原发性干燥综合征并发非霍奇金淋巴瘤患者唇腺组织BCL—6基因重排的检测及意义

杨敏+梁胜翔+李宝贞+石宇红+许佳++++++莫汉有

[摘要] 目的 探讨原发性干燥综合征（pSS）并发非霍奇金淋巴瘤（NHL）患者唇腺组织BCL-6基因重排的临床病理意义。 方法 将研究对象分为pSS并发NHL组（16例），pSS未并发NHL组（20例），NHL未并发pSS组（阳性对照组，20例），健康人群组（阴性对照组，20例），采用荧光原位杂交技术检测4组研究对象唇腺组织BCL-6基因的重排情况。 结果 pSS并发NHL组的BCL-6基因重排发生率为56.2%（9/16），pSS未并发NHL组的BCL-6基因重排发生率为20.0%（4/20），NHL未并发pSS组的BCL-6基因重排发生率为50.0%（10/20），正常人群组的BCL-6基因重排发生率为5.0%（1/20）。4组BCL-6基因重排发生率比较差异有统计学意义（χ2=84.225，P=0.000）。pSS并发NHL组与NHL未并发pSS组BCL-6基因重排发生率比较差异无统计学意义（χ2=2.251，P=0.139）。pSS并发NHL组BCL-6基因重排发生率显著高于pSS未并发NHL组（χ2=78.658，P=0.000）及健康人群组（χ2=88.391，P=0.000）。 结论 BCL-6基因重排与pSS并发NHL相关，BCL-6基因重排可作为预测pSS并发NHL的生物学参考指标。

[关键词] 原发性干燥综合征；非霍奇金淋巴瘤；BCL-6基因；基因重排；荧光原位杂交

[中图分类号] R593 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）12（a）-0047-03

原发性干燥综合征（primary Sjgren syndrome，pSS）是一种由淋巴细胞介导的主要累及外分泌腺的全身性自身免疫病。近年研究发现，pSS与肿瘤关系密切，尤其非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin lymphoma，NHL）多见，文献报道其发生淋巴瘤概率较常人高出44倍，以弥漫性大B细胞淋巴瘤（diffuse-large B-cell lymphoma，DLBCL）为主[1]。pSS并发NHL的发病机制目前仍不清楚，相关研究[2-4]表明，BCL-6基因重排是DLBCL发生中一个主要转化事件。目前，关于pSS并发NHL中BCL-6基因重排的研究未见报道。本研究拟用荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）技术在pSS合并NHL患者唇腺组织中行BCL-6基因重排检测，探讨BCL-6基因重排的临床病理意义，以期发现pSS合并淋巴瘤的生物学预测指标，为量化pSS患者恶变潜能并采取早期干预治疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2010年6月～2012年6月76例在本院住院患者作为研究对象，将其分为4组，A组（pSS并发NHL患者），来自风湿免疫科及肿瘤科，16例，其中男性4例，女性12例，年龄18～69岁，平均（52.7±5.9）岁；B组（pSS未并发NHL患者），来自风湿免疫科，20例，其中男性5例，女性15例，年龄18～70岁，平均（53.5±5.4）岁；C组（NHL未并发pSS患者），来自肿瘤科，20例，其中男性6例，女性14例，年龄18～71岁，平均（51.3±6.9）岁；D组（下唇外伤的健康人群），来自急诊科，20例，其中男性5例，女性15例，年龄18～71岁，平均（53.3±6.1）岁。所有研究对象的唇腺活检标本均由病理科制作，4组患者的年龄、性别比较差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 纳入标准

①pSS患者诊断符合2002年pSS国际诊断分类标准[5]；②年龄18～71岁，性别不限，分组时遵照性别与年龄相匹配原则，病例资料完整；③选择的pSS患者，术前均未接受激素及免疫抑制剂治疗，所有病例均请口腔科取唇腺活检标本，并经病理科确诊符合pSS患者唇腺病理标准；④所有诊断NHL患者术前均未做放疗或化疗，均由两位高年资经验丰富的病理医师进行组织形态学和免疫组织化学分析，组织类型的确定按照2001年版WHO淋巴瘤分类标准[6]；⑤医院伦理委员会批准；⑥知情同意。

