弥漫大B细胞淋巴瘤患者MYC/BCL-2共表达情况及其临床意义分析

李海丽，肖建波，王轶楠，王 钧，刘金慧

·诊治分析·

弥漫大B细胞淋巴瘤患者MYC/BCL-2共表达情况及其临床意义分析

李海丽，肖建波，王轶楠，王 钧，刘金慧

目的 分析弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者MYC/BCL-2共表达情况及其临床意义。方法 选取2012年1月—2015年1月唐山市人民医院收治的首诊DLBCL患者30例，采用免疫组化法检测患者MYC和BCL-2表达情况，并分析不同临床特征DLBCL患者MYC/BCL-2共表达情况。结果 MYC阳性表达率为70.0%，BCL-2阳性表达率为53.3%，MYC/BCL-2共阳性表达率为30.0%。不同性别、临床分期、国际预后指数(IPI)评分及乳酸脱氢酶(LDH)水平DLBCL患者间MYC/BCL-2共阳性表达率比较，差异无统计学意义(P>0.05)；结外受侵、非生发中心型(non-GCB)、未完全缓解DLBCL患者MYC/BCL-2共阳性表达率分别高于非结外受侵、生发中心型(GCB)、完全缓解患者(P<0.05)。结论 DLBCL患者MYC/BCL-2共阳性表达率较高，且常见于non-GCB、结外受侵、预后不良的DLBCL患者。

淋巴瘤，大B细胞，弥漫性；基因，myc；基因，BCL-2；临床特征

李海丽，肖建波，王轶楠，等.弥漫大B细胞淋巴瘤患者MYC/BCL-2共表达情况及其临床意义分析[J].实用心脑肺血管病杂志，2015，23(11)：105-107.[www.syxnf.net]

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弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma，DLBCL)是一组异质性极强的疾病，其临床预后差异较大，R-CHOP方案是目前DLBCL的标准治疗方案[1-2]，但仍有约40%的患者短期内复发、死亡。近年研究发现，“双重打击”淋巴瘤(double-hit lymphoma，DHL)是DLBCL的一个独特亚型，其伴有MYC和BCL-2染色体易位，且预后极差[3-5]。目前，临床上基因分子水平检测尚未被广泛推广，细胞遗传学需要通过蛋白质形式表现。为此，本研究拟通过免疫组化法检测DLBCL患者MYC和BCL-2共表达情况，并分析其临床意义，旨在为DHL的诊治提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012年1月—2015年1月唐山市人民医院收治的首诊DLBCL患者30例，均符合2008年世界卫生组织(WHO)制定的DLBCL诊断标准。其中男15例，女15例；年龄17～68岁，中位年龄49岁；临床分期：Ⅰ～Ⅱ期13例，Ⅲ～Ⅳ期17例；淋巴瘤国际预后指数(intemational pmgnostic index，IPI)评分：0～2分19例，3～5分11例；乳酸脱氢酶(LDH)正常(0～240 U/L)13例，LDH异常(>240 U/L)17例；结外受侵5例；细胞来源：生发中心型(GCB)17例，非生发中心型(non-GCB)13例；HIV均为阴性。血常规、肝肾功能、心电图等检查均正常。

1.2 治疗方法 30例患者均采用R-CHOP方案化疗4～6个周期，所有患者有可评价病灶，无化疗禁忌证。化疗后完全缓解22例，未完全缓解8例。完全缓解评价标准：(1)临床和影像学肿瘤证据、治疗前肿瘤相关症状完全消失，非霍奇金淋巴瘤(NHL)引起的异常生化指标(如LDH)恢复正常；(2)所有淋巴结及肿块缩小至规定范围(即治疗前最大横径>1.5 cm者缩小至≤1.5 cm；治疗前最大横径为1.1～1.5 cm者缩小至≤1.0 cm；或两个最大垂直径乘积缩小>75%)；(3)治疗前CT扫描发现脾增大，治疗后脾增大回缩且体检不能扪及(由于准确评估肝、脾大小有困难，因此未规定其正常范围)，治疗前影像学监测到的其他器官肿块治疗后应消失，治疗前其他器官(如肝、肾)弥漫增大如考虑为淋巴瘤侵犯的，治疗后缩小；(4)如治疗前侵犯骨髓，需经重复同样部位穿刺活检证实病变已消失(要求取得足够骨髓活检样本得出结论，如使用≥20 mm的活检针芯)。

