子宫富于细胞性平滑肌瘤雌、孕激素受体及Ki—67的表达及临床意义

2014-12-20吴莺等

中国医药导报 2014年33期

吴莺等

[摘要] 目的分析评价子宫富于细胞性平滑肌瘤中雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、Ki-67的表达及临床意义。方法收集2010～2014年湖北省妇幼保健院41例子宫富于细胞性平滑肌瘤、12例普通型子宫平滑肌瘤、5例恶性潜能未定子宫平滑肌瘤及10例子宫平滑肌肉瘤患者的子宫组织标本，采用免疫组化法检测各子宫组织中ER、PR以及Ki-67的表达水平。结果 ER在普通型子宫平滑肌瘤（83.3%）、富于细胞性平滑肌瘤（90.2%）以及恶性潜能未定型平滑肌瘤的阳性表达率（80.0%）逐渐下降，差异无统计学意义（P > 0.05）。ER在普通型子宫平滑肌瘤、富于细胞性平滑肌瘤以及恶性潜能未定型平滑肌瘤的阳性表达率均显著高于子宫平滑肌瘤肉瘤（10.0%）的表达，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。PR在普通型子宫平滑肌瘤（100.0%）、富于细胞性平滑肌瘤（97.6%）以及恶性潜能未定型平滑肌瘤的阳性表达率（80.0%）逐渐下降，但差异无统计学意义（P > 0.05）。PR在普通型子宫平滑肌瘤、富于细胞性平滑肌瘤以及恶性潜能未定型平滑肌瘤的阳性表达率均显著高于子宫平滑肌瘤肉瘤（20.0%），差异有高度统计学意义（P < 0.01）。Ki-67在普通型子宫平滑肌瘤[（0.020±0.009）个/10 HPF]、富于细胞性平滑肌瘤中 [（0.039±0.011）个/10 HPF] 的表达量比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。Ki-67在普通型子宫平滑肌瘤、富于细胞性平滑肌瘤中的表达均显著低于恶性潜能未定型平滑肌瘤[（0.231±0.077）个/10 HPF]和子宫平滑肌肉瘤中 [（0.320±0.103）个/10 HPF]的表达，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。子宫富于细胞性平滑肌瘤组织中ER和PR表达没有明显的相关性（P > 0.05），两者与Ki-67呈显著正相关（r=0.399、0.452，P < 0.05）。结论子宫富于细胞性平滑肌瘤组织中ER和PR高表达，ER和PR的表达与Ki-67呈正相关。ER、PR和Ki-67的表达差异可鉴别诊断良、恶性子宫平滑肌瘤。

[关键词] 雌激素受体；孕激素受体；子宫富于细胞性平滑肌瘤

[中图分类号] R737.33 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）11（c）-0043-05

Clinical significance and expression of ER， PR and Ki-67 in cellular leiomyoma surgical oncology

WU Ying WANG Yan LANG Yan DU Xin GAO Yue JIN Zhichun

Department of Gynecological， Maternal and Child Health Hospital of Hubei Province， Hubei Province， Wuhan 430070， China

