半胱氨酰白三烯受体CysLT1R在大肠癌组织中的表达及临床意义

张世强，唐采白，陈卫花(徐州医学院第二附属医院肿瘤内科，徐州 006;徐州医学院第三附属医院消化内科;徐州医学院第二附属医院病理科)

近年来，炎症因子和大肠癌发生之间的关系逐渐引起人们的重视。研究表明，炎性肠病患者结肠癌发生的风险要高30倍［1］，在许多与肠道炎症和肿瘤发生有关的炎性因子中，白三烯(leukotrienes，LTs)和前列腺素的作用受到特别的关注，其中LTs包括白三烯B4(LTB4)以及半胱氨酰白三烯(cysteinyl leukotrienes，CysLTs)。LTs与炎性肠病的发生有特殊的相关性［2，3］，然而，国外研究发现 CysLTs能刺激肠道上皮细胞发生增生反应，提示白三烯也可能参与肠道上皮细胞的过度增生和肿瘤形成［4］。本研究通过免疫组化检测大肠癌组织、癌旁组织及大肠癌前病变腺瘤性息肉组织中CysLT1R的表达，来探讨CysLT1R在人类大肠癌发生发展中的可能作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2009-2013年间徐州医学院第二附属医院病理科存档大肠癌组织蜡块46例，其中男性26例，女性20例，年龄29-72岁，中位年龄56岁;癌旁组织32例(与32例癌组织标本为同一患者，另外14例患者癌旁组织中发现有点状癌细胞浸润，无法作为对照组)，其中男性18例，女性14例，年龄29-68岁;管状绒毛状腺瘤15例，其中男性8例，女性7例，年龄35-74岁。所有病例术前均未进行放疗和化疗。标本分为大肠癌组、腺瘤性息肉组及癌旁黏膜组。

1.2 主要试剂

CysLT1R兔抗人多克隆抗体购自美国Cayman公司，免疫组化DAB显色试剂盒购自北京中杉生物技术公司。

1.3 实验方法

免疫组化技术采用EnVision二步法，免疫组化过程:组织切片经脱蜡、水化后，用柠檬酸缓冲液(pH=6.0)微波热修复抗原5 min，30 g/L过氧化氢封闭内源性的过氧化物酶，山羊血清封闭非特异性反应。PBS替代一抗作阴性对照。参照文献［5］对染色结果进行判断。5%以上细胞胞膜或胞质染色判定为阳性。

1.4 统计学分析

将所有实验数据输入SPSS 13.0统计软件包，应用χ2检验或Fisher检验分析CysLT1R表达与大肠癌临床病理因素的相互关系，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CysLT1R在大肠癌组织、癌旁组织及腺瘤性息肉组织的表达

CysLT1R免疫组化阳性产物主要定位于细胞膜和细胞质，部分患者可见胞核着色(图1，见第247页)。46例大肠癌组织中，CysLT1R阳性表达31例(67.39%)，32例癌旁组织中，CysLT1R阳性表达13例(40.62%)，15例大肠腺瘤性息肉组织中，Cys-LT1R阳性表达6例(40.00%)，大肠癌组织中，Cys-LT1R的阳性表达率高于癌旁组织、腺瘤性息肉组织(P ＜0.05，见表1)。

图1 CysLT1R在大肠癌组织、癌旁组织及腺瘤性息肉组织中的表达 (EnVision，×400)Figure 1 CysLT1R protein expression in colorectal carcinoma tissues，para-neoplastic tissues and adenomatous polyp tissues(EnVision，×400)

表1 CysLT1R在大肠癌组织、癌旁组织及腺瘤性息肉组织的表达 (例)Table 1 CysLT1R expression in colorectal carcinoma tissues，para-neoplastic tissues and adenomatous polyp tissues (cases)

2.2 CysLT1R的表达与大肠癌临床病理特征之间的关系

CysLT1R的表达与大肠癌的病理分级、肿瘤最大径、有无淋巴结转移及临床分期有关，其中高分化腺癌、肿瘤最大径＜5 cm、淋巴结未转移及临床分期早的患者CysLT1R的阳性表达率均明显低于中低分化腺癌、肿瘤最大径＞5 cm、有淋巴结转移及中晚期的患者(P＜0.05);但CysLT1R的表达与大肠癌患者的性别无明显的关系(P＞0.05，见表2)。

表2 CysLT1R的表达与大肠癌临床病理特征之间的关系Table 2 Correlation of CysLT1R expression in colorectal carcinoma tissues with clinical pathological features

