紫外分光光度法测定保健食品中总黄酮的含量

董丽荣 杨晓梅 李宗顺 白文莉

【摘要】目的：建立保健食品中总黄酮的含量测定方法。方法：以芦丁为对照品，以30%乙醇为溶剂，测定吸光度值。结果：芦丁对照品在2～30 μg/ml浓度范围内，浓度与吸光度呈良好的线性关系，r=1，平均加样回收率为9665%，RSD%为20%。结论：本法准确、快速、简便、环保，为测定保健食品中总黄酮的含量测定方法提供了参考。

【关键词】保健食品;总黄酮;含量测定;紫外分光光度法

【中图分类号】R286【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）07-0016-02

Content determination of total flavonoids from health-care food by UV methodDong Lirong1Yang Xiaomei2Li Zongshun2Bai Wengli1

1Institute For Food and Drug Control，Kunming， Yunnan province， 650032; 2Institute For Food and Drug Control， Yuxi， Yunnan province， 653100Abstract：Objective： to set up the method of determining total flavonoids in health-care food by UV method. Method： The absorbance was determinated with 30%ETOH， Rutin was used as standard abstance. Result： The calibration curve was linear at the ranges of 2～30 μg.ml-1 for Rutin standard abstance（r=1）， the average recovery was 96.65%， RSD was 2%. Conclusion： The method was accurate with good reproducibility and can be used as an environmentally， rapid， simple analysis for determination of total flavonoids from health-care food.

Keywords：health-care food;total flavonoids;content determination;UV method

近年來，随着自由基生命科学的进展，黄酮类化合物不仅是一种活性物质，还是重要的营养物质，其药理和营养性都得到了国内外的广泛深入研究和临床试验[1]。作为一种新运用的营养素，黄酮类化合物对人体具有重要的生理保健功效，并体现出了如下功能：消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、活化大脑及其它脏器细胞、抗脂肪氧化、抗衰老等[2、3]。目前市场上有较多以黄酮类为功效成分的保健食品，总黄酮也多作为主要的质量控制指标。

1仪器与试剂

UV-260型紫外可见分光光度计（日本岛津）;AEL-200型电子天平（日本岛津）;BP211D-OCE型电子天平（德国赛多利斯）。

芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号：10080-200707;含量以92.5%计）;无水乙醇（分析纯，利安隆博华医药化学有限公司）。

2方法与结果

21检测波长的选择[4]取芦丁对照品溶液（15 μg/ml）在200～600 nm波长内扫描，结果表明：在360nm处，对照品溶液有最大吸收峰，故测定波长选择360 nm。取“22项”下样品溶液在200～600 nm波长内扫描，结果表明：在360 nm处有最大吸收峰。

22样品溶液的制备取样品约05g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇100ml，密塞，称定重量，摇匀，超声处理（功率250 W，频率40 KHZ）30分钟，放冷，用30%乙醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，过045μm微孔滤膜，即得。试验表明微孔滤膜过滤能除去样品杂质，而对指标性成分没有影响（对照品溶液045μm微孔滤膜过滤后在360nm吸光度无明显变化）。结果见表1。

表1对照品溶液过滤前后吸光度变化情况

名称过滤前（A）过滤后（A）15 ug/ml 芦丁对照品0458045723线性关系的考察

231储备液的制备精密称定芦丁对照品为108mg，置于200ml量瓶中，加入30%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。

232标准曲线的建立分别精密吸取“231项”储备液04、10、20、30、40、50、60 ml于10 ml量瓶中，加入30%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。取30%乙醇为空白对照，在360 nm波长处测定吸光度，以吸光度A值与浓度C值线性回归，得曲线方程为：C=32078A+0003，r=1。结果表明，芦丁在2～30μg/ml浓度范围内，呈良好的线性关系。