1.3 排除标准

①继发因素所致pSS；②应排除以下疾病：类肉瘤病，发病早于pSS的淋巴瘤、艾滋病、乙型或丙型肝炎、原发性纤维肌痛以及其他已知可引起自主神经元病变、干燥性角膜炎或唾液腺肿大的疾病；③未通过医院伦理委员会批准。

1.4 FISH方法

BCL-6基因双色探针（32-191016）购自Vysis公司，操作步骤参见文献[7]。结果分析：未发生BCL-6基因重排的细胞显示有两个橘红色和绿色的融合信号，代表一对BCL-6等位基因；发生BCL-6基因重排的细胞则显示有一个橘红色和绿色的融合信号，另外有一个绿色和一个橘红色分离的信号。

1.5 统计学方法

采用SPSS 13.0统计软件对数据进行处理，计数资料采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

4组BCL-6基因重排发生率比较差异有统计学意义（χ2=84.225，P=0.000）；A组BCL-6基因重排发生率显著高于B组（χ2=78.658，P=0.000）和D组（χ2=88.391，P=0.000）；A组与C组BCL-6基因重排发生率比较差异无统计学意义（χ2=2.251，P=0.139）（表1）。

3 讨论

pSS容易并发淋巴瘤是本病的特点之一，发生淋巴瘤患者以DLBCL最常见，约占成人NHL的30%～59%[8]。本课题组前期对628例pSS患者进行了长达12年的随访研究，其中有16例患者并发NHL，发生率为2.55%[9]，而国外文献报道pSS患者并发NHL的发生率为7.5%[10]。目前，为何部分pSS患者病程极长而没有发展至淋巴瘤，而部分pSS患者却极快发展为淋巴瘤一直困扰着临床医生。

已有研究表明，NHL的发生是由于单个细胞中发生多基因病变的进行性累积而成，最常见的基因改变类型是染色体易位，可见于>90%的NHL中，染色体易位导致一些癌基因发生重排，在NHL的发病机制上可能起重要作用[11]。Hans等[12]在进行淋巴瘤分子分类的研究时发现，位于人类染色体的3q27的BCL-6基因异常与DLBCL发生及预后关系密切。Tibiletti等[13]的研究亦发现，BCL-6基因断裂重排是NHL最常见、特征性的染色体改变，主要存在于B细胞性NHL中的DLBCL和滤泡性淋巴瘤（FL）中，其重排的发生率分别占30%～40%和6%～14%，由此可见，BCL-6是与NHL特别是与DLBCL和FL关系密切的基因。

本研究利用FISH技术对4组研究对象唇腺组织BCL-6基因的重排情况进行检测，结果发现，16例pSS合并NHL患者唇腺组织BCL-6基因重排发生率为56.2%（9/16），显著高于pSS未并发NHL（20.0%）及健康人群（5.0%），差异有统计学意义。在NHL未并发pSS组中BCL-6基因重排的发生率为50.0%（10/20），与pSS合并NHL组患者比较差异无统计学意义，这提示BCL-6基因重排与pSS并发NHL高度相关。国内同类研究表明，约60%的DLBCL病例有BCL-6基因重排，且其中的大多数均可见BCL-6蛋白过表达，提示BCL-6基因重排导致的BCL-6蛋白表达上调参与了部分DLBCL的发病过程[14]。研究发现，BCL-6蛋白在pSS合并NHL患者中的阳性率高达81.8%，显著高于健康对照组和pSS患者[15]，与本研究结果相符。

总之，研究BCL-6基因的异常对NHL发生发展分子机制的认识、临床预后的判断以及治疗的监控等都具有重要的价值。BCL-6基因重排与pSS患者并发NHL密切相关，BCL-6基因重排可作为预测pSS并发NHL的生物学参考指标之一。由于本研究仅是对pSS并发NHL患者唇腺组织BCL-6基因的重排进行单中心的初步探讨，病例样本量少，尚需开展多中心、大样本、前瞻性临床研究来进一步验证。

[参考文献]

[1] Ekstrm Smedby K，Vajdic CM，Falster M，et al.Autoimmune disorders and risk of non-Hodgkin lymphoma subtypes：a pooled analysis within the InterLymph Consortium[J].Blood，2008，111（8）：4029-4038.

