高效液相色谱法测定桃儿七中槲皮素及山柰酚

2015-01-17罗兴平杨玲霞陈明晶周海静

中成药 2015年4期

关键词：甘南州槲皮素黄酮类

罗兴平，杨玲霞，陈明晶，周海静

（1.西北民族大学化工学院，甘肃兰州730000；2.甘肃省药品检验研究院，甘肃兰州730070；3.甘南州人民医院，甘肃甘南747000）

高效液相色谱法测定桃儿七中槲皮素及山柰酚

罗兴平1，杨玲霞2，陈明晶3，周海静1

（1.西北民族大学化工学院，甘肃兰州730000；2.甘肃省药品检验研究院，甘肃兰州730070；3.甘南州人民医院，甘肃甘南747000）

目的测定桃儿七中槲皮素及山柰酚的量。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为Kromasil C18柱（4.0 mm× 250 mm，5.0μm）；甲醇-0.1%磷酸溶液（50：50）为流动相，体积流量1.0 mL/min；检测波长360 nm。结果槲皮素、山柰酚分别在0.037 2～0.744μg和0.019 4～0.388μg范围内具有良好线性关系，平均回收率分别为97.8%（RSD为1.1%）和98.6% （RSD为1.4%）结论该法准确、灵敏，可用于桃儿七中槲皮素及山柰酚的定量测定。

桃儿七；槲皮素；山柰酚；HPLC

桃儿七为小檗科桃儿七属植物Sinopodophyllum hexandrum（Royle）Ying的干燥根及根茎，别名鸡素台，系藏族人民的常用中草药。其味苦、辛，性温，有小毒，具有祛风除湿、活血调经、祛痰止咳的功效，主要用于治疗血瘀经闭、难产、死胎、胎盘不下等病症。桃儿七生长缓慢，对环境的要求苛刻，分布范围狭窄，是我国珍稀药用植物，1992年被《中国植物红皮书》收录，为国家二类保护植物。桃儿七主要化学成分为木脂素类及黄酮类，其中黄酮类化合物主要为槲皮素和山柰酚，具有很好的抗氧化、抗菌、祛痰及镇咳作用，为临床治疗气管炎的有效成分［1-3］。本实验采用高效液相色谱法同时测定了桃儿七中槲皮素和山柰酚的量，可有效控制桃儿七的内在质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器岛津LC-2010A高效液相色谱仪（日本岛津公司）；梅特勒XS205DU电子天平（瑞士Mettler toledo公司）；B3200S-T型超声波清洗器（上海必能信超声有限公司）；MILLIQ超纯水系统（美国Millipore公司）。

1.2 试药槲皮素对照品（中国食品药品检定研究院，批号100081-200406）；山柰酚对照品（中国食品药品检棕研究院，批号110861-2004050）；桃儿七药材（分别购自甘南州舟曲县人民医院、甘南州人民医院、甘南藏族自治州药材公司及药店），由甘肃省食品药品检验所朱俊儒主任药师鉴定为桃儿七Sinopodophyllum hexandrum（Royle）Ying。甲醇为色谱纯（美国Fisher公司）；其余试剂均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验 Kromasil C18色谱柱（4.0 mm×250 mm，5.0μm）；流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（50：50）；检测波长为360 nm，体积流量1.0 m L/min；在此色谱条件下，槲皮素和山柰酚均与样品中其他组分色谱峰基线分离，见图1。理论塔板数按槲皮素峰计算为8 580，按山柰酚计算为7 412。

图1 高效液相色谱图Fig.1 HPLC chromatogram s

2.2 对照品溶液的制备分别精密称取槲皮素和山柰酚对照品适量，加甲醇制成每1 mL中各含0.372 mg和0.194 mg的溶液，作为对照品贮备溶液，精密吸取对照品贮备溶液10 m L，置于100 m L量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（槲皮素为37.2μg/mL，山柰酚为19.4 μg/mL）。

2.3 供试品溶液制备取本品细粉约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 mL，称定质量，超声处理40 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 线性关系的考察精密吸取对照品溶液1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、16.0、20.0μL，按上述条件分别注入色谱仪测定，记录峰面积，以槲皮素、山柰酚峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，进行回归计算，计算得：槲皮素的回归方程为 A= 3 158 929C+17 398，r=0.999 9，槲皮素在0.037 2～0.744μg范围内线性关系良好；山柰酚的回归方程为A=3 609 803C-7 992，r=1.000 0，山柰酚在0.019 4～0.388μg范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验精密吸取对照品溶液，按上述色谱条件重复进样5次，每次10μL，分别计算得槲皮素峰面积的RSD为1.8%、山柰酚峰面积的RSD为1.3%。表明仪器的精密度良好。