[Abstract] Objective To analyze clinical significance and expression of ER、PR and Ki-67 in cellular leiomyoma. Methods 41 tissue samples of cellular leiomyoma， 12 tissue samples of common type uterine leiomyoma， 5 tissue samples of uncertain malignant potential of uterine leiomyoma， and 10 tissue samples of uterine leiomyosarcoma from 2010 to 2014 in Maternal and Child Health Hospital of Hubei Province were selected， and the expression of ER， PR and Ki-67 in different uterus tissues were detected by immunohistochemical methods. Results The positive expression rate of ER in common type uterine leiomyoma （83.3%）， cellular leiomyoma （90.2%） and malignant potential undifferentiated leiomyoma （80.0%） showed downward trend， but there was no significant difference （P > 0.05）. The positive expression rate of ER in common type uterine leiomyoma， cellular leiomyoma and malignant potential undifferentiated leiomyoma were apparently higher than uterine fibroids sarcoma （10.0%）， the differences were statistically significant （P < 0.01）. The positive expression rate of PR in common type uterine leiomyoma （100.0%）， cellular leiomyoma （97.6%） and malignant potential undifferentiated leiomyoma （80.0%） showed downward trend， but there was no significant difference （P > 0.05）. The positive expression rate of PR in common type uterine leiomyoma， cellular leiomyoma and malignant potential undifferentiated leiomyoma were apparently higher than uterine fibroids sarcoma （20.0%）， the differences were statistically significant （P < 0.01）. The expression of Ki-67 in common type uterine leiomyoma [（0.020±0.009）/10 HPF] and cellular leiomyoma [（0.039±0.011） /10 HPF] showed no significant difference （P > 0.05）. The expression of Ki-67 in common type uterine leiomyoma and cellular leiomyoma were apparently lower than that in the malignant potential undifferentiated leiomyoma [（0.231±0.077）/10 HPF] and uterine fibroids sarcoma [（0.320±0.103）/ 10 HPF]， the differences were statistically significant（P < 0.01）. In cellular leiomyoma， expression of ER showed no correlation with PR （P > 0.05）， and the expression of PR and ER showed a positive correlation with Ki-67 （r=0.399， 0.452； P < 0.05）. Conclusion ER， PR in cellular leiomyoma show high expression， and expression of ER and PR expression show positive correlation with Ki-67. Differences of ER， PR and Ki-67 expression may be in the differential diagnosis of benign and malignant uterine leiomyoma.

[Key words] ER； PR； Cellular leiomyoma

WHO于2003年将子宫富于细胞性平滑肌瘤归为良性肿瘤，但是在临床工作中，有少数患者会发生复发或者转化为恶性肿瘤。富于细胞性平滑肌瘤镜下细胞特征不典型，容易与恶性子宫平滑肌瘤发生混淆，容易误诊。子宫属于性激素的靶器官，受性激素的调节，而雌激素在妇科肿瘤的发生过程中具有重要的作用。对子宫平滑肌瘤的研究显示其在生育期发生并发展，进入更年期后会出现逐渐萎缩的特点，因此认为其具有激素依赖性[1-3]。有研究显示孕激素在子宫肌瘤的发生和发展过程中同样发挥重要的作用[4-5]。Ki-67反映了肿瘤细胞的增殖活性，可反映肿瘤细胞的恶性程度[6-7]。本研究通过对41例子宫富于细胞性平滑肌瘤患者的标本检测雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）以及Ki-67水平，并与子宫普通型平滑肌瘤患者、恶性潜能未定子宫平滑肌瘤、子宫平滑肌肉瘤患者检测结果进行比较，分析子宫富于细胞性平滑肌瘤ER、PR、Ki-67表达水平及临床意义。

1 材料与方法

1.1 材料

收集2010～2014年于湖北省妇幼保健院（以下简称“我院”）手术治疗的68例子宫平滑肌肿瘤患者的子宫组织，所纳入研究的对象临床资料均完整。其中子宫富于细胞性平滑肌瘤41例，年龄25～58岁，平均（51.7±12.3）岁；子宫普通型平滑肌瘤12例，年龄45～61岁，平均（53.1±8.5）岁；恶性潜能未定子宫平滑肌瘤5例，年龄41～59岁，平均（51.9±7.0）岁；子宫平滑肌肉瘤10例，年龄42～60岁，平均（50.9±10.1）岁。所有纳入研究的组织标本均经病理证实（子宫普通型平滑肌瘤镜下可见肌瘤主要由梭形平滑肌细胞组成，排列成栅状或者旋涡状，细胞大小均匀，核染色较深。子宫富于细胞性平滑肌瘤镜下见肿瘤中平滑肌细胞丰富，排列紧密，细胞浆相对减少，但细胞大小、形态尚一致，个别细胞可由异形性，偶见核分裂相。恶性潜能未定子宫平滑肌瘤子宫肌瘤多细胞表现，核分裂为1～8个/10 HPF，个别局部生长活跃，细胞核大，排除合并其他系统恶性肿瘤及其他生殖系统疾病。

