溴量法测定白藜芦醇的研究

袁胜，李梦耀，李扬，张晓松，汶海花

(1.长安大学 环境科学与工程学院，陕西 西安 710054;2.长安大学 陕西省地下水与生态环境工程研究中心，陕西 西安 710054)

白藜芦醇属于多酚化合物，含有芪类结构，白色结晶，难溶于水，易溶于乙醇等有机溶剂，植物界中，如虎杖、决明、薄芦等中白藜芦醇含量较高［1］。近年来人们对白藜芦醇的研究结果证实其具有许多重要的生理活性，如抗癌、抗病菌、抗氧化和抗诱变等［2］。测定白藜芦醇的方法有高效液相色谱法［3］、毛细管电泳法［4］、薄层扫描法［5］、薄层荧光扫描法［6］和化学发光法［7］等仪器法。本文依据白藜芦醇的结构、性质特点，建立了一种采用溴量法测定白藜芦醇的新方法，操作简单，测定结果准确、可靠，适合于天然产物中白藜芦醇的分析测定。

1 实验部分

1.1 材料与仪器

白藜芦醇(含量98%);溴化钾、溴酸钾、碘化钾、硫代硫酸钠等均为分析纯;重铬酸钾，优级纯;水为蒸馏水;新鲜葡萄;葡萄干。

AL204 电子天平;THZ-82 恒温振荡器。

1.2 白藜芦醇储备液的配制

准确称取0.466 0 g 白藜芦醇，用无水乙醇溶解并定容于20 mL 容量瓶中，摇匀，得0.1 mol/L 的白藜芦醇储备液。实验中各浓度白藜芦醇使用液均由储备液逐级稀释而成。

1.3 测定原理

白藜芦醇，学名为3，4’，5-三羟基-1，2-二苯乙烯(亦称芪三酚)，有顺反两种异构体，白藜芦醇及其苷的结构如图1 所示。

图1 白藜芦醇及其苷的化学结构Fig.1 The chemical structure of resveratrol and piceid

白藜芦醇结构中含有碳碳双键和酚羟基，在一定条件下，可与溴分子发生亲电加成和亲电取代反应，只要能够确定与一分子白藜芦醇起反应的溴分子数，就可用溴量法测定白藜芦醇含量。

平行进行空白实验，确定加入的总溴。用白藜芦醇标准样进行实验，按式(5)计算反应系数z。

式中 z——与1 分子白藜芦醇起反应的Br2份子数;

V0——空白消耗Na2S2O3的体积，mL;

V——样品消耗Na2S2O3的体积，mL;

C——Na2S2O3标准溶液的浓度，mol/L;

cb——白藜芦醇标准溶液的浓度，mol/L;

Vb——白藜芦醇标准溶液的体积，mL。

1.4 测定方法

准确移取白藜芦醇标准(或样品)溶液10.00 mL于250 mL 碘量瓶中，加入0.1 mol/L 的溴试剂5.00 mL，再微开瓶塞，加入2 mol/L 的盐酸溶液1.0 mL，立即盖上塞，用少量水封口，振荡1 min，于暗处静置20 min。微开瓶塞，加入10%的碘化钾溶液10 mL，立即盖上塞。充分摇匀后放置5 min，加氯仿2 mL，轻轻振荡，使沉淀溶解，加水50 mL，用一定浓度的Na2S2O3溶液滴定，至显淡黄色时，加2.00 mL 淀粉指示剂，继续滴加至蓝色消失，即为终点。记录消耗Na2S2O3标准溶液的体积为V mL。

平行进行空白实验，消耗Na2S2O3标准溶液的体积为V0mL。按式(6)计算样品溶液中白藜芦醇浓度。

式中 cb——样品溶液中白藜芦醇浓度，mg/L;

V0——空白消耗Na2S2O3标液体积，mL;

V——样品消耗Na2S2O3标液体积，mL;

C——Na2S2O3标准溶液的浓度，mol/L;

M——白藜芦醇摩尔分子质量，228.25 g/mol;

z——与1 分子白藜芦醇起反应的Br2份子数;

