生鳖甲与醋鳖甲抗肝纤维化有效部位的HPCE指纹图谱分析

陈凯

【摘要】目的：分析生鳖甲与醋鳖甲抗肝纤维化有效物质部位HPCE指纹图谱。方法：通过毛细管区电泳法，57cm×75μm的熔融未涂层石英毛细管，100mmol/L三氰甲基氨基甲烷-20mmol/L磷酸氢二钠的运行缓冲液，18KV的分离电压，254nm的检测波长，20℃的柱温，分别构建10批醋鳖甲与生鳖甲有效物质部位HPCE指纹图谱，以此进行相关对比分析。结果：17个生鳖甲指纹图谱共有峰，094以上的HPCE图谱相似度;19个醋鳖甲指纹图谱共有峰，0.93以上的HPCE图谱相似度;但对照10批醋鳖甲与生鳖甲指纹图谱，两批相似度下降，为086-093。此外，10批生鳖甲与醋鳖甲指纹图谱相似度也下降，为086～092。结论：炮制鳖甲前后含量与化学成分都会发生变化，而且在炮制后会有新有效成分产生。

【关键词】 鳖甲，指纹图谱，HPCE，有效成分

【中图分类号】R2841【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）01-0009-01

鳖甲为鳖科动物鳖的背甲，具有软坚散结、滋阴潜阳以及除蒸退热功效，常用于治疗肝纤维化，入药一般为醋制鳖甲[1]。中医认为，生鳖甲具有非常强的潜阳熄风与养阴清热功效，主要用于虚风内动、内伤虚热或者热病伤阴等病症。

1实验材料

5000型BeckmanP/AsystemHPCE仪;FD-1A-50冷冻干燥机;78-1型磁力加热搅拌器;KQ-250B超声波清洗器。水为双蒸水，鳖甲药材来自浙江衢化医院，其中所选10批醋鳖甲是根据《中华药典》由10批生鳖甲炮制而成。

2方法与结果

21供试品溶液的制备称取25g生鳖甲粉，加水200ml进行20min的超声提取，抽滤，所留残渣加10ml水，超声10min，合并滤液，抽滤，冷冻，取冻干粉，加入少量水进行溶解，并放在透析膜中，200ml的纯水膜外溶液，2次透析，5h/次，合并膜外溶液，同时冷冻干燥。对50mg/ml冻干粉水溶液进行精密称取，在通过022μm的滤膜进行过滤，根据鳖甲供试品相同炮制方法，对醋鳖甲供试品溶液进行炮制。

22有效组分对照组与对照品溶液的制备从本实验中鳖甲有效抗肝纤维化物质中所分离出的活性五肽，进行01mg/ml浓度水溶液的配制，并将其视为对照品溶液;同时把实验中药理筛选与经柱色谱分离出的活性组酚酞，进行01mg/ml浓度水溶液的配制，并将其视为有效组分对照组溶液，对两溶液进行分析对比。

23色谱条件57cm×75μm的熔融未涂层石英毛细管，49cm的有效长度，100mmol/L优级纯三氰甲基氨基甲烷-20mmol/L磷酸氢二钠的运行缓冲液，18KV的分离电压，254nm的检测波长，20℃的柱温[2]。

24指纹图谱的测定

241生鳖甲有效物质部位HPCE指纹图谱通过毛细管区电泳法对供试品溶液进行制备，并根据以上色谱条件对生物鳖有效物质部位HPCE进行测定，对电泳图进行30min的记录。对17个共有峰进行标定，指纹图谱中峰面积较大与较稳定的14号峰属于参照峰s，对各共有峰保留时间和相对峰面积进行测定。结果发现，17个生鳖甲指纹图谱共有峰，存在094以上的HPCE图谱相似度。

242醋鳖甲有效物质部位HPCE指纹图谱  采用相同方法对供试品溶液进行制备，并根据以上色谱条件对生物鳖有效物质部位HPCE进行测定，对电泳图进行30min的记录。对19个共有峰进行标定，指纹图谱中峰面积较大与较稳定的15号峰属于参照峰s，对各共有峰保留时间和相对峰面积进行测定。结果发现，19个生鳖甲指纹图谱共有峰，存在093以上的HPCE图谱相似度。

对照10批醋鳖甲与生鳖甲指纹图谱，两批相似度下降，为086-093。此外，对照10批生鳖甲与醋鳖甲指纹图谱，两批相似度也下降，为086-092。由此表明，鳖甲醋制前后，其含量与化学成分存在很大差异性。

3讨论

实验对炮制鳖甲前后的HPCE指纹图谱进行对比与分析发现，生鳖甲与醋鳖甲抗肝纤维化有效物质部位HPCE指纹图谱峰面积与指纹峰数量都有非常大的差异性，而且醋鳖甲指纹峰要比生鳖甲多，由此表明，醋鳖甲中含有新活性五肽HGRFG指纹峰，从而阐释了醋鳖甲抗杆纤维化要比生鳖甲效果好，同时也为醋鳖甲治疗肝纤维化提供有效科学依据，为鳖甲醋法炮制机理进行深入探讨奠定良好基础。

参考文献

[1] 高建蓉，张赤志，邵志华，等.鳖甲对肝星状细胞增殖影响的研究[J].实用医学杂志，2007，23（11）：1618-1620.

[2]陈进文，高建蓉，王光忠，等.鳖甲抗肝纤维化有效物质部位高效毛细管电泳指纹图谱研究[J].中药材，2009，32（6）：848-851.

（收稿日期：20131115）