.93±0.20 2.71±0.12* 2.68±0.20 LDL/（mmo1/L） 0.52±0.15 0.49±0.26 0.48±0.15 0.48±0.21 0.43±0.10 0.44±0.13 0.55±0.26 NEFA/（mmo1/L） 1.37±0.26 1.18±0.40 1.59±0.72 1.32±0.66 1.35±0.43 1.63±0.59 1.67±0.56 K+/（mmo1/L） 7.02±0.58 6.75±0.25 6.47±0.34* 6.45±0.51* 7.01±0.73 6.93±0.39+ 6.61±0.41 Na+/（mmo1/L） 145±2 144±2 142±2** 141±3** 143±3 142±2** 142±2**+C1-/（mmo1/L） 104±2 104±2 101±1* 102±3 102±3 103±2+ 102±3（停药8周，n=10）AST/（IU/L）167±14 152±28 168±26 158±18 167±24 166±22 162±10

续表2

3.5 尿液检测 复方及其化药组分低剂量组：在给药13、26周及停药8周时，大鼠 pH、NIT、GLU、SG、BLD、PRO、KET、BIL、URO、WBC平均值与相应对照组比，均无显著性差异 （P＞0.05）。

化药组分中、高剂量组：给药13、26周时，中、高剂量组大鼠GLU分别为 （1.93±2.61）、（3.04±2.41）和 （1.94±2.27）、（2.76±2.59）mmo1/L，与对照组比，具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。

复方中、高剂量组：给药13、26周时，中、高剂量组大鼠 GLU分别为 （1.94±2.27）、（3.32±2.16）mmo1/L和（3.05±2.03）、（3.86± 2.31）mmo1/L，与对照组比，具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。GLU变化情况同中、高剂量化药组分组，仍处高企状态。

其余各用药组大鼠各时点各项尿常规指标平均值与相应对照组比，均无显著性差异 （P＞0.05）。见表3。

3.6 大鼠尸检 给药13、26周和恢复期8周时，各脏器大小、颜色均正常，未见有肿胀、出血、坏死等异常现象。

3.7 脏器系数 复方及其化药组分低剂量组：大鼠在各个时点脏器系数平均值与相应对照组比，均无显著性差异 （P＞0.05）。

复方及其化药组分中、高剂量组：大鼠肝、肺、肾、肾上腺、睾丸、卵巢、脑系数均呈一定的升高趋势。其中，在给药13周时，中剂量组肾、睾丸系数，高剂量组肝、肺、睾丸、附睾、脑系数，给药26周时，中剂量组肾、睾丸、附睾系数，高剂量组肝、肺、睾丸、卵巢、脑系数与对照组比，具有统计学意义 （P＜0.05或P＜0.01）；停药8周时，上述异常指标均未发生明显的改变。其余各用药组大鼠各时点各项脏器系数平均值与相应对照组比，均无显著性差异 （P＞0.05），见表3。

3.8 病理学检查 化药组分各剂量组：在给药13、26周时，发现有部分动物肝细胞呈轻度脂肪变性，部分肾小管上皮细胞呈轻度颗粒样变性。其中，在给药13周时，中、高剂量组大鼠肝细胞呈轻度脂肪变性者分别为3、5只，呈肾小管上皮细胞轻度颗粒样变性者分别为4、5只；给药26周时，中、高剂量组大鼠肝细胞呈轻度脂肪变性者分别为4、7只，呈轻度小胆管增生者分别为4、4只，低、中、高剂量组大鼠呈肾小管上皮细胞轻度颗粒样变性者分别为2、4、5只。

复方低剂量组：在给药13周、26周及停药8周时，各脏器组织均形态结构完好，未见明显出血、增生、水肿、炎症、坏死等病理改变。

表3 珍菊降压片对大鼠脏器系数的影响 （）Tab.3 Effect of Zhenju Jiangya Tablets on organ coefficients of rats（）

表3 珍菊降压片对大鼠脏器系数的影响 （）Tab.3 Effect of Zhenju Jiangya Tablets on organ coefficients of rats（）

注：与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与相应剂量的化药组分组比较，+P＜0.05，++P＜0.01

