正交法优化复方肿节风合剂提取工艺研究

袁荣献刘天翔曾 真梁 会

（1.贵阳中医学院第二附属医院，贵州贵阳550001；2.贵州省建筑医院，贵州贵阳550001）

正交法优化复方肿节风合剂提取工艺研究

袁荣献1刘天翔2曾 真1梁 会1

（1.贵阳中医学院第二附属医院，贵州贵阳550001；2.贵州省建筑医院，贵州贵阳550001）

目的：建立复方肿节风合剂制备工艺。方法：采用正交试验法，对复方肿节风合剂制备工艺进行研究，以其有效成分反丁烯二酸的提取量为考察指标，对浸泡时间、煎煮次数、溶剂用量、提取时间等主要影响因素进行考察，筛选最佳提取工艺。结果：最佳提取工艺参数为浸泡1h，第1次加8倍量水（扣除药材吸水），第2、3次加6倍量水，提取时间0.5h，煎煮3次。结论：本产品各项技术参数与工艺优选条件相同，且工艺条件稳定，说明工艺可行，适合批量生产。

复方肿节风合剂 提取工艺 反丁烯二酸 正交试验

复方肿节风合剂是由处方肿节风、鱼腥草等组成，是在贵阳中医学院第二附属医院五官科长期临床实践的经验方基础上，按照国家第6类中药新药的要求研制的新药，主治急慢性咽炎及扁桃体炎[1]。

原工艺生产可行，质量稳定，临床疗效确切，但原剂型为汤剂，不能起到局部理疗的作用，药液不能直接到达患处，因此，将该品改变剂型为合剂（使用前将其雾化），使用方便，起雾效果好。经口腔黏膜超声雾化给药后，既起到局部理疗的作用，又使药液直达患处以清热解毒、抗炎、消肿止痛、润喉利咽。

本实验在沿用原工艺路线基础上，以复方肿节风合剂君药肿节风有效成分反丁烯二酸的提取量指标对工艺进行评价，采用L9（34）正交试验，筛选最佳提取工艺条件，同时对主要有效成分进行定性、定量控制，提高了质量标准，以期获得更好的疗效。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1200高效液相色谱仪；梅特勒-托利多AL204电子分析天平；真空干燥箱；电热鼓风干燥箱；EM-202MS1微波真空干燥机。

1.2 试药 反丁烯二酸 （中国药品生物制品检定所，批号:1541-200001）；乙腈为色谱纯 （江苏汉邦）；娃哈哈纯净水；磷酸、乙醇均为分析纯；液相用水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 指标选择 为了使工艺能充分反映药物疗效，并结合本方药物组成的特点及功能主治，以本方中肿节风的有效成分反丁烯二酸的提取量为考察指标对工艺进行评价。

2.2 反丁烯二酸含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱为 Hypersil ODS2柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相乙腈-0.1%磷酸溶液（2∶98），检测波长210nm，柱温30℃，进样量5μL；流速1.0mL/min，色谱图见图1。

图1 对照品（a）、复方肿节风合剂（b）的HPLC图

2.2.2 供试品溶液的制备 按1/45处方量取药材39g，精密称定，加8倍量水煎煮3次，每次煎煮0.5h，药液用200目滤布过滤后，定容到100mL，摇匀，精密量取5mL置50mL量瓶中，加蒸馏水至刻度，定容，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，即得。

2.2.3 对照品溶液的制备 精密称取反丁烯二酸对照品适量，置10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，超声，摇匀，即得2.49μg/mL的对照品溶液。

2.3 提取工艺优化

2.3.1 单因素考察

2.3.1.1 药材吸水率的测定 按1/10处方量称取药材（鱼腥草除外）175g，加10倍量水浸泡，浸泡不同时间，滤过，称湿药重量（至药材重量不再增加为止），测定药材吸水率。结果见表1。可见药材吸水率为210%，为方便操作，以吸水率为200%计算，即药材吸水量为药材重的2.0倍。因此首次水提时应该多加2.0倍量的水。

