胶体金法定性检测牛奶中林可霉素的应用

李利芬，杨国辉，赵文君，刘玉茹，张淑丽，姚升峰

（内蒙古蒙牛乳业科尔沁有限责任公司，内蒙古通辽028000）

0 引言

林可霉素类药物是由链霉菌产生的林可酰胺类抗生素。它是一种强效、窄谱的抑菌性抗生素。林可霉素残留通过食物链进入人体后累积可以导致细菌耐药性，因此，各国都对其作出限量要求，中华人民共和国农业部公告第235号-2002动物性食品中兽药最高残留限量100 ng/mL。林可霉素残留量的常规检测方法主要有高效液相色谱技术[1]、高效液相色谱串联质谱[2]、液相色谱-质谱联用技术（LC－MS／MS）[3]、氮磷气相色谱检测法[4]、薄层色谱[5]、气相色谱[6]等，由于复杂的仪器设备和繁琐的过程以及对检验人员的高技能要求，不适合现场监控大量样本的筛查。本文的目的就是介绍快速灵敏地检测牛奶中林可霉素残留的方法--胶体金免疫层析法，测该方法为定性检测，并可用两种方法进行检测：方法一林可霉素检出限40 ng/mL，方法二林可霉素检出限100 ng/mL。

1 实验

1.1 材料和设备

鲜奶样，12%复原乳，生乳脂肪层的奶样。

试剂：双氧水，碳酸氢钠，青霉素，糊精，三聚氰胺，氯化铵，北京勤邦林可霉素快速检测试纸条。

仪器为德国普兰德（BRAND）公司制造的移液器。

2 方法

2.1 干扰物质的配制备

分别取不含目标检测物质与含目标检测物质的生乳做本底，分别制备出质量浓度为20 mg/L双氧水掺假样品、质量分数为0.1%碳酸氢钠掺假样品、100 μg/kg青霉素抗生素掺假样品、0.2%糊精掺假样品、0.1%三聚氰胺掺假样品、0.1%铵盐掺假样品。

2.2 具体检测步骤

（1）使用前将本胶体金免疫层析试纸条和待检牛奶样本回复至室温。

（2）从原包装中取出试剂桶，打开后取出所需数目的微孔试剂和试纸条，并做好标记，在60 min内尽快使用。检测试剂取出后，请立即盖好试剂桶盖，防止受潮。

（3）方法一：用微量移液器吸取200 μL待检样本于微孔中，缓慢抽吸且充分与微孔中试剂混匀；方法二：用微量移液器吸取150 μL样本稀释液和50 μL待检样本于微孔中，缓慢抽吸且充分与微孔中试剂混匀。

（4）将标记好的试纸条插入微孔中——印有“MAX”线端朝下，使之充分浸入溶液中。

（5）室温（20～25 ℃）孵育5 min 后，取出试纸条判定结果，其他时间判定无效。

2.3 结果判定

（1）阴性（-）：C线显色，T线显色，无论颜色深浅，均表示牛奶样品中林可霉素浓度低于检测限。

（2）阳性（+）：C线显色，T线不显色，表示牛奶样品中林可霉素浓度高于检测限。

（3）无效：未出现C线，表明不正确的操作过程或试纸条已变质失效。

3 结果与分析

3.1 检出限实验

对生乳样品本底、检出限点及检出限附近点进行检测，每个点进行平行样检测，检测结果如表1所示。

表1 林可霉素快速检测试纸条检出限实验对比结果 ng/mL

3.2 重复性实验

使用方法一、方法二对原奶样本进行检测，检测点质量浓度为生乳（空白实验）、50 ng/mL，100 ng/mL每个点做10平行，符合率为100%。

3.3 干扰实验

3.3.1 阴性干扰

取不含目标检测物质的生乳做本底，加入如下干扰物质检测，检测情况如表2所示。

表2 林可霉素快速检测试纸条阴性抗干扰性能对比结果

3.3.2 阳性干扰

取含目标检测物质的样品（生乳）做本底，方法一加标质量浓度为50 ng/mL，方法二加标质量浓度为100 ng/mL，在制备的阳性样本中加入如下干扰物质，检测结果如表3所示。

3.4 批量检验结果

连续15日使用林可霉素试纸条对生乳样品进行检测，每天检测20个生乳样品，检测过程中所用林可霉素试纸条未出现失效、不走线等不良情况。

4 结 论

由上述可以看出，林可霉素定性检测胶体金免疫层析法具有以下优点：

表3 林可霉素快速检测试纸条阳性抗干扰性能对比结果

（1）在检测过程中无需前处理，直接检测，操作简便；

（2）整个检测过程用时6～7min，用时短；

（3）对阴性生乳、阳性加标样品分别做了10次重复性检测，检测结果相同，重复性好；

（4）分别对阴性生乳、阳性加标样品做了8类物质的抗干扰实验，检测结果一致，抗干扰能力强。

综上所述，采用胶体金免疫层析方法，在NC膜上预包被偶联抗原，样品中的林可霉素和NC膜上预包被的偶联抗原竞争抗林可霉素抗体，抑制抗原和抗林可霉素抗体的结合，对牛奶样品中林可霉素做快速定性筛选。运用此方法对生乳中林可霉素残留量进行筛选，与高效液相色谱技术、高效液相色谱串联质谱、液相色谱-质谱联用技术（LC－MS/MS）、氮磷气相色谱检测法、薄层色谱、气相色谱的检测技术相比上述方法由于复杂的仪器设备和繁琐的过程以及对检验人员的高技能要求，不适合现场监控大量样本的筛查，而此法样本前处理简单、仪器设备投资少，检测成本低，可作为林可霉素药物残留快速筛选的首选方法。对于乳品企业，此法能够保障到厂原奶及时出具检测结果，且能够满足对到厂生乳及定容奶仓的定性筛选排查，可将仪器法作为此法的确认法。

[1]钱红荟，曹敏，高效液相色谱法同时检测盐酸林可霉素和硝酸咪康唑[J].海峡药学，2008（4）：36－38.

[2]岳振峰，陈小霞，谢丽琪，等.高效液相色谱串联质谱法测定动物组织中林可酰胺类和大环内酯类抗生素残留[J].分析化学，2007，35（9）：1290－1294.

[3]GB/T 22941－2008，蜂蜜中林可霉素红霉素螺旋霉素替米考星泰乐霉素交沙霉素吉他霉素竹桃霉素残留量的测定液相色谱－串联质谱法[G].

[4]LUO W，YIN B，ANG C Y，et al.Determination of lincomycin residues in salmon tissues by gas chromatography with nitrogen－phosphorus detection[J].Journal of Chromatography B：Biomedical Sciences and Applications，1996，687（2）：405－411.

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