复肾功方对慢性肾功能衰竭大鼠肾功能的影响

骆 言， 黄学宽， 熊维建， 张超男， 蒋 娟， 万 磊， 王 玲

（1.重庆医科大学中医药学院，重庆401331；2.重庆市中医院肾内科，重庆401331）

复肾功方对慢性肾功能衰竭大鼠肾功能的影响

骆 言1，2， 黄学宽1*， 熊维建2， 张超男1， 蒋 娟1， 万 磊1， 王 玲1

（1.重庆医科大学中医药学院，重庆401331；2.重庆市中医院肾内科，重庆401331）

目的通过客观的指标和电镜下肾组织病理变化情况，探讨国医大师郭子光的复肾功方对慢性肾功能衰竭（chronic renal failure，CRF）大鼠肾组织的影响。方法SD雌性大鼠50只，随机分为正常组、模型组、复肾功方高剂量组、复肾功方中剂量组、复肾功方低剂量组。正常组常规喂养，其余4组给予5%腺嘌呤饲料喂养制作CRF大鼠模型，持续喂养21 d。造模成功后，正常组和模型组予以生理盐水按每天20 mL/kg体质量的剂量灌胃，复肾功方组予以复肾功方高中低组分别按每天30、20、10 mL/kg的剂量进行治疗，连续喂养30 d。检测各组大鼠血肌酐 （Scr）、血尿素氮 （BUN）水平，在电镜下观察肾组织超微结构形态变化。结果与正常组相比，模型组血尿素氮，肌酐均增高 （P＜0.05），与模型组相比，复肾功方组血尿素氮，肌酐表达均降低 （P＜0.05）；在电镜下，模型组均有不同程度肾损伤，复肾功方高中低组损伤相对模型组较轻。结论复肾功方可明显改善CRF大鼠模型肾脏功能，减轻肾损伤，抑制慢性肾衰竭的发生。

慢性肾功能衰竭；复肾功方；血尿素氮；肌酐；电镜

复肾功方是首届国医大师郭子光教授经过60年来临床实践总结出来的经验方，具有调理气血、活血化湿、利尿通络之功，治疗早中期慢性肾功能衰竭确有疗效。慢性肾功能衰竭（chronic renal failure，CRF）是以慢性进行性肾实质损害而导致的严重代谢紊乱，可导致肾脏萎缩，肾脏功能减退。临床以代谢产物潴留，酸碱失衡，水电解质紊乱及全身各系统受损为主要表现的临床综合征［1］。西医对于终末期慢性肾衰竭采用透析肾移植等治疗方法，但是透析肾移植均不能用于治疗早中期慢性肾衰竭。郭老的复肾功方在临床上疗效显著，他很多学生对其进行了总结和归纳［2-3］，本实验主要通过造肾功能衰竭大鼠模型，通过客观的指标和电镜下［4-5］肾组织病理变化情况探讨复肾功方的作用，希望为临床治疗提供实验依据。

1 材料

1.1 动物 SD雌性大鼠50只 （生产许可证号SCXK渝2007-0001），由重庆医科大学实验动物中心提供，体重为（200±10）g。

1.2 主要药品与试剂 复肾功方由黄芪、水蛭、车前子、牛膝、丹皮、泽泻、茯苓、山茱萸、山药、生地、杜仲、黄柏、苍术等中药组成，原药购自重庆西部医药商城，经重庆医科大学中医药学院黄学宽教授鉴定，按常规方法自制煎剂 （即冷水浸30 min，煮沸后煎30 min，共煎3次，合并药液，浓缩为含生药1.0 g/mL）。腺嘌呤 （北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司，批号0183-50），SCr、BUN试剂盒 （南京建成科技有限公司，批号20121101）。

2 方法

2.1 分组、造模与治疗 雌性SD大鼠50只适应性喂养7 d后，随机分为正常组、模型组、复肾功方高剂量组、复肾功方中剂量组、复肾功方低剂量组，每组各10只。正常组给予普通饲料，其余两组给予5%腺嘌呤饲料［6-7］（5%腺嘌呤，95%普通饲料），自由进食，造模21 d。造模成功后，将5%腺嘌呤饲料换成普通饲料，正常组与模型组予以生理盐水按20 mL/kg的剂量进行灌胃，按照 《实验药理学》换算大鼠用药量［8］，复肾功方组予以复肾功方按高剂量组30 mL/kg，中剂量组20 mL/kg，低剂量组10 m L/kg体质量进行灌胃，持续治疗30 d。