1.2 试剂

兔抗人雌激素受体单克隆抗体，由上海科兴商贸有限公司提供；兔抗人孕激素受体单克隆抗体，由上海科兴商贸有限公司提供；鼠抗人Ki-67单克隆抗体由上海科兴商贸有限公司提供。

1.3 检测方法

所有组织标本经福尔马林浸泡固定，石蜡包埋，切4 μm厚切片，制作载玻片，脱蜡，水化，抗原修复，加3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶活性，室温下放置20 min后，磷酸盐缓冲液（PBS）液冲洗3次，每次3 min。加一抗，4℃过夜，PBS液冲洗3次，每次3 min。加即用型聚合物辅助剂，室温孵育20 min，PBS液冲洗3次，每次3 min。加Polyperoxidase-anti-rabbit IgG试剂，37℃孵育90 min，PBS冲洗3次，每次3 min。二氨基联苯胺（DAB）显色（试剂盒由北京北方同正生物技术发展有限公司生产）来水冲洗，复染，脱水，透明，封片。Ki-67染色（上海科兴商贸有限公司提供）不加即用型聚合物辅助剂，加辣根过氧化酶标记的二抗，余步骤相同。

1.4 结果判断

ER阳性细胞染色在细胞核，呈棕黄色颗粒，PR阳性细胞染色在细胞核，呈棕黄色颗粒。在高倍视野下观察1000个瘤细胞，计数阳性瘤细胞百分比，0～10%计为0分，1分为>10%～24%，2分为>24%～49%，3分为>49%～76%，4分为>76%。染色强度评分：0分为无染色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色。两种计分结果之和为最终结果：阴性为0～1分，弱阳性为2～3分，阳性为4～5分，强阳性为6～7分。Ki-67阳性细胞染色在细胞核，呈棕黄色颗粒。在肿瘤最活跃区连续计数10个高倍镜的阳性细胞数。

1.5 统计学方法

采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验。相关分析采用非参数Spearman等级相关分析，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各子宫组织中ER、PR、Ki-67表达情况的比较

ER在普通型子宫平滑肌瘤、富于细胞性平滑肌瘤以及恶性潜能未定型平滑肌瘤的阳性表达率逐渐下降，但差异无统计学意义（P > 0.05）。ER在普通型子宫平滑肌瘤、富于细胞性平滑肌瘤以及恶性潜能未定型平滑肌瘤的阳性表达率均显著高于子宫肌瘤肉瘤的表达，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。PR在普通型子宫平滑肌瘤、富于细胞性平滑肌瘤以及恶性潜能未定型平滑肌瘤的阳性表达率逐渐下降，但差异无统计学意义（P > 0.05）。PR在普通型子宫平滑肌瘤、富于细胞性平滑肌瘤以及恶性潜能未定型平滑肌瘤的阳性表达率均显著高于子宫肌瘤肉瘤，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。Ki-67在普通型子宫平滑肌瘤、富于细胞性平滑肌瘤中的表达差异无统计学意义（P > 0.05）。Ki-67在普通型子宫平滑肌瘤、富于细胞性平滑肌瘤中的表达均显著低于恶性潜能未定型平滑肌瘤和子宫平滑肌肉瘤中的表达，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。见表1，图1～3（封三）。

3 讨论

子宫平滑肌瘤是临床常见的妇科疾病，尤其以30岁以上的女性发病率较高，影响女性的健康和生活质量。子宫平滑肌瘤的发病机制还不十分清楚。子宫属于性激素的靶器官，子宫平滑肌瘤具有性激素依赖性的特性[8-9]。子宫平滑肌瘤的发生与雌激素启动的作用有关，因此育龄期女性子宫平滑肌瘤的发病率最高，尤其是当发生高雌激素情况时，例如妊娠等，容易发生子宫平滑肌肌瘤，甚至发生不典型增生，而在绝经后，肌瘤会逐渐缩小[10-11]。子宫肌瘤中的雌激素和孕激素水平高于正常的基层组织，这提示肌瘤的发生于持续局部高水平的雌二醇及孕激素的刺激相关。子宫肌瘤对雌二醇有反应，并且敏感性也增强。子宫肌瘤的大小具有随着月经周期的变化而变化的特点，在卵泡期肌瘤体积缩小，黄体期肌瘤体积增大，妊娠期肌瘤体积也会迅速增大，在黄体期，组织中的细胞分裂像显著高于卵泡期。抗孕激素药物治疗具有促进肌瘤萎缩与退化的作用，这些均提示孕激素在子宫肌瘤发生过程中也发挥了重要的作用[12-13]。