低剂量 中剂量 高剂量 低剂量 中剂量 高剂量（给药13周，n=5～10）观察指标 对照组 化药组分组复方组心脏/% 0.345±0.047 0.331±0.065 0.327±0.052 0.340±0.049 0.344±0.071 0.333±0.063 0.342±0.058肝脏/% 2.395±0.215 2.301±0.150 2.277±0.125 2.343±0.083 2.275±0.097 2.317±0.110 2.448±0.070+脾脏/% 0.168±0.014 0.170±0.030 0.175±0.016 0.167±0.011 0.174±0.017 0.170±0.014 0.167±0.010肺脏/% 0.381±0.062 0.407±0.081 0.413±0.051 0.442±0.057* 0.388±0.041 0.413±0.043 0.426±0.022*肾脏/% 0.576±0.028 0.592±0.036 0.625±0.031** 0.648±0.052**0.593±0.060 0.625±0.028** 0.644±0.026**肾上腺/% 0.018±0.008 0.018±0.005 0.018±0.005 0.020±0.003 0.018±0.006 0.017±0.005 0.019±0.005胸腺/% 0.100±0.027 0.094±0.015 0.094±0.023 0.086±0.022 0.091±0.020 0.095±0.025 0.096±0.016前列腺/% 0.294±0.035 0.291±0.027 0.276±0.022 0.260±0.067 0.296±0.014 0.289±0.041 0.234±0.026*睾丸/% 0.830±0.055 0.898±0.067 0.991±0.049** 1.106±0.040**0.909±0.067 1.068±0.119** 1.095±0.205*附睾/% 0.296±0.025 0.282±0.032 0.303±0.042 0.341±0.040 0.294±0.022 0.324±0.039 0.342±0.047子宫/% 0.176±0.049 0.209±0.046 0.201±0.033 0.174±0.038 0.151±0.049 0.185±0.025 0.223±0.039卵巢/% 0.035±0.007 0.038±0.001 0.040±0.005 0.039±0.004 0.037±0.002 0.038±0.002 0.037±0.002脑/% 0.644±0.168 0.694±0.161 0.749±0.172 0.852±0.153**0.707±0.178 0.747±0.149 0.837±0.134*（给药26周，n=5～10）心脏/% 0.313±0.048 0.283±0.036 0.320±0.031 0.348±0.037 0.301±0.036 0.349±0.067 0.335±0.032肝脏/% 2.230±0.101 2.117±0.224 2.223±0.121 2.430±0.234* 2.202±0.182 2.265±0.093 2.368±0.182脾脏/% 0.153±0.025 0.154±0.021 0.161±0.015 0.165±0.024 0.154±0.022 0.168±0.022 0.166±0.026肺脏/% 0.334±0.103 0.368±0.052 0.403±0.033 0.430±0.037* 0.379±0.062 0.383±0.040 0.429±0.055*肾脏/% 0.556±0.043 0.525±0.040 0.600±0.028* 0.641±0.047**0.574±0.050 0.612±0.047 0.628±0.046**肾上腺/% 0.014±0.004 0.015±0.005 0.017±0.005 0.018±0.006 0.015±0.004 0.018±0.006 0.018±0.003*胸腺/% 0.080±0.039 0.064±0.016 0.090±0.095 0.056±0.011 0.060±0.015 0.073±0.027 0.061±0.016前列腺/% 0.212±0.042 0.241±0.018 0.247±0.043 0.228±0.028 0.241±0.008 0.285±0.015 0.213±0.018睾丸/% 0.733±0.040 0.807±0.093 0.922±0.072** 0.947±0.074**0.782±0.071 0.915±0.109 1.043±0.067*附睾/% 0.261±0.037 0.247±0.033 0.313±0.021* 0.297±0.029 0.253±0.013 0.287±0.027 0.312±0.044子宫/% 0.182±0.046 0.160±0.057 0.144±0.026 0.157±0.031 0.150±0.017 0.151±0.049 0.186±0.043卵巢/% 0.031±0.003 0.032±0.004 0.036±0.004 0.037±0.003**0.033±0.006 0.034±0.002 0.038±0.002*脑/% 0.577±0.147 0.609±0.158 0.665±0.191 0.777±0.148**0.627±0.154 0.698±0.197 0.781±0.145**（停药恢复期8周，n=5～10）心脏/% 0.288±0.034 0.294±0.032 0.299±0.038 0.311±0.044 0.293±0.031 0.304±0.034 0.306±0.040肝脏/% 2.251±0.144 2.560±0.424 2.511±0.273* 2.638±0.17** 2.286±0.084 2.512±0.232** 2.638±0.274**脾脏/% 0.142±0.020 0.143±0.025 0.149±0.022 0.161±0.029 0.144±0.020 0.148±0.024 0.149±0.025肺脏/% 0.351±0.031 0.355±0.045 0.371±0.045 0.377±0.058 0.354±0.047 0.364±0.040 0.372±0.057肾脏/% 0.521±0.053 0.544±0.050 0.558±0.040 0.578±0.090 0.534±0.043 0.587±0.048** 0.568±0.043*肾上腺/% 0.014±0.004 0.0141±0.005 0.015±0.007 0.016±0.007 0.014±0.005 0.015±0.006 0.015±0.006胸腺/% 0.065±0.029 0.069±0.018 0.060±0.014 0.066±0.016 0.061±0.013 0.066±0.018 0.067±0.020前列腺/% 0.247±0.013 0.198±0.069 0.245±0.038 0.238±0.027 0.242±0.029 0.264±0.046 0.193±0.048睾丸/% 0.733±0.016 0.705±0.147 0.812±0.023**0.888±0.169 0.754±0.092 0.824±0.074* 0.904±0.095*附睾/% 0.256±0.017 0.260±0.045 0.268±0.004 0.280±0.017 0.274±0.028 0.285±0.031 0.257±0.022子宫/% 0.158±0.024 0.158±0.010 0.336±0.382 0.197±0.031 0.174±0.039 0.293±0.210 0.180±0.039卵巢/% 0.028±0.002 0.034±0.009 0.031±0.005 0.037±0.010 0.030±0.023 0.033±0.004 0.033±0.002**脑/% 0.542±0.018 0.577±0.124 0.615±0.151 0.645±0.160 0.567±0.139 0.602±0.133 0.643±0.142