2.2 指标检测 观察一般情况：大鼠摄食和饮水量，观察大鼠毛发及活动等。

BUN、SCr检测：治疗30 d后禁食禁水12 h，腹腔注射10%水合氯醛麻醉，心脏取血，常温静置1 h，3 500 r/m in离心5 min，取上清液以备用，根据试剂盒说明书操作检测SCr、BUN水平。

肾组织电镜下观察超微结构：取新鲜的肾组织肾皮质部分切成2 mm3小块，经2.5%戊二醛固定，1%锇酸后固定，梯度酒精脱水，环氧树脂618包埋，超薄切片后醋酸铀-柠檬酸铅染色KYKY AMRAY-100B型透射电镜下观察［9］肾组织的超微结构。

2.3 统计学方法 应用SPSS 18.0统计软件进行，所得数据以均值±标准差 （）表示，组间比较采用单因素方差分析方法分析，组间两两比较采用LSD方法，P＜0.05表示差异有统计学意义。

3 结果

3.1 一般情况 与正常组比较，模型组大鼠出现萎靡、少动、脱毛、卷曲弓背、食欲减弱、体重下降等现象；与模型组相比，复肾功方高中低3组大鼠活动量相对增多，脱毛、饮食等有所改善 （表1）。

表1 实验结束时各组大鼠摄食和饮水 （）

表1 实验结束时各组大鼠摄食和饮水 （）

注：与正常组比较，*P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05；与高剂量组比较，★P＜0.05；与中剂量组比较，○P＜0.05

组别 动物数 摄食/g造模前15 d 30 d正常组15 d 30 d饮水/m L造模前10 25.6±0.8 29.4±0.9 34.5±0.4 36.5±4.5 39.5±4.9 43.3±5.1模型组 10 18.6±0.4 20.4±0.5* 21.3±1.1* 35.4±3.2* 49.8±5.4* 64.3±7.6*复肾功方高剂量组 10 18.4±0.5 28.6±0.6*△ 32.3±1.2*△ 37.8±4.6*△ 46.1±3.2*△ 49.4±6.5*△复肾功方中剂量组 10 18.0±0.3 27.4±1.2*△★ 30.4±0.7*△★ 36.1±5.6*△★ 48.9±4.3*△★ 53.7±5.5*△★复肾功方低剂量组 10 19.0±0.3 25.5±0.7*△★○ 28.1±0.8*△★○ 37.2±6.3*△★○ 49.0±5.0*△★○ 40.7±6.6*△★○

3.2 大鼠血肌肝 （SCr）、血尿素氮 （BUN）的检测 与正常组比较，模型组大鼠SCr、BUN含量显著增高 （P＜0.05）；与模型组比较，复肾功方高中低3组大鼠SCr、BUN含量显著降低（P＜0.05），复肾方高、中剂量组SCr、BUN含量显著低于低剂量组 （P＜0.05），与复肾功方中剂量比较，高剂量组SCr、BUN明显降低 （P＜0.05）。见表2。

表2 各组大鼠SCr及BUN含量变化（）

表2 各组大鼠SCr及BUN含量变化（）

注：与正常组比较，*P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05；与高剂量组比较，★P＜0.05；与中剂量组比较，○P＜0.05

组别 动物数 SCr/（μmol·L-1）BUN/（mmol·L-1）造模前 造模后正常组造模前 造模后10 58.30±8.56 64.75±8.44 7.47±0.93 7.55±1.30模型组 10 58.08±8.19 120.49±21.77* 6.95±1.18 22.90±3.31*复肾功方高剂量组 10 60.26±9.62 80.23±9.36*△ 7.23±1.28 10.71±1.81*△复肾功方中剂量组 10 61.75±10.06 92.57±7.4*△★ 7.23±1.28 13.38±2.97*△★复肾功方低剂量组 10 59.88±12.17 103.84±6.77*△★○ 7.23±1.50 16.82±3.04*△★○

3.3 组织形态 正常组大鼠肾小球基底膜内、中、外三层结构清晰完整，内皮细胞，足突形态，系膜细胞排列整齐，未见异常。模型组多数肾小球系膜基底明显增多，系膜增生肥大，系膜区增宽，足细胞凸起增大，部分融合，尿间隙见红细胞，溶酶体部分变性，血管内皮细胞未见明显肿胀变性。复方高中低各组系膜稍增生，并不明显，足突极少增大融合。见图1。

