野生酸荔枝核中多糖的提取及其抗氧化活性

钱力+陈华妮+劳玲玲+陆永旺+伍师书

摘要：研究了从野生酸荔枝（Litchi chinensis Sonn）核中提取多糖的最佳条件及其体外抗氧化活性。结果表明，最佳提取条件为提取温度70 ℃，提取时间3.0 h，乙醇体积分数70%，在此条件下多糖的提取率为5.72%。体外试验表明，酸荔枝核多糖对·OH具有明显的清除作用。

关键词：酸荔枝（Litchi chinensis Sonn）核;多糖;提取;抗氧化

中图分类号：R284.2;S58        文献标识码：A        文章编号：0439-8114（2014）20-4949-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2014.20.047

Extracting Polysaccharides from Seeds of Wild Acid Litchi and Its Antioxidant Activity

QIAN Li1，CHEN Hua-ni2， LAO Ling-ling1， LU Yong-wang1， WU Shi-shu1

（1.Baise University， Baise 533000，Guangxi，China ;2. Youjiang Medical College for Nationalities， Baise 533000， Guangxi，China）

Abstract： The optimal conditions of extracting polysaccharides from seeds of wild acid litchi and its antioxidant activity in vitro were investigated. The optimal conditions were extraction temperature of 90 ℃， extracttion time of 180 min and the ethanol concentration of 70% vol. Results showed that the polysaccharides from seeds of wild acid litchi had good scavenging effect and reduction power against ·OH.

Key words：  acid Litchi seeds; polysaccharide; extraction; antioxidation

荔枝（Litchi chinensis Sonn）核为无患子科植物的干燥种子，主产于广东、广西等地，具有行血散结、祛寒止痛之功效。研究表明荔枝核具有调节血脂、降低血糖、抗氧化能力等药理作用[1-3]。多糖广泛存在于动物、植物和微生物中，是构成生命的四大基本物质之一，它广泛参与了细胞的各种生命现象及生理过程的调节，如免疫细胞间信息的传递与感受，细胞的转化，分裂及再生等活动。多糖具有多种生物活性，同维持生物机能密切相关。因此多糖的研究在医学领域受到越来越广泛的重视[4-9]。广西野生酸荔枝果实小、核大、肉薄，生长处于野生状态，管理粗放。对酸荔枝核中多糖的研究尚未见报道，因此对其相关特性开展研究有着重要的意义。

1  材料与方法

1.1  材料与仪器

原料为广西靖西深山采摘的野生酸荔枝（采集的样品经右江民族医学院张数球教授鉴定确认）。将酸荔枝的核取出，洗净、干燥、粉碎后备用。主要试剂葡萄糖，盐酸，无水乙醇，硫酸，苯酚，过氧化氢，十二水合硫酸铁铵，水杨酸，氯仿，正丁醇等为分析纯。

仪器旋转蒸发器（RE-3000，上海亚荣生化仪器厂），数显恒温水浴锅（HH6，国华电器有限公司），循环水式真空泵（SHZ-D，巩义市予华仪器有限公司），紫外-可见分光光度计（TU-1810，北京普析通用仪器有限责任公司），分析天平（CPA64，赛多利斯科学仪器北京有限公司），磁力搅拌器（S21-1，金坛市医疗仪器厂）。

1.2  方法

1.2.1  标准曲线的绘制  依次称取葡萄糖标准品50、100、200、300、350 mg，置于500 mL容量瓶中加蒸馏水定容，分别稀释成10、20、40、60、70 μg /mL的5个不同浓度的标准品系列溶液。再分别精确量取1.00 mL样品液5份，置于25 mL的比色管中。加1.50 mL 5.0%苯酚溶液，再加7.50 mL浓硫酸，混匀后放置20 min[10，11]。用紫外分光光度计在490 nm波长处测定其吸光度。以标准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，建立回归方程。

1.2.2  酸荔枝核多糖的提取与纯化  称取酸荔枝核粉10 g，设置单因素试验，考察提取时间、提取温度、乙醇体积分数对多糖提取率的影响。各因素水平设置如下：①提取时间：2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 h;②提取温度：40、50、60、70、80 ℃;③乙醇体积分数：50%、60%、70%、80%、90%。回流结束后过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩至一定体积，再分别用氯仿，乙酸乙酯萃取后，即得酸荔枝核多糖粗品。以多糖粗品的提取率为评价指标，选出最佳提取条件。

