H P L C法测定苯磺酸氨氯地平片溶出度的研究

王正凤 刘洪军 贺丽英 郑小锋

（西南药业股份有限公司药物研究所，中国 重庆400038）

苯磺酸氨氯地平片属于二氢吡啶类钙离子通道拮抗药，用于原发性高血压的治疗，由美国辉瑞制药公司于1992年研发上市，商品名络活喜®，上市药品规格主要为5mg,疗效显著[1]。现在国内进行申报以及批准生产的有2.5mg、5mg、10mg三种规格，以满足不同情况下的用药需求。由于该品种的规格较小，已有研究[2-4]一般采用《中国药典》附录“溶出度测定法”的第二法（介质体积为500ml）或第三法进行溶出度的测定[5]。根据国内外药品相关指导原则的要求，随着分析技术特别是高效液相色谱应用的普及，供试样品的浓度可以低至ng/ml，已经大大突破了以往小规格药品为满足紫外分光光度法测定而采用的小体积溶出条件，第三法（小杯法）将逐步不再采用。本研究考察了三种规格样品用同样的条件溶出后，直接以高效液相色谱进行分析的方法，并对方法进行了验证。结果表明，方法准确、简便、快速，适用于多种规格苯磺酸氨氯地平片溶出度的测定。

1 仪器与试药

1.1 实验仪器

Agilent 1260(VWD)高效液相色谱仪（安捷伦科技）；ZRS-8G智能溶出仪 （天津天大天发）；TG332A微量分析天平 （湘仪仪器厂）；METTLERAB-204E分析天平（梅特勒公司）。

1.2 试药

苯磺酸氨氯地平对照品（中国药品生物制品检定所）、苯磺酸氨氯地平片（西南药业股份有限公司）；甲醇（色谱纯，上海国药试剂集团）、磷酸二氢钾（分析纯，重庆川东化工厂）。

2 方法

2.1 溶出方法

取本品，照溶出度测定法[中国药典2010年版二部附录X C第二法]，以盐酸溶液（0.9→1000）500ml为溶剂，转速为每分钟 75转，依法操作，经30分钟时，取溶液适量，滤过，续滤液作为供试品溶液；另取苯磺酸氨氯地平对照品约14mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇适量溶解后加盐酸溶液（0.9→1000）稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加盐酸溶液（0.9→1000）稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取上述两种溶液，依法测定并计算出每片的溶出量，限度为标示量的80%，应符合规定。

2.2 分析方法（色谱条件与系统适用性试验）

色谱柱：Agilent ZORBAX SB C18 柱（150×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.03mol/L 磷酸二氢钾溶液（70：30）；流速：1.0ml·min-1；检测波长：237nm；柱温25℃；进样体积10μl；理论塔板数按氨氯地平峰计算应不低于1000。

2.3 溶液的配制

2.3.1 标准储备液

精密称取苯磺酸氨氯地平对照品，置100ml容量瓶中，加甲醇适量溶解后加入盐酸溶液（0.9→1000）稀释至刻度，摇匀，使成含氨氯地平0.2 mg/ml的溶液。

2.3.2 对照溶液

精密称取苯磺酸氨氯地平对照品，置100ml容量瓶中，加甲醇适量溶解后加入盐酸溶液（0.9→1000）稀释至刻度，摇匀，精密量取适量该液再稀释，使成含氨氯地平0.01 mg/ml的溶液。

2.3.3 样品供试液

分别取2.5mg 20141101批、5mg 20141101批、10mg 20141101批三种规格各1个代表批样品，依法进行溶出试验，取样滤过即得。

2.3.4 阴性样品及溶液

精密称取空白辅料约70 mg，置500ml容量瓶中，先加入250ml溶剂，超声30分钟，用溶剂定容至刻度，滤过，即为阴性对照溶液。

3 结果

3.1 专属性及系统适用性验证

取空白溶剂、阴性对照溶液、对照溶液和样品供试液，采用拟定的色谱条件分别进行液相色谱分析。结果表明，阴性对照和空白溶剂对氨氯地平峰无干扰，样品供试液中也未发现干扰峰，说明方法专属性强，见图1；系统适用性溶液理论塔板数大于1000。

3.2 线性及线性范围

取标准储备液 0.5 ml、1.0ml、1.25 ml、2.5 ml、5.0 ml、6.0 ml， 分别置于50ml容量瓶中，用溶剂稀释定容，即得线性试验样品溶液。该六份样品代表的浓度分别为 2μg/ml、4μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20.1μg/ml、24.1μg/ml，代表的范围为2.5 mg规格标准浓度的60%至10 mg规格标准浓度的120%。精密量取上述溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积Y对氨氯地平浓度X进行线性回归，得回归方程为：y=53.688x+3.1784，r=0.9999(n=6)。表明在浓度为 2μg/ml～24.1μg/ml的范围内，氨氯地平峰具有良好的线性关系。