[2] Youinou P，Saraux A，Pers JO.B-Lymphocytes govern the pathogenesis of Sjgren′s syndrome[J].Curr Pharm Biotechnol，2012，13（10）：2071-2077.

[3] Dent AL，Shaffer AL，Yu X，et al.Control of inflammation，cytokine expression，and germinal center formation by BCL-6[J].Science，1997，276（5312）：589-592.

[4] Tamura A，Miura I，Iida S，et al.Interphase detection of immunoglobulin heavy chain gene translocations with specific oncogene loci in 173 patinets with B-cell lymphoma[J].Cancer Genet Cytogenet，2001，129（1）：1-9.

[5] 赵岩，贾宁，魏丽，等.原发性干燥综合症2002年国际分类（诊断）标准的临床验证[J].中华风湿病学杂志，2003，7（9）：537.

[6] Jaffy ES，Harris NL，Stein H，et al.World Health Organization classification of tumours.Pathology and genetics of tumors of haematopoietic and lymphoid tissues[M].Lyon：IARC Press，2001：171-181.

[7] 王桂秋，文亦磊，王华，等.荧光原位杂交技术在淋巴瘤诊断中的应用[J].广西医科大学学报，2008，25（6）：939-940.

[8] Voulgarelis M，Skopouli FN.Clinical，immunologic，and molecular factors predicting lymphoma development in Sjgren′s syndrome patients[J].Clin Rev Allergy Immunol，2007，32（3）：265-274.

[9] 杨敏，莫汉有，李宝贞，等.原发性干燥综合征合并非霍奇金淋巴瘤16例临床特征分析[J].重庆医学，2012，41（30）：3149-3151.

[10] Baimpa E，Dahabreh IJ，Voulgarelis M，et al.Hematologic manifestations and predictors of lymphoma development in primary Sjgren′s syndrome：clinical and pathophysiologic aspects[J].Medicine，2009，88（5）：284-293.

[11] Lossos IS，Morgensztem D.Prognostic biomarkers in diffuse large B-cell lymphoma[J].J Clin Oncol，2006，24（6）：995-1007.

[12] Hans CP，Weisenburger DD，Greiner TC，et al.Confirmation of the molecular classification of diffuse large B-cell lymphoma by immunohistochemistry using a tissue microarray[J].Blood，2004，103（1）：275-282.

[13] Tibiletti MG，Martin V，Bernasconi B，et al.BCL2，BCL6，MYC，MALT1，and BCL10 rearrangements in nodal diffuse large B-cell lymphomas：a multicenter evaluation of a new set of fluorescent in situ hybridization probes and correlation with clinical outcome[J].Hum Pathol，2009，40（5）：645-652.

[14] 徐方平，刘艳辉，骆新兰，等.弥漫性大B细胞淋巴瘤各分子亚型中的bcl-6基因重排与蛋白表达的临床意义[J].中华病理学杂志，2008，37（6）：371-376.

[15] 莫汉有，周润华，王晓桃，等.干燥综合征患者唇腺p53、bcl-6及PCNA表达与其发生非霍奇金淋巴瘤的相关性研究[J].重庆医学，2006，35（21）：1954-1956.

（收稿日期：2014-10-30 本文编辑：李亚聪）

已有研究表明，NHL的发生是由于单个细胞中发生多基因病变的进行性累积而成，最常见的基因改变类型是染色体易位，可见于>90%的NHL中，染色体易位导致一些癌基因发生重排，在NHL的发病机制上可能起重要作用[11]。Hans等[12]在进行淋巴瘤分子分类的研究时发现，位于人类染色体的3q27的BCL-6基因异常与DLBCL发生及预后关系密切。Tibiletti等[13]的研究亦发现，BCL-6基因断裂重排是NHL最常见、特征性的染色体改变，主要存在于B细胞性NHL中的DLBCL和滤泡性淋巴瘤（FL）中，其重排的发生率分别占30%～40%和6%～14%，由此可见，BCL-6是与NHL特别是与DLBCL和FL关系密切的基因。