在相同的激素水平下，靶器官组织中激素的生物效应强度与靶器官组织细胞上受体的含量具有密切的关系。雌激素受体增加在平滑肌瘤的发病过程中也发挥了重要的作用[14]。子宫肌瘤中ER和PR的水平均高于临近的正常肌层组织。受体缺乏是激素并不能发挥正常的作用。ER分为α和β亚型，在子宫肌瘤中α mRNA以及β mRNA水平均显著升高[15-17]。雌激素与不同的受体亚型结合产生的生理作用不同。

孕激素受体接受并对信号进行放大的作用与子宫平滑肌瘤细胞增殖有关。子宫平滑肌瘤局部孕激素的生物效应较临近子宫肌组织要强，细胞内转录活化作用也增强，肌瘤局部增生活跃，这在肌瘤的发生过程中发挥重要的作用。PR有hPR-A和hPR-B的两种亚型，两种类型均是核受体。在子宫肌瘤中A亚型蛋白的表达高于正常的肌层组织，两种亚型的mRNA在子宫肌瘤中的表达均显著高于正常肌组织。在本次研究中，ER和PR在普通子宫肌瘤、子宫富于细胞性平滑肌瘤以及恶性潜能未定型平滑肌瘤组织中的表达均显著高于子宫平滑肌肉瘤组织，并且具有显著差异。因此ER和PR在鉴别诊断良、恶性子宫平滑肌瘤时具有较高的临床价值。

Ki-67是一种核抗原，与细胞增殖有关，与有丝分裂的关系密切，在细胞增殖过程中不可缺少，但具体机制还不十分清楚。Ki-67可用以标记细胞的增殖状态，Ki-67阳性的细胞提示癌细胞增殖活跃[19-21]。多种恶性肿瘤均可通过Ki-67的检测，以了解肿瘤细胞的增殖情况。Ki-67的表达范围包括除G0期外的各个增殖周期。Ki-67可用于癌组织增殖细胞的检测。低分化腺癌组织中Ki-67的表达显著高于中高分化的腺癌组织中的表达，说明Ki-67的阳性程度与组织学分级具有相关性。Ki-67表达蛋白MIB-I，与细胞周期时相相关，不同的时相表达也不同。在G0期和G1的早期不表达，G1的中晚期开始表达，在S期与G2期表达增加，M期达到高峰，M期后又迅速的降解。既往研究显示病理组织学分级低的良性肿瘤具有较低的Ki-67标记，而病理组织学级别高的Ki-67表达水平高。正常的平滑肌细胞以及子宫平滑肌瘤中，PCNA/Ki-67与细胞的凋亡相关[22]，但子宫平滑肌肉瘤组织中两者没有现骨干型。在肿瘤组织中，Ki-67的表达水平越高，则转移速度越快，病死率也增加。在本次研究中，Ki-67在普通子宫平滑肌瘤以及子宫富于细胞性平滑肌瘤中的表达显著低于子宫平滑肌肉瘤以及恶性潜能未定型平滑肌瘤组织。有研究显示，随着子宫平滑肌瘤从良性到恶性的组织形态变化中，Ki-67的表达也呈梯度升高[23-25]。因此Ki-67可用于良、恶性子宫平滑肌瘤的鉴别诊断。在相关性分析中，子宫富于细胞性平滑肌瘤组织中ER和PR的表达与Ki-67的表达均呈正相关（r=0.399、0.452，P < 0.05），这提示ER和PR与子宫富于细胞性平滑肌瘤细胞增殖有关。

综上所述，子宫富于细胞性平滑肌瘤组织中ER和PR的高表达也为治疗方案提供了更多的选择，而其在良、恶性子宫肌瘤中的表达差异有利于鉴别诊断。

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（收稿日期：2014-08-10 本文编辑：任念）