复方中、高剂量组：有部分动物肝细胞呈轻度脂肪变性、轻度小胆管增生或/和肾小管上皮细胞呈轻度颗粒样变性。其中，在给药13周时，中、高剂量组大鼠肝细胞呈轻度脂肪变性或轻度炎症者分别为1、2只，肾小管上皮细胞呈轻度颗粒样变性者分别为3、4只；给药26周时，中、高剂量组大鼠肝细胞呈轻度脂肪变性者分别为0、3只，呈轻度小胆管增生者分别为1、1只，肾小管上皮细胞呈轻度颗粒样变性者分别为4、4只，所有病变未见有明显的性别差异。

此外，在给药13、26周以及停药8周时，各剂量组和空白对照组动物的心、肝、肾、脑、主动脉血管、子宫、卵巢、睾丸、附睾、前列腺等组织器官均未发现明显异常。

4 讨论

珍菊降压片是中西药配伍复方制剂的典型代表，是临床上最常用的治疗高血压的药物之一。该制剂的研制起源于20世纪70年代，限于当时的研发条件及对药物安全性的认识水准，近来有不少学者对其组方合理性提出质疑［9］。尤其该制剂中的化药成分盐酸可乐定和氢氯噻嗪，因其固有的副作用使在临床选择使用时增添了不少担忧。为此，本课题组就珍菊降压片长时间大剂量使用的安全性进行评价，并通过拆方方式，以制剂中盐酸可乐定和氢氯噻嗪化药组分的固有毒性为比较对象，从毒理学角度对其中西药配伍机制进行研究。

盐酸可乐定［10-11］属α受体激动剂，其降压机制为激动中枢咪唑啉受体，使外周交感张力降低，同时，激动外周交感神经突触前膜α2受体，增强其负反馈作用，减少末梢神经释放去甲肾上腺素，降低外周血管和肾血管阻力，减慢心率，降低血压。但长期使用可使周围血管阻力持续降低，并可使心率减慢。过大剂量可能导致可逆性心脏传导障碍或心律失常，短暂高血压，短暂血糖升高。氢氯噻嗪［12］为临床上常用的利尿药，能抑制肾小管对Na+、C1-的主动重吸收，增加胃肠道对Na+的排泄，长期用药可致血胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白水平升高，血Mg2+、K+、Na+、C1-及HDL水平降低，临床上表现为口干、恶心、呕吐和极度疲乏无力、肌肉痉挛、肌痛、腱反射消失，有促进动脉粥样硬化的可能，但停药即可恢复。本实验结果显示，给大鼠灌服分别相当于人体临床剂量18、71、284倍的珍菊降压片中的盐酸可乐定和氢氯噻嗪的化药组分，每天1次，连续26周，受试动物体质量增长持续下降，血液RBC、HGB、HCT、MCH、MCHC先升高后降低，血清ALP、NEFA上升，TP、ALB、K+、Na+、C1-下降，尿液G1u以及肝、肾、肾上腺、睾丸系数升高，部分动物肝细胞呈轻度脂肪变性，肾小管上皮细胞呈轻度颗粒样变性，停药后亦未见完全恢复，其程度呈明显的量效关系。上述指标的异常变化与珍菊降压片中化药成分的副作用相关，提示珍菊降压片的副作用主要源于盐酸可乐定和氢氯噻嗪2种化药成分。

服用中西药配伍的珍菊降压片，发现由配伍化药组分所导致的体质量增长缓慢现象受到明显抑制，其抑制程度有明显的量效关系，低剂量组完全对抗，中剂量部分对抗，高剂量对抗不明显；同样，珍菊降压片对由化药组分所导致的红细胞系各项指标的异常亦有剂量依赖性的对抗或部分对抗活性，与化药组分对照组比，表现为在给药13周时抑制RBC、HGB、HCT、MCH的升高，而在给药26周及停药8周时对抗RBC、HGB、HCT、MCHC降低；对于由化药组分所导致的糖脂代谢 （GLU，HDL，NEFA）、肝功能（ALP，TP，ALB）以及电解质 （K+、Na+、C1-）异常，珍菊降压片低剂量显示出完全的对抗能力，而中、高剂量对抗作用不明显；珍菊降压片对由化药组分所导致的肝、肾、睾丸、卵巢系数增加未见有明显对抗作用，但对受损肝、肾组织的病理改变有一定的改善作用。