1.3 免疫组化法及阳性结果判定 所有患者取材良好，组织蜡块标本经10%中性甲醛溶液固定，常规脱水，石蜡包埋，4 μm厚切片，常规脱蜡水化；0.3%过氧化氢(H2O2)阻断内源性过氧化物酶，10%小牛血清封闭切片，滴加一抗，4 ℃过夜。PBS洗后滴加广谱生物素化二抗(1∶200)，SP复合物(1∶200)，DAB显色，苏木素复染细胞核，脱水，透明，封片。分别设相应阳性、阴性、空白对照。MYC蛋白质染色在细胞核，BCL-2蛋白质染色在细胞质，棕黄色细小颗粒为阳性。在高倍镜(×400)下对每个病变组织随机选10个视野进行阳性细胞计数，根据染色强度及范围，MYC阳性细胞数≥40%且BCL-2阳性细胞数≥70%为MYC/BCL-2共表达，所有病理标本切片用PBS液代替一抗作阴性对照。

1.4 观察指标 观察MYC、BCL-2在DLBCL患者中表达情况，并分析不同临床特征DLBCL患者MYC/BCL-2共阳性表达情况。

1.5 统计学方法 采用SPSS 13.0统计学软件进行数据处理，计数资料采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 DLBCL患者MYC、BCL-2表达情况 MYC阳性表达率为70.0%(21/30)，BCL-2阳性表达率为53.3%(16/30)，MYC/BCL-2共阳性表达率为30.0%(9/30)。

2.2 不同临床特征DLBCL患者MYC/BCL-2共表达情况比较 不同性别、临床分期、IPI评分及LDH水平DLBCL患者间MYC/BCL-2共阳性表达率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结外受侵、non-GCB型、未完全缓解DLBCL患者MYC/BCL-2共阳性表达率分别高于非结外受侵、GCB型、完全缓解患者，差异有统计学意义(P<0.05，见表1)。

3 讨论

MYC基因是位于8q24的原癌基因，其是一种转录因子，可参与许多重要细胞功能，且对细胞增殖、生长、分化、代谢及促进新生血管形成等发挥重要作用[6]。MYC基因重t(8;14)(q24;q32)是伯基特淋巴瘤发生的一个特点，但近年来有研究发现，利用荧光原位杂交技术(FISH)检测到5%～15%的DLBCL患者MYC重排(MYC-R)，且与不良预后相关[7]。近年来有研究发现，DLBCL发生的一个重要危险因素是MYC易位，特别是其与BCL-2易位相连接时临床预后差、临床过程呈侵袭性、中位生存期为0.2～1.5年[8]。DHL患者的临床特征如下：中位年龄70岁左右、临床分期为晚期、IPI评分中高危或高危、LDH水平增高、结外受侵(包括中枢神经系统受累)[8]。Mossafa等[9]研究发现，DLBCL患者出现cMYC基因扩增，MYC基因上调和MYC蛋白质高表达具有很高的一致性，因此，可采用免疫组化法代替FISH检测MYC基因表达情况。Johnson等[10]和Green等[11]研究均证实，免疫组化法检测MYC(阳性>40%)和BCL-2(阳性>50%)与基因表达式编程(GEP)检测方法的一致性高达90%以上，MYC和BCL-2蛋白同时过表达时称为双表达淋巴瘤(double expression lymphoma，DEL)，且其采用CHOP和R-CHOP方案治疗的预后较差[10-12]。Green等[11]研究显示，免疫组化法检测MYC(阳性>40%)/ BCL-2(阳性>70%)共阳性表达患者经初始R-CHOP方案治疗后完全缓解率低，3年生存期及无进展生存期均短于非共阳性表达患者。