3 讨论

大肠癌是目前严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一，大肠癌在全球发病率高居恶性肿瘤第四位［6］，我国大肠癌发病率在近30年中总体增加36.7%，年均新发大肠癌病例13万，并以年均4.2%的增幅攀升［7］。大肠癌的发生发展是一个涉及多因素、多步骤、多基因的过程，具有高复发和高转移的特点，目前对于大肠癌的发病及其转移尚无有效的防治手段，其发病机制和防治依然是这一领域中的研究热点。

近年来研究证实，白三烯及其受体(1eukotriene receptors，LTRs)参与了多种肿瘤的发生，是肿瘤发生的一种新机制，其主要机制可能为肿瘤细胞上白三烯受体高表达，发挥了对肿瘤细胞的促增殖作用。另外有研究发现半胱氨酰白三烯受体1(CysLTR1)在结肠癌细胞中发生核转位是发挥促增殖作用的重要机制，这种促增殖效应可被相应的受体拮抗剂所阻断［8］。白三烯B4(LTB4)受体结抗剂LY29311是第二代LTB4受体结抗剂，在临床试验中显示有显著的抗瘤效应［9，10］。因此，研究白三烯及其受体与肿瘤的发生发展的关系，对于大肠癌的早期防治具有重要的意义。目前虽然已有研究报道LTRs在多种组织细胞中表达，但关于LTRs在结肠肿瘤组织中的表达、分布与功能，以及他们在结肠肿瘤发病中作用的研究少见报道。如果能够了解白三烯受体在肠黏膜上皮细胞中的表达状况与功能，对于评价LTRs在结肠肿瘤发病中的作用以及寻求新的治疗靶位具有积极的意义。

本研究结果显示，大肠癌组织中CysLT1R的阳性表达率明显高于癌旁组织、腺瘤性息肉，而高分化腺癌、肿瘤最大径＜5 cm、无淋巴结转移及临床分期较早期的患者CysLT1R阳性表达率均明显低于中或低分化腺癌、肿瘤最大径≥5 cm、有淋巴结转移及临床分期较晚的患者，统计分析显示差异均具有显著性(P＜0.05)。因此，本研究认为，大肠癌变过程中CysLT1R表达水平明显上调，阳性表达者进展快，易发生淋巴结转移，CysLT1R表达水平可能是反映大肠癌发生发展的重要标志物，且其表达水平与大肠癌分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移及临床分期密切相关，但由于本研究中病例数较少，仍有待积累更多的病例进行更深入的研究。

［1］Terzic J，Grivennikov S，Karin E，et al.Inflammation and colon cancer［J］.Gastroenterology，2010，138(6):2101-2114.

［2］Wang D，Dubois RN.Eicosanoids and cancer［J］.Nat Rev Cancer，2010，10(3):181-193.

［3］Zick SM，Turgeon DK，Vareed SK，et al.Phase Ⅱ study of the effects of Ginger root extract on eicosanoids in colon mucosa in people at normal risk for colorectal cancer［J］.Cancer Prev Res，2011，4(11):1929-1937.

［4］Nielsen CK，Ohd JF，Wikstrom K，et al.The leukotriene receptor CysLT1 and 5-lipoxygenase are upregulated in colon cancer［J］.Adv Exp Med Biol，2003，525:201-204.

［5］张瑛，郝飞，钟华，等.半胱氨酰白三烯受体在几种表皮肿瘤及瘤样病变中的表达及意义［J］.第三军医大学学报，2007，29(24):2354-2356.

［6］Edwards BK，Ward E，Kohler BA，et al.Annual report to the nation on the status of cancer，1975-2006，featuring colorectal cancer trends and impact of interventions(risk factors，screening，and treatment)to reduce future rates［J］.Cancer，2010，116(3):544-573.

［7］陈竺.全国第三次死因回顾抽样调查报告［M］.北京:中国协和医科大学出版社，2008:28-39.

［8］Tong WG，Ding XZ，Hennig R，et al.Leukotriene B4 receptor antagonist LY293111 inhibits proliferation and induces apoptosis in human pancreatic cancer cells［J］.Clin Cancer Res，2002，8(10):3232-3242.

［9］Schwartz GK，Weitzman A，O’Reilly E，et al.Phase I and pharmacokinetic study of LY293111，an orally bioavailable LTB4 receptor antagonist，in patients with advanced solid tumors［J］.J Clin Oncol，2005，23(23):5365-5373.

［10］MelstromlG，Bentrem DJ，Salabat MR，et al.Overexpression of 5-Lipoxygenase in colon polyps and cancer and the effect of 5-LOX inhibitors in vitro and in a murine model［J］.Clin Cancer Res，2008，14(20):6525-6530.