233精密度试验取同一浓度芦丁对照品溶液，连续测定6次，测定吸光度，RSD%为01%。

234稳定性考察取纽斯葆牌葛维片（批号为BE263-A）14片，去包衣，研细，取约05 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇100 ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250 W，频率40 KHZ）30分钟，放冷，用30%乙醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，过045μm微孔滤膜，即得。分别于0、2、4、8、12、24h用紫外-可见分光光度计测定其吸收度（360nm），测定结果RSD为07%，结果表明样品溶液在24h内稳定。

235重复性考察取纽斯葆牌葛维片（批号为BE263-A）20片，去包衣，研细，精密称取6份，每份约05 g，样品处理方法同“234项”，分别测定其吸收度，测定结果RSD为12%，结果表明，样品重复性良好。

236回收率试验精密称取纽斯葆牌葛维片（批号为BE263-A）粉末9份，每份约025 g，分别精密加入适量的芦丁对照品溶液，按照“224项”操作，分别测定吸光度，计算回收率，结果见表2。

表2加样回收率测定结果

编号取样量

（g）样品含

量（mg）加入量

（mg）测得量

（mg）回收率

（%）平均回

收率（%）标准差RSD

（%）1025150577804496102309902

9665

20025260580304496101809735025360582604496101309573202525058010549411049955202511057690549411048960902535058240549411331100243025320581706993124709514025230579806993124119457025220579406993125239622

表3样品测定结果

样品名称批号含量（mg/g）国珍牌松花伴侣片2011-09-10 372259九巴乐含片11010514800 怡眠牌三七胶囊2011060136650 一轻松牌舒解片A97030124657纽斯葆牌葛维片BE263-A24709德惠牌绞股蓝泽泻茶1109102311173金奥力牌清宁软胶囊2010091097908百合康牌葛根提取物软囊20110529129900 百合康牌葛根提取物软囊20110505101916百合康牌葛根提取物软囊2011032544703 德惠牌绞股蓝泽泻茶2010062188513力克保健液2011062200558（mg/ml）百邦葛靈胶囊20110901130925常青春牌睡得安胶囊11090529-101208425 国珍牌松花伴侣片2011-08-15 277057星久牌力尊胶囊2011080392756 同仁堂牌同仁益健茶110701 AJ363558

24样品含量测定结果取17批市售含黄酮的样品，按上述方法测定，结果见表3。

3讨论

保健食品中总黄酮的含量测定检验方法多采用聚酰胺小柱脱色除杂质，试验操作表明精密度难以控制，且试验中用到强致癌物苯作洗脱极[5]，不利于环境保护和操作者身体健康。本实验样品提取采用30%乙醇为溶剂[6]，回收率试验表明样品提取完全，且不使用苯、甲醇等具有毒性的有机溶剂，更环保和健康。

样品超声提取，经045μm微孔滤膜过滤，直接测定，快速、简便、精密度良好，对照品溶液经微孔滤膜过滤前后，吸收度不变，表明过滤前后指标成分没有损失。样品溶液过滤前后吸收度有明显变化，表明经微孔滤膜过滤，使样品更纯净，假阳性干扰减小，与上聚酰胺小柱除杂质效果相同，而精密度明显优于上柱。参考文献

[1] 龚盛昭.黄酮类化合物保健食品大有开发价值[J].广州食品工业科技，18（1）：63-64.

[2] 谭秦丽，刘冬，李玉宝，等.总黄酮化合物药理研究进展[J].安徽中医学院学报，2009，28（3）：62-64.

[3] 田永利，刘志宗，葛林，等.总黄酮类化合物含量测定方法和药理作用研究进展[J].河北医药，2010，32（8）：2095-2096.

[4] 肖香兰，罗仁才，张楠.保健食品中总黄酮的测定方法[J].中国卫生检验杂志，2007，17（6）：1037-1038.

[5] 中华人民共和国卫生部，保健食品检验与评价技术规范[M].中华人民共和国卫生部，2003.

[6] 董宇.黄酮类化合物的提取方法研究及展望[J].人参研究，2009，22（4）：33-35.

（收稿日期：20140214）