表1 不同临床特征DLBCL患者MYC/BCL-2共表达情况比较(例)

Table 1 Comparison of coexpression of MYC/BCL-2 in DLBCL patients with different clinical features

临床特征例数阳性阴性χ2值P值性别0.6000.439 男1569 女15411临床分期(期)0.2710.602 Ⅰ～Ⅱ1358 Ⅲ～Ⅳ17512IPI评分(分)0.0720.789 0～219613 3～51147LDH1.0860.297 正常13310 异常17710结外受侵5.8800.015 否25619 是541细胞分型4.3440.037 GCB17314 non-GCB1376临床疗效4.1760.041 完全缓解22517 未完全缓解853

注：IPI=国际预后指数，LDH=乳酸脱氢酶，GCB=生发中心型，non-GCB=非生发中心型

本研究回顾性分析30例DLBCL患者的临床资料，结果显示30例患者中MYC/BCL-2共阳性表达率为30.0%，且其常见于non-GCB亚型患者，与其他文献报道类似[13-14]。结外受侵DLBCL患者MYC/BCL-2共阳性表达发生率高，占结外受侵80%，但本研究中结外受侵患者仅5例，需扩大样本量进一步证实。有临床研究显示，结外受侵、non-GCB亚型是DLBCL患者预后不良的危险因素，进而推测MYC/BCL-2共阳性表达DLBCL患者预后可能较差。R-CHOP方案是目前DLBCL的标准治疗方案，本研究结果显示，经R-CHOP方案治疗后完全缓解的DLBCL患者MYC/BCL-2共阳性表达率低于未完全缓解者，与Johnson等[10]研究结果相一致。

综上所述，DLBCL患者MYC/BCL-2共阳性表达率较高，且MYC/BCL-2共阳性表达常见于non-GCB、结外受侵、预后不良的DLBCL患者。

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(本文编辑：谢武英)

Coexpression and Clinical Significance of MYC/BCL-2 in Patients with Diffuse Large B Cell Lymphoma

LIHai-li，XIAOJian-bo，WANGYi-nan，etal.DepartmentofChemoradiotherapy，People′sHospitalofTangshan，Tangshan063001，China

Objective To investigate the coexpression and clinical significance of MYC/BCL-2 in patients with diffuse large B cell lymphoma.Methods A total of first-diagnosis patients with diffuse large B cell lymphoma were selected in the People′s Hospital of Tangshan from January 2012 to January 2015，immunohistochemical method was used to detect the expressions of MYC and BCL-2，and coexpression rate of MYC/BCL-2 was compared in patients with different clinical features.Results The positive expression rate of MYC was 70.0%，of BCL-2 was 53.3%，and the positive coexpression rate of MYC/BCL-2 was 30.0%.No statistically significant different differences of positive coexpression rate of MYC/BCL-2 was found in patients with different gender，clinical staging，IPI scores or LDH levels(P>0.05)；positive coexpression rate of MYC/BCL-2 of patients with lymphatic metastasis，non-germinal center B cell lymphoma and without complete remission was statistically significantly higher than that of patients without lymphatic metastasis，with germinal center B cell lymphoma and with complete remission，respectively(P<0.05).Conclusion The positive coexpression rate of MYC/BCL-2 is relatively high in patients with diffuse large B cell lymphoma，and it is commonly expressed in patients with lymphatic metastasis，non-germinal center B cell lymphoma and without complete remission.

Lymphoma，large B-cell，diffuse；Genes，myc；Genes，BCL-2；Clinical characteristics

063001河北省唐山市人民医院放化科

R 733.4

B

10.3969/j.issn.1008-5971.2015.11.031

2015-08-04；

2015-11-02)