3.3 精密度

3.3.1 重复性

取同浓度的样品供试液6份及对照溶液，分别精密量取注入色谱仪，记录色谱图，统计6份溶出度结果的相对标准偏差，结果得到RSD(%)=0.12。

3.3.2 中间精密度

取同一批次的样品，配制相同浓度的6份样品供试液及对照溶液，在不同的时间，更换人员、色谱柱和液相仪进行中间精密度试验，最后对12个溶出度数据进行相对标准偏差的统计，得到RSD(%)=0.27。

3.4 加样回收率

分 别 精 密 量 取 储 备 液 0.5 ml、1.0ml、1.25 ml、2.5 ml、5.0 ml、6.0 ml，置已加入了对应量辅料的50 ml容量瓶中，用溶剂溶解（超声30分钟）并稀释至刻度，滤过，即得到从2.5 mg规格溶出60%至10 mg规格溶出120%之间6个浓度水平的加样回收率供试液；精密量取上述溶液及对照溶液，依法测定，每个水平平行测定3次，计算每次回收率结果，并统计共18个结果的相对标准偏差。得到回收率在99.6%-101.4%范围内，且18个数据的RSD(%)=0.36。

3.5 滤膜的影响

取样品供试液，先用国产醋酸纤维素膜（上海迪清过滤技术有限公司，0.45μm规格）过滤，取续滤液即得第一次滤过供试液，取部分该液，用新的相同滤膜再过滤，续滤液即得第二次滤过供试液。分别对两种供试液进行色谱分析，每样2次，记录色谱图，统计4次峰面积的相对标准偏差。测定结果基本一致，RSD（%）=0.78，滤膜基本无影响。

3.6 溶液的稳定性

考虑到苯磺酸氨氯地平在强酸下极不稳定易发生降解的实际情况，必须考察配制好的样品供试液在常温下的稳定性，以进一步确定试验条件和注意事项。 笔者分别在放置 0 h、2h、4 h、6 h、8h、16h 时取样进行分析，结果表明，在该酸性介质中，主药的稳定性较差，但在取样后尽快（2小时内）测定，结果与0小时基本一致，稳定性符合要求。

3.7 耐用性

取对照溶液和样品供试液，在分别流速变化0.2ml/min、柱温变化5℃、采用不同厂牌及规格的色谱柱以及标准条件下，每个条件测定两次，统计每个变动下得到的4个测定结果与标准条件下得到的2个测定测定结果共6个数据的相对标准偏差，结果流速变化下溶出的RSD(%)=0.15、采用不同厂牌和规格的色谱柱下含量的RSD(%)=0.12、柱温变化下含量的RSD(%)=0.21，且各条件下得到的结果均在98.0%-102.0%范围内。

3.8 样品的测定

取每个规格各1个代表批样品，照HPLC法进行溶出度的测定，结果测得三批样品的溶出度分别为2.5mg(20141101批)：99.7%、98.6% 、98.9% 、99.5% 、99.8% 、99.4% ； 5mg(20141101 批 )：100.7% 、99.6% 、98.7% 、99.1% 、99.4% 、99.1% ；10mg(20141101 批 )：101.2% 、100.8%、100.9%、101.5%、99.8%、100.4%，全部符合规定。

4 讨论

苯磺酸氨氯地平片法定标准或已报道的文献中，一般采用紫外-可见分光光度法进行溶出供试液的分析测定，方法专属性较HPLC法低，在使用酸性介质溶出后，即使有明显降解情况，由于降解产物本身也有较强的紫外吸收，亦不能通过测定体现出来；而HPLC法则清楚的体现了这种变化，由于主药在酸性环境中更容易发生氧化降解，故取样后需尽快上机测定，才能保证结果的准确、可靠。

在三种规格中，即使是最小规格（2.5mg）供试液主峰的S/N也远远大于定量限，故在进行溶出试验时，如果采用标准的900ml或1000ml的介质体积，仍能满足取样滤过后直接进行HPLC法测定的灵敏度要求。

［1］王全洪,吴丹,等.HPLC法同时测定苯磺酸氨氯地平原料药及片剂中8种已知有关物质的含量[J].中国药房,2013,24(25)：2369-2372.

［2］程敏毓,刘放.不同厂家苯磺酸氨氯地平口服制剂溶出度比较[J].海峡药学,2010,1(3)：18-21.

［3］苏芳,孔爱英,等.不同厂家苯磺酸氨氯地平片溶出度的考察[J].解放军医学杂志,2012,24(3)：44-46.

［4］王方,刘祖雄.苯磺酸氨氯地平分散片的制备及溶出度测定[J].临床军医杂志,2011,9(2)：355-358.

［5］国家药典委员会.《中国药典》2010 年版(二部)[M].2010：附录 85-87.