进一步研究还显示，连续13周给大鼠灌服配伍化药组份或复方制剂，均可引起大鼠肾脏基因表达水平的改变，且不同组分所引起的肾脏基因表达改变的差异不同。聚类结果显示，基因表达谱的改变以配伍化药组分作用最为明显，且剂量大小与基因表达变化程度呈正相关。将化药低剂量组与化药中剂量组聚类在一起，中西药配伍使用的复方低剂量与配伍化药低剂量组显著分开，接近于空白对照组，而复方中剂量组与配伍化药中剂量组有一定比例的改变，但基因聚类结果尚不能完全分开，提示低剂量复方中的中药组分能降低化药组分引起的基因表达水平的改变，而高剂量复方中的中药组分对于化药组分长期造成的基因表达改变作用不显著，表明中西药配伍的珍菊降压片在一定程度上能保持肾脏基因表达水平的稳定，且与化药组分的剂量相关［13］。

综上，给大鼠每日灌服低剂量珍菊降压片，连续26周，受试动物各项指标均表现为正常，表明长期给药的安全剂量为人临床剂量的18倍，提示临床上按照说明书推荐剂量服药是比较安全的。但在71、284倍剂量下受试动物部分血清、尿液、脏器系数和组织病理等指标出现明显的异常，提示过分高于说明书推荐剂量服用药物存在着潜在的风险，必须引起高度重视。此外，对于患有肝肾疾病或糖尿病的患者，建议在使用过程中，定期检测其血液生化和尿常规等指标，并应在医生的指导下谨慎用药。

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Detoxic attenuation mechanism of Zhenju Jiangya Tablets containing phyto-Chinesemedicine extracts and chem ical drugs'com ponents

XIE Jia-jun1， ZHOU Guang-xing2， QIAO Zheng-dong3， CHENG Miao4， ZHANG Guo-ming4，WANG Jian-xin5

（1.Center for Drug Evaluation，Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai201203，China；2.Department of Laboratory Animal Science，Fudan University，Shanghai200032，China；3.Shanghai Pudong Hospital，Shanghai201399，China；4.Shanghai Instituteof ChineseMateria Medica，Shanghai201401，China；5.School of Pharmacy，Fudan University，Shanghai201203，China）

AIMTo investigate the safety and the detoxic mechanism of Zhenju Jiangya Tab1ets containing phyto-Chinesemedicine and chemica1s.METHODSThe ratswere treated with Zhenju Jiangya Tab1ets at a dose of 3 200，800，200 mg/kg respective1y and its corresponding chemica1s through intragastric administration once a day for 26 weeks.RESULTSAfter the administration of the chemica1 components，the anima1body weight dec1ined.RBC，HGB，HCT，MCH，MCHC initia11y increased and then decreased in the b1ood.ALP，NEFA，ALB，K+increased.TP，Na+，C1-decreased in the serum.G1u increased in the urine.The coefficients of 1iver，kidney，adrena1g1and and testis increased.Some anima11iver ce11s showedmi1d steatosis and some anima1 rena1 tubu-1ar epithe1ia1 ce11s showed mi1d granu1ar degeneration.Both did not recover comp1ete1y after the administration stopped.But Zhenju Jiangya Tab1ets cou1d comp1ete1y inhibit these adverse reactions at a dose of 200 mg/kg，and part1y inhibit them at a dose of 3 200 and 800 mg/kg.CONCLUSIONZhenju Jiangya Tab1ets can comp1ete1y orpartia11y antagonize toxicity induced by the chemica1s'components，and its antagonizing degree is c1ose1y re1ated to the dosages of the chemica1s'components.The safe dosage of Zhenju Jiangya Tab1ets by intragastric administration for 26 weeks for rats is200 mg/kg，equiva1ent to 18 times of the c1inica1dosage for human.

Zhenju Jiangya Tab1ets；c1onidine hydroch1oride；hydroch1orothiazide；combination of phyto-Chinesemedicine and chemica1s；chronic toxicity test；detoxic attenuationmechanism；safe dose

R285.5

A

1001-1528（2015）08-1633-09

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.08.001

2015-03-02

国家 “十二五”科技重大专项课题（2011ZX09301-009）；上海市科委中药现代化专项 （04DZ19854）

谢家骏 （1959—），男，研究员，硕士生导师，研究方向为药理毒理学研究与中药新药开发。Te1：（021）51322395，E-mai1：xiejj001@163.com