本研究利用FISH技术对4组研究对象唇腺组织BCL-6基因的重排情况进行检测，结果发现，16例pSS合并NHL患者唇腺组织BCL-6基因重排发生率为56.2%（9/16），显著高于pSS未并发NHL（20.0%）及健康人群（5.0%），差异有统计学意义。在NHL未并发pSS组中BCL-6基因重排的发生率为50.0%（10/20），与pSS合并NHL组患者比较差异无统计学意义，这提示BCL-6基因重排与pSS并发NHL高度相关。国内同类研究表明，约60%的DLBCL病例有BCL-6基因重排，且其中的大多数均可见BCL-6蛋白过表达，提示BCL-6基因重排导致的BCL-6蛋白表达上调参与了部分DLBCL的发病过程[14]。研究发现，BCL-6蛋白在pSS合并NHL患者中的阳性率高达81.8%，显著高于健康对照组和pSS患者[15]，与本研究结果相符。

总之，研究BCL-6基因的异常对NHL发生发展分子机制的认识、临床预后的判断以及治疗的监控等都具有重要的价值。BCL-6基因重排与pSS患者并发NHL密切相关，BCL-6基因重排可作为预测pSS并发NHL的生物学参考指标之一。由于本研究仅是对pSS并发NHL患者唇腺组织BCL-6基因的重排进行单中心的初步探讨，病例样本量少，尚需开展多中心、大样本、前瞻性临床研究来进一步验证。

[参考文献]

[1] Ekstrm Smedby K，Vajdic CM，Falster M，et al.Autoimmune disorders and risk of non-Hodgkin lymphoma subtypes：a pooled analysis within the InterLymph Consortium[J].Blood，2008，111（8）：4029-4038.

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[13] Tibiletti MG，Martin V，Bernasconi B，et al.BCL2，BCL6，MYC，MALT1，and BCL10 rearrangements in nodal diffuse large B-cell lymphomas：a multicenter evaluation of a new set of fluorescent in situ hybridization probes and correlation with clinical outcome[J].Hum Pathol，2009，40（5）：645-652.

[14] 徐方平，刘艳辉，骆新兰，等.弥漫性大B细胞淋巴瘤各分子亚型中的bcl-6基因重排与蛋白表达的临床意义[J].中华病理学杂志，2008，37（6）：371-376.

[15] 莫汉有，周润华，王晓桃，等.干燥综合征患者唇腺p53、bcl-6及PCNA表达与其发生非霍奇金淋巴瘤的相关性研究[J].重庆医学，2006，35（21）：1954-1956.

（收稿日期：2014-10-30 本文编辑：李亚聪）

已有研究表明，NHL的发生是由于单个细胞中发生多基因病变的进行性累积而成，最常见的基因改变类型是染色体易位，可见于>90%的NHL中，染色体易位导致一些癌基因发生重排，在NHL的发病机制上可能起重要作用[11]。Hans等[12]在进行淋巴瘤分子分类的研究时发现，位于人类染色体的3q27的BCL-6基因异常与DLBCL发生及预后关系密切。Tibiletti等[13]的研究亦发现，BCL-6基因断裂重排是NHL最常见、特征性的染色体改变，主要存在于B细胞性NHL中的DLBCL和滤泡性淋巴瘤（FL）中，其重排的发生率分别占30%～40%和6%～14%，由此可见，BCL-6是与NHL特别是与DLBCL和FL关系密切的基因。

本研究利用FISH技术对4组研究对象唇腺组织BCL-6基因的重排情况进行检测，结果发现，16例pSS合并NHL患者唇腺组织BCL-6基因重排发生率为56.2%（9/16），显著高于pSS未并发NHL（20.0%）及健康人群（5.0%），差异有统计学意义。在NHL未并发pSS组中BCL-6基因重排的发生率为50.0%（10/20），与pSS合并NHL组患者比较差异无统计学意义，这提示BCL-6基因重排与pSS并发NHL高度相关。国内同类研究表明，约60%的DLBCL病例有BCL-6基因重排，且其中的大多数均可见BCL-6蛋白过表达，提示BCL-6基因重排导致的BCL-6蛋白表达上调参与了部分DLBCL的发病过程[14]。研究发现，BCL-6蛋白在pSS合并NHL患者中的阳性率高达81.8%，显著高于健康对照组和pSS患者[15]，与本研究结果相符。