Vx——白藜芦醇样品溶液体积，L。

2 结果与讨论

2.1 白藜芦醇与Br2 的反应系数

2.1.1 盐酸用量 加入溴的摩尔分子数为白藜芦醇的5 倍，考察2 mol/L 盐酸用量对反应系数的影响，结果见表1。

表1 盐酸用量对反应系数的影响Table 1 The impact of HCl amount on reaction coefficient

由表1 可知，盐酸的用量对反应系数无显著影响，但酸量较少时，生成Br2的反应(式(1))不完全。确定加入2 mol/L HCl 的量为1.00 mL。

2.1.2 溴试剂的用量 保持酸度不变，考察溴试剂用量对反应系数的影响，结果见表2。

表2 溴试剂用量对反应系数的影响Table 2 The impact of bromine reagent amount on reaction coefficient

由表2 可知，在保证Br2过量的情况下，溴分子的量对反应无显著影响。但也不宜过多，通常情况，过量的溴应控制在溴总量的20%左右。

2.2 样品分析

将市售新鲜的葡萄去除果肉和籽，风干(含水率80%)，粉碎。准确称取5.2 g 葡萄皮于锥形瓶中，加入体积分数为60%工业酒精180 mL，在40 ℃下，恒温振荡提取4.0 h。取上清液为测定白藜芦醇的样品溶液1。以葡萄干为原料，准确称取7.2 g 剪碎的葡萄干于锥形瓶中，加入体积分数为60%工业酒精180 mL，同样的方法制备测定白藜芦醇的样品溶液2，结果见表3。

表3 白藜芦醇样品含量测定结果Table 3 The content measurement results of resveratrol sample

由表3 可知，葡萄皮样品中白藜芦醇的含量为0. 070 g/L，葡萄干样品中白藜芦醇的含量为0.175 g/L。

2.3 精密度和准确度

2.3. 1 精密度 实验数据的精密度分析结果见表4。

由表4 可知，两种样品的10 次测量结果没有显著性的差异，证明数据合理可信。

表4 白藜芦醇样品精密度分析结果Table 4 The accuracy analysis results of resveratrol sample

2.3.2 准确度 对两种样品进行加标回收实验，结果见表5。

表5 白藜芦醇样品加标回收率测定结果Table 5 The add mark recovery rate measurement results of resveratrol sample

由表5 可知，方法的回收率在97% ～98%之间，该方法比较可靠、准确。

3 结论

(1)通过对白藜芦醇与溴试剂反应的研究，确定白藜芦醇与溴分子的反应分子数值比为1∶4。

(2)溴量法测定白藜芦醇含量的最佳反应条件为:加入白藜芦醇分子与溴分子的摩尔比为1∶5，加入2 mol/L HCl 的体积为1 mL。加标回收率97% ～98%，方法具有可行性以及稳定性。

［1］ 张凌燕.虎杖中白藜芦醇分离纯化工艺及其含量检测研究［D］.福州:福建师范大学，2006.

［2］ 潘瑾，黄玉明.化学发光测定白藜芦醇［J］.西南师范大学学报，2006(4):90-92.

［3］ Emilia Juan M，Lamuela-Raventos R M，de la Torre-Boronat M C，et al.Determination of trans-resveratrol in plasma by HPLC［J］.Anal Chem，1999，71:747-750.

［4］ Gao Leyi，Chu Qingcui，Ye Jiannong. Determination of trans-resveratrol in wines，herbs and health food by capillary electrophoresis with electrochemical detection［J］.Food Chem，2002，78(2):255-260.

［5］ 赵瑞芝.薄层扫描法测定虎杖中白藜芦醇含量［J］.中成药，2005，27(5):605-606.

［6］ 陈敏，舒友琴，何计国，等. 薄层荧光扫描法测定葡萄酒中的白藜芦醇及其糖苷异构体［J］. 分析化学，2005，33(5):635-638.

［7］ 姚型军，王术皓，杜凌云.流动注射化学发光法测定样品中的白藜芦醇［J］. 化学研究与应用，2006，18(8):1005-1008.