4 讨论

CRF属中医 “关格”、“虚损”、“水肿”等范畴，郭教授认为CRF系由多种慢性疾病迁延发展而致，湿热瘀血互结是造成病情恶化的根本病理特点，病机可归纳为 “虚、痰、瘀、毒”四个方面，“虚”是根本，“痰”、“瘀”是病理基础，而 “毒”是加重因素［10］。即气血失调、痰瘀阻络是其发病的基本病理。而在疾病的早中期，以肺肾虚损（兼湿浊瘀阻）为主要病机，以致于脏腑平衡功能失调，成为五脏渐次受损的重要环节［11］。基于以上理论，郭教授创制出复肾功方，主要用于慢性肾功能不全一、二期 （代偿期、失代偿期）的非替代疗法，经多年临床验证，疗效确切，许多病例表明，抓紧治疗可逆转肾功能 （尤以高血压肾损害和糖尿病肾病等为优），而免予替代疗法 （透析、换肾）［11］。

复肾功方是国医大师郭子光教授经过60余年临床验证总结出来的疗效确切的经验方。本方根据气血失调、脏腑虚衰、痰瘀阻络这一病机创立，由黄芪、水蛭、车前子、牛膝、丹皮、泽泻、茯苓、山茱萸、山药、生地、杜仲、黄柏、苍术等组成。现代药理研究证实，方中黄芪具有利尿、降低尿蛋白、提高免疫力、调节血压等作用；水蛭有抗凝、抗血小板聚集、抗血栓等作用，能改善血液流变性，且有降脂作用，对慢性肾炎循环免疫复合物还有清除作用；车前子有利尿作用，可抑制肾脏草酸钙结晶的沉积和抑制肾脏Na+、K+-ATP酶的活性；牛膝所含甾体类激素有增强肾脏蛋白质合成等作用；丹皮有抗凝、抗血栓、抗炎等作用；泽泻有利尿作用，泽泻流浸膏能减轻硝酸甘油所致慢性肾炎模型兔中尿素和胆固醇的滞留，泽泻乙醇提取物还具有剂量依赖性的抑制肾脏Na+、K+-ATP酶的活性；茯苓有利尿作用；山茱萸、山药、生地均有抗氧化、抗炎、调节血压、提高免疫力等作用；杜仲有抗炎、利尿、调节免疫等作用；黄柏有抗炎、降压、降低血尿酸等作用；苍术有抗菌、降糖等功效［12］。从全方不同药味药理作用来看，这些药物都具有保护肾功能、改善肾血流量、抗炎等作用。

腺嘌呤是一种含氮杂环的嘌呤类化合物，其在体内可生成2，8-二羟基腺嘌呤，其最终产物结晶沉淀于肾间质及肾小管，可引起肾间质纤维化、肾小管腔囊状扩张、肾小管堵塞等，进而造成SCr、BUN等含量异常，最终导致CRF［13-14］。

图1 各组大鼠肾组织电镜观察结果 （×10000）

血肌酐 （SCr）和尿 （BUN）［15］者分别为含氮有机物和蛋白质代谢的中末产物，因此血中肌酐、尿素氮在一定程度上可以反映肾小球滤过功能的损害程度，是反映慢性肾衰竭的进展重要标志之一［16-17］。

随着电镜诊断应用到肾活检病理检查中，肾活检诊断逐渐完善。近年来随着医学发展及肾脏病诊断及治疗的需要，电镜下肾皮质组织的微小病变更加明显［18］。本实验在透射电子显微镜观察下，模型组有细胞膜基质增厚，足突扁平，融合等情况。模型组肾小球系膜增生肥大提示蛋白尿，系膜区增宽，间隙见红细胞，提示血尿，足细胞节段性融合。复方高中低各组系膜稍增生，并不明显，足突极少增大融合。结果显示经过复肾功方的治疗后，慢性肾衰竭模型大鼠，微结构形态变化得以改善。综上所述，复肾功方对肾功能起到保护作用。

关于实验的不足之处：对于肾功衰大鼠治疗的不同剂量受试物的药效及其强度比较和评判，显微镜检查可能更有效，两者能结合更佳评判，在下一步相关实验中我们会做进一步改进。另外，可以设阳性药物对照组，更客观地反应复肾功方的作用效果。

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R285.5

B

1001-1528（2015）04-0870-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.04.040

2014-02-12

重庆市卫生局科技项目 （2010-2-25）

骆 言（1986—），女，硕士生，主要从事中医药学基础研究及临床。Tel：15123898560，E-mail：summerwaiwai@163.com

*通信作者：黄学宽 （1972—），男，教授，硕士生导师，主要从事中医经络理论研究及临床。Tel：13452382058，E-mail：xkhuang2002@163.com