总之，研究BCL-6基因的异常对NHL发生发展分子机制的认识、临床预后的判断以及治疗的监控等都具有重要的价值。BCL-6基因重排与pSS患者并发NHL密切相关，BCL-6基因重排可作为预测pSS并发NHL的生物学参考指标之一。由于本研究仅是对pSS并发NHL患者唇腺组织BCL-6基因的重排进行单中心的初步探讨，病例样本量少，尚需开展多中心、大样本、前瞻性临床研究来进一步验证。

[参考文献]

[1] Ekstrm Smedby K，Vajdic CM，Falster M，et al.Autoimmune disorders and risk of non-Hodgkin lymphoma subtypes：a pooled analysis within the InterLymph Consortium[J].Blood，2008，111（8）：4029-4038.

[2] Youinou P，Saraux A，Pers JO.B-Lymphocytes govern the pathogenesis of Sjgren′s syndrome[J].Curr Pharm Biotechnol，2012，13（10）：2071-2077.

[3] Dent AL，Shaffer AL，Yu X，et al.Control of inflammation，cytokine expression，and germinal center formation by BCL-6[J].Science，1997，276（5312）：589-592.

[4] Tamura A，Miura I，Iida S，et al.Interphase detection of immunoglobulin heavy chain gene translocations with specific oncogene loci in 173 patinets with B-cell lymphoma[J].Cancer Genet Cytogenet，2001，129（1）：1-9.

[5] 赵岩，贾宁，魏丽，等.原发性干燥综合症2002年国际分类（诊断）标准的临床验证[J].中华风湿病学杂志，2003，7（9）：537.

[6] Jaffy ES，Harris NL，Stein H，et al.World Health Organization classification of tumours.Pathology and genetics of tumors of haematopoietic and lymphoid tissues[M].Lyon：IARC Press，2001：171-181.

[7] 王桂秋，文亦磊，王华，等.荧光原位杂交技术在淋巴瘤诊断中的应用[J].广西医科大学学报，2008，25（6）：939-940.

[8] Voulgarelis M，Skopouli FN.Clinical，immunologic，and molecular factors predicting lymphoma development in Sjgren′s syndrome patients[J].Clin Rev Allergy Immunol，2007，32（3）：265-274.

[9] 杨敏，莫汉有，李宝贞，等.原发性干燥综合征合并非霍奇金淋巴瘤16例临床特征分析[J].重庆医学，2012，41（30）：3149-3151.

[10] Baimpa E，Dahabreh IJ，Voulgarelis M，et al.Hematologic manifestations and predictors of lymphoma development in primary Sjgren′s syndrome：clinical and pathophysiologic aspects[J].Medicine，2009，88（5）：284-293.

[11] Lossos IS，Morgensztem D.Prognostic biomarkers in diffuse large B-cell lymphoma[J].J Clin Oncol，2006，24（6）：995-1007.

[12] Hans CP，Weisenburger DD，Greiner TC，et al.Confirmation of the molecular classification of diffuse large B-cell lymphoma by immunohistochemistry using a tissue microarray[J].Blood，2004，103（1）：275-282.

[13] Tibiletti MG，Martin V，Bernasconi B，et al.BCL2，BCL6，MYC，MALT1，and BCL10 rearrangements in nodal diffuse large B-cell lymphomas：a multicenter evaluation of a new set of fluorescent in situ hybridization probes and correlation with clinical outcome[J].Hum Pathol，2009，40（5）：645-652.

[14] 徐方平，刘艳辉，骆新兰，等.弥漫性大B细胞淋巴瘤各分子亚型中的bcl-6基因重排与蛋白表达的临床意义[J].中华病理学杂志，2008，37（6）：371-376.

[15] 莫汉有，周润华，王晓桃，等.干燥综合征患者唇腺p53、bcl-6及PCNA表达与其发生非霍奇金淋巴瘤的相关性研究[J].重庆医学，2006，35（21）：1954-1956.

（收稿日期：2014-10-30 本文编辑：李亚聪）