2.6 重复性试验精密称取同一批桃儿七药材（甘南州人民医院）5份，按供试品溶液的制备方法制备，依法测定，结果槲皮素的RSD为1.7%，山柰酚的RSD为2.3%，表明本法重复性良好。

2.7 稳定性试验称取本品适量，按供试品制备方法制备供试液，按上述色谱条件，分别在0、2、4、8、12、16、24 h进样10μL，测定槲皮素和山柰酚的峰面积，结果槲皮素峰面积的 RSD为2.3%，山柰酚峰面积的RSD为1.7%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.8 加样回收率试验取已知含有量的桃儿七样品（甘南州人民医院，槲皮素和山柰酚分别为0.51 mg/g和0.32 mg/g）6份，精密称定，分别精密加入对照品溶液适量，按 “2.3”项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算回收率，结果见表1和表2。

表1 槲皮素的加样回收率试验结果Tab.1 Results of recovery tests for quercetin

表2 山柰酚的加样回收率试验结果Tab.2 Results of recovery tests for kaem p ferol

2.9 样品测定取桃儿七药材，按 “2.3”项方法制备供试品溶液，依法测定，计算，结果见表3。

3 讨论

桃儿七主要化学成分为木脂素类及黄酮类，其中木脂素类成分（如鬼臼毒素等）因具有抗癌活性而研究较多，有关质量分析的研究也集中在此处［4-9］，但对黄酮类成分则少有报道。研究表明，该类成分主要为槲皮素、山柰酚及其苷类［1-3］，具有祛痰、平喘、降血脂、降血压、增加冠脉血流量等功效，与以桃儿七为主要成分的藏药，如红花如意丸，平喘抗炎胶囊等临床作用一致，因此制定桃儿七中黄酮类化合物的定量测定方法很有必要。

实验中发现，在本实验色谱条件下，保留时间6.5 min左右处有一色谱峰，与金丝桃苷色谱峰位置相同，经过紫外光谱比对及更换流动相系统等手段确认，该峰不是金丝桃苷，其归属有待进一步研究。

［1］刘海军，徐艳，苏国庆，等.桃儿七的研究进展［J］.中草药，2004，35（1）：99-100.

［2］张东佳，漆燕玲.药用植物桃儿七的研究进展［J］.安徽农业科学，2011，39（18）：10802-10803.

［3］区智，屈燕.桃儿七国内外研究进展［J］.北方园艺，2013，（18）：183-185.

［4］刘世巍，丁建海.HPLC法测定桃儿七中鬼臼毒素的含量［J］.宁夏师范学院学报，2012，33（6）：48-49.

［5］孙彦君，李占林，陈虹，等.桃儿七化学成分研究［J］.中药材，2012，35（10）：1607-1609.

［6］黄坤，蒋伟，赵纪峰，等.濒危药用植物桃儿七中鬼臼毒素和总木脂素含量测定［J］.中国中药杂志，2012，37（10）：1360-1365.

［7］熊文勇，魏朔南，岳明.HPLC分析桃儿七中鬼臼毒素的含量［J］.中成药，2010，32（5）：875-878.

［8］秦杨，桂明玉，于力娜，等.RP-HPLC法测定桃儿七中木脂素成分的含量［J］.药物分析杂志，2009，29（9）：1490-1492.

［9］熊文勇，魏朔南，岳明.桃儿七HPLC指纹图谱研究［J］.中成药，2010，32（11）：1850-1854.

Quantitative determ ination of quercetin and kaemp ferol from Sinopodophyllum hexandrum（Royle）Ying by HPLC

LUO Xing-ping1， YANG Ling-xia2， CHEN Ming-jing3， ZHOU Hai-jing1

（1.Northwest University for Nationalities，Institute of Chemical Engineering，Lanzhou 730000，China；2.Gansu Provincial Institute for Drug Control，Lanzhou 730070，China；3.The People's Hospital of Gannan Prefecture，Gannan 747000，China）

Sinopodophyllum hexandrum（Royle）Ying；quercetin；kaempferol；HPLC