香叶木素－7－O－β－D－葡萄糖苷的抗炎作用研究

白庆云，梁 辉，袁功文，闻永举

(宜春学院 化学与生物工程学院，江西 宜春 336000)

香叶木素－7－O－β－D－葡萄糖苷是以橙皮苷为原料通过脱氢，生成地奥司明，再由地奥司明去除分子中鼠李糖而获得的新化合物。地奥司明为黄酮类衍生物，可以改善微循环。调节淋巴系统功能，降低毛细血管通透性，改善其弹性和脆性，抑制水肿形成。［1］是临床上治疗痔疮，慢性静脉功能不全的常用药。［2］此外，地奥司明还具有类似维他命P (Vitamin P)的作用，可降低血管脆性，使异常增高的通透性降低，所以还用于高血压的防治及动脉硬化的辅助治疗。由于地奥司明不易溶于水及常见的有机溶剂，导致其生物利用度较低。将其结构进行改造成为香叶木素－7－O－β－D－葡萄糖苷后，在溶解性、吸收、分布及代谢等方面均优于地奥司明，生物利用度大大提高。为探明结构改造对地奥司明的作用是否有影响，本实验就地奥司明和香叶木素－7－O－β－D－葡萄糖苷两者的抗炎作用进行了对比研究。

1 实验材料

1.1 动物:KM (KunMing)小鼠(由南昌大学医学院提供)60 只，雌雄不拘，体重20 ±2g。

1.2 器材:0.25mL 注射器，4 号针头，紫外分光光度计(型号，T6S 型，编号5－1650－01－0904)，精密电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司，精密度0.0000g)，直径8mm 打孔器，剪刀。

1.3 药品及试剂:地奥司明片剂(南京正大天晴制药有限公司，0.45g/片，含有黄酮类化合物500mg，其中地奥司明450mg)，香叶木素－7－O－β－D－葡萄糖苷(由宜春学院化学与生物工程学院药化研究室提供，经鉴定纯度为95%)，伊文思蓝(上海晶纯试剂有限公司，批号20100802)，生理盐水，二甲苯(上海振欣试剂厂，批号20081108)，丙酮(天津市大茂化学试剂厂)，硫酸钠(天津市永大化学试剂开发中心，批号20060816)。

2 实验方法

2.1 5%伊文思蓝生理盐水的配制:精密称取伊文思蓝0.5g，溶于生理盐水中成100mL，摇匀，备用。

2.2 丙酮－硫酸钠液配制:称取无水硫酸钠1.5g，溶于150mL 蒸馏水中，然后向硫酸钠溶液内缓慢加入350mL 的丙酮，即得。此液用于提取皮肤内染料。

2.3 对照品溶液的配制:精密称取伊文思蓝2.5g，置100mL 容量瓶中，加丙酮－硫酸钠溶解并稀释至刻度，即得0.025g/mL 的对照品溶液

2.4 标准曲线的制备:精密量取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别置于10mL 容量瓶中，加丙酮－硫酸钠稀释至刻度，摇匀。以第一瓶作空白，用紫外分光光度计在590nm 处测其吸收度，作A—C 标准曲线，计算其回归方程。

2.5 香叶木素－7－O－β－D－葡萄糖苷溶液、地奥司明溶液的配制:取地奥司明片6.5 片放于研钵中研成粉末，将其倒入装有250mL 生理盐水的平底容量瓶中，并不断用玻璃棒不断搅拌，直至完全溶解，制成浓度为11.7mg/mL 的溶液。精密称取香叶木素－7－O－β－D－葡萄糖苷粉末0.2925g于25mL 容量瓶中，用生理盐水溶解，并稀释至刻度制成11.7mg/mL 的溶液。

2.6 分组与给药

2.6.1 香叶木素－7－O－β－D－葡萄糖苷对小鼠腹部皮肤毛细血管渗透性的影响

取小鼠30 只，随机分为3 组，雌雄不拘:A 组(生理盐水)、B 组(地奥司明)和C 组(香叶木素－7－O－β－D－葡萄糖苷)。B 组小鼠分别于背部皮下注射地奥司明0.1mL/10g，C 组注射香叶木素－7－O－β－D－葡萄糖苷0.1mL/10g，A 组注射等体积生理盐水。连续给药3 天，1 小时后于尾部静脉注入配制好伊文思蓝溶液，每10g 体重0.1mL，随即于小鼠腹部正中(去毛部位)滴二甲苯，每只小鼠0.03mL，20min 后小鼠脱颈椎致死，剥下腹部皮肤翻转后贴在白色搪瓷盘上，根据皮片上蓝斑的色泽深浅将其分为7 ～10 个级别，一个级别记1 分。［3］评定蓝斑深浅后，每块皮片用手术剪剪碎，浸入玻璃试管中，倒入丙酮－硫酸钠提取液10mL，用塞子塞紧，避光放置，每日轻轻摇动该试管2 ～3 次，3 天后2000r/min 离心10min，取上清液，用分光光度计于590nm 处测定吸光度(以未浸泡皮片的丙酮－硫酸钠液调零)。［4，5］(注意:伊文思蓝注入量一定要准确;滴二甲苯务须仔细，尽量使二甲苯浸润的皮肤形成一个近圆形斑块，为此，要注意二甲苯滴上皮肤时的角度，位置及小鼠安静不挣扎，二甲苯浸润的皮肤面积各鼠应力求保持大小相近;小鼠腹部皮肤去毛可用剪毛剪于实验前一日进行)。按下式计算染料渗出抑制率。