表1 药材吸水率考察

2.3.1.2 浸泡时间的考察 称取鱼腥草药材8份，每份250g，剪碎，分别装入水蒸气蒸馏装置中，各自加入10倍量水，浸泡0、1、3、5h，于水沸后6h收集馏出液，将收集到的混合液倒入分液漏斗，加入一定量的石油醚萃取，减压旋转蒸发去溶剂，即可得深黄色精油。用电子天平称重精油，计算产率，结果见表2。单因素方差分析结果表明，P＜0.05，说明不同的浸泡时间挥发油提取率有显著性差异，而浸泡1、3、5h之间挥发油提取率无显著性差异，因此根据节约时间及成本的需要，选用浸泡时间为1h。

表2 鱼腥草浸泡时间考察

2.3.1.3 提取时间的考察 称取鱼腥草药材8份，每份250g，剪碎，分别装入水蒸气蒸馏装置中，各自加入10倍量水，浸泡1h，于水沸后2、4、6、8h收集馏出液，将收集到的混合液倒入分液漏斗，加入一定量的石油醚萃取，减压旋转蒸发去溶剂，即可得深黄色精油。用电子天平称重精油，计算产率，结果见表3。单因素方差分析结果表明，P＜0.05，说明不同的提取时间挥发油提取率有显著性差异；6h的提取率远大于2、4h，6h与8h之间提取率无显著性差异。因此，为节约成本起见，选用提取时间为6h。

表3 鱼腥草提取时间考察

2.3.2 正交试验设计 根据单因素考查结果，本试验以溶剂用量（A）、煎煮次数（B）、煎煮时间（C）为考察因素，每个因素3个水平，进行L9（34）正交试验，每次试验平行3份，筛选最佳工艺条件，因素水平见表4，正交试验结果见表5，主体间效应的检验见表6。从表6的结果分析得知，各因素作用主次为B＞A＞C，B因素有显著性差异，且因素B中B3＞B2＞B1，则应选择B3为水提工艺条件参数；其他A、C均无显著性差异，且A3＞A2＞A1，C3＞C1＞C2，但结合大生产实际，无显著性差异的A、C因素应选择A1、C1为水提工艺条件，故选择水提工艺A1B3C1，即煎煮3次，第1次加8倍量水（扣除药材吸水），第2、3次加6倍量水，每次提取0.5h。

表4 L9（34）正交试验设计因素水平

表5 煎煮工艺条件L9（34）正交试验安排及结果

表6 主体间效应的检验表（因变数：总固体物得率）

2.3.3 优化工艺的验证 对优选的工艺进行了验证试验，结果见表7，按条件A1B2C1进行3次重复试验。结果可见，验证试验结果与正交结果相一致，说明此水提工艺条件基本稳定。

表7 正交结果验证

3 结语

结合肿节风、鱼腥草等的有效成分、药理学的研究、临床应用及功能主治的特色，肿节风在本方中用水提取是合理的。

在沿用原工艺路线的基础上，为提高复方肿节风合剂药物利用率，将原剂型汤剂改变为合剂，同时，为了提高质量标准，本试验对原工艺进行验证、细化，对主要有效成分进行定性、定量控制，以期获得更好的疗效。本研究以复方肿节风合剂中反丁烯二酸的含量为考察指标，考察了最佳水提工艺。在单因素试验的基础上，选取溶剂倍量、提取时间、煎煮次数进行正交试验，通过正交试验优化，确定最佳提取工艺为浸泡1h，煎煮3次，第1次加8倍量水（扣除药材吸水），第2、3次加6倍量水，每次提取0.5h。本试验优化的工艺简便、重复性好，其各项技术参数与工艺优选条件相同，且工艺条件稳定，说明工艺可行，适合批量生产。

[1] 李松林，崔熙，乔传卓，等.五种金粟兰属植物挥发油成分及其抗真菌活性研究.中药材，1992，15（7）：28

R289.5

A

1672-397X（2015）06-0061-03

袁荣献（1972—），女，本科学历，副主任药剂师，主要从事药剂学研究。

曾真，硕士。yuanrongxianyr@163.com

2014-11-04

编辑：吴 宁

贵州省中医药管理局中医药、民族医药科学技术课题研究资助项目（QZYY2011-26）；贵阳中医学院科研项目（贵中医科院内[201204]号）