染料渗出抑制率= (对照组染料量－实验组染料量)/对照组染料量×100%［5］

2.6.2 香叶木素－7－O－β－D－葡萄糖苷对小鼠耳肿胀的影响

另取小鼠30 只，随机分为3 组:I 组(生理盐水)、II 组(地奥司明)、III 组(香叶木素－7－O－β－D－葡萄糖苷)。II 组小鼠分别腹腔注射地奥司明0.1mL/10g，III 组腹腔注射香叶木素－7－O－β－D－葡萄糖苷0.1mL/10g，I 组注射等体积生理盐水。每组小鼠每日腹腔注射给药一次，连续3d，第三天给完药后0.5h，三组小鼠于左耳廓前后均匀涂抹二甲苯0.1mL，右耳不涂以作为自身空白对照。60min 后将小鼠全部脱颈椎处死，沿耳廓基线剪下双耳，重叠放置，用打孔器打下圆耳片，用精密电子天平称重，按以下公式计算肿胀度和抑制率。［6］

肿胀度(mg)=每组左耳片重－每组右耳片重

平均肿胀度(mg) =肿胀度/动物数

耳肿胀抑制率= (对照组平均肿胀度－给药组平均肿胀度)/对照组平均肿胀度×100%［7］

2.7 统计方法 采用SPSS 10.0 软件对试验数据进行统计学分析，计量资料数据以均数± 标准差(± s)表示，采用t 检验。以p ＜0.05 为差异具有统计学意义。

3 实验结果

3.1 回归曲线与方程见图1

图1 显示伊文思蓝浓度和吸光度之间具有良好的线性关系，R2=0.9997。

图1 伊文思蓝标准曲线图

3.2 药物对小鼠皮肤毛细血管通透性亢进的影响，结果见表1

x ± s，n=10)

Table 1 Effects of drug induced by xylene in mice capillary permeability of the abdominal skin

表1 药物对二甲苯所致小鼠腹部皮肤毛细血管通透性亢进的影响结果表(

由表1 可知B 组(地奥司明)和C 组(香叶木素－7－O－β－D－葡萄糖苷)蓝斑深浅计分和染料渗出量均比空白对照组A 组(生理盐水)低，分别p ＜0.05，p ＜0.01，均有统计学意义。地奥司明抑制率为23.81%，香叶木素－7－O－β－D－葡萄糖苷抑制率为28.27%。说明地奥司明和香叶木素－7－O－β－D－葡萄糖苷可以抑制腹部皮肤毛细血管通透性亢进。

3.3 药物对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响结果见表2

表2 药物对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响结果表(x ± s，n=10)Table 2 Effects of drug in mice of ear swelling induced by xylene

由表3 可知II 组(地奥司明)和III 组(香叶木素－7－O－β－D－葡萄糖苷)平均肿胀度均比空白对照组A 组(生理盐水)低，且p ＜0.01，有统计学意义。地奥司明抑制率为45.31%，香叶木素－7－O－β－D－葡萄糖苷抑制率为52.73%. 说明地奥司明和香叶木素－7－O－β－D－葡萄糖苷能抑制炎症引起的小鼠耳肿胀。

4 讨论

本实验结果表明地奥司明和香叶木素－7－O－β－D－葡萄糖苷对二甲苯所致的腹部皮肤毛细血管通透性亢进均有抑制作用，抑制率分别为23.81%和28.27%.

水胀是继血管通透性增高、渗出后发生在炎症部位的一种变化，是急性炎症的标志性变化之一。根据药物对肿胀的抑制程度可以评价其抗炎活性。用致炎剂涂抹于小鼠耳部引起小鼠耳的肿胀，在一个较短的时间内测定用药组与对照组致炎耳与未致炎耳重量，计算并比较抑制率，确定抗炎效果。从实验结果可以看出，与生理盐水比较，地奥司明和香叶木素对二甲苯致小鼠耳肿胀均具有抑制作用，差异具有统计学意义，这表明两种药物对小鼠均有明显的抗炎作用。

本实验以地奥司明为阳性对照药，对经结构改造后获得的新化合物香叶木素－7－O－β－D－葡萄糖苷的抗炎作用进行对比研究。结果表明两者对炎症均有较好的抑制作用，且后者效果更优。这为药物的结构改造和新药研发提供了药理学依据。

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［7］马瑜红，李玲，欧阳静萍，等. 荔枝草抗炎作用的实验研究［J］. 时珍国医国药，2008，16(3):301－303.