将所得的酸荔枝核多糖粗品放在锥形瓶中，加入适量的活性炭，混匀后，静置过夜，得脱色后的酸荔枝核多糖粗品。加入体积为前一步骤所得的多糖水溶液体积1/4的氯仿，再加入体积为氯仿体积1/4的正丁醇，将混合物剧烈震荡20～30 min，通过分液漏斗除去水层和溶剂层之间的变性蛋白，如此重复3次，将蛋白质除去，即得到多糖样品。将得到多糖样品置于150 mL锥形瓶中，加入1 mol/L的硫酸2.00 mL。充分摇匀后放入沸水浴2 h。冷却后，再将水解液转入100 mL的容量瓶并加去离子水定容至刻度。分别精确量取样品液40 μL 5份，分别置于25 mL比色管，以去离子水补充至2.0 mL加1.5 mL 5.0%苯酚溶液，再加7.5 mL浓硫酸，混均后放置20 min。用紫外分光光度计于490 nm处，测其吸光度，由回归方程计算酸荔枝核多糖的含量。

1.2.3  酸荔枝核多糖对·OH的清除效果  参照Fenton反应法产生·OH自由基[12]。H2O2/Fe2+体系可通过Fenton反应产生自由基，化学反应为：H2O2+Fe2+→·OH+ OH- +Fe2+。用·OH氧化水杨酸产生有色物质，该产物在510 nm波长有强吸收峰，若体系中加入·OH清除的物质，就会减少有色物质的产生，吸收度降低。吸光度越低，清除·OH效果越好。

取5支试管并依次编号，每支各加9 mmol/L的FeSO4 100 μL，9mol/L水杨酸-乙醇溶液100 μL，按试管编号各加不同浓度的酸荔枝核多糖溶液，并用去离子水加至2 mL，最后加入8.80 mmol/L的H2O2 100 μL启动反应，在室温下反应1 h，并与空白液比较，于510 nm处测其吸光度，计算其清除率，得到被测物对·OH的清除效果。

清除率=[（A0-As）/A0]×100%

式中，A0为空白对照液的吸光度;As为加入酸荔枝核多糖提取液处理的吸光度。

2  结果与分析

2.1  标准曲线

绘制得到的标准曲线见图1，回归方程为A=0.006 87C+0.016 83，R2=0.999 2，说明在所取浓度范围内，葡萄糖溶液浓度和吸光度呈良好的线性关系。

2.2  酸荔枝核中多糖提取的结果

2.2.1  提取时间对提取率的影响  提取时间对酸荔枝核多糖提取率的影响结果见图2。由图2可知，随着提取时间的延长，酸荔枝核多糖提取率先上升然后下降。可能是由于时间过长导致杂质过多。加热时间过长也可能使多糖分解。故最佳提取时间为3.0 h。

2.2.2  提取温度对提取率的影响  温度对酸荔枝核多糖提取率的影响结果见图3。由图3可见，回流温度低于70 ℃时，提取率随温度的升高而升高，温度高于70 ℃时提取率有所下降。可能是是由于过高的温度导致多糖的降解，从而不利于提高提取率，故最佳提取温度为70 ℃。

2.2.3  乙醇体积分数对提取率的影响  酸荔枝核多糖提取率随乙醇体积分数变化的结果见图4。由图4可知，多糖提取率随乙醇体积分数的升高呈先上升后下降的趋势。乙醇体积分数为70%时，提取率最大。乙醇体积分数过高，可能会使多糖的溶出变得困难，不利于提取，故乙醇的最佳体积分数为70%。

根据单因素试验结果，在最优试验条件下，取100 g酸荔枝核过40目筛的细粉，按照“1.2.2”的方法分别用移液器量取40、40、40、400、400、400 μL样品液6份，测定样品的吸光度，根据回归方程计算荔枝核多糖的平均提取率为5.72%，RSD为2.494%。

2.3  酸荔枝核多糖对·OH的清除作用

酸荔枝核多糖对·OH的清除结果见图5。从图5可以看出，·OH的清除率随体系中酸荔枝核多糖浓度的增加而上升。提取的酸荔枝核多糖对·OH有一定的清除作用，浓度为0.4 g/L时，对·OH的清除率达到70%。

3  结论

试验以野生酸荔枝核为原料，考察了各因素对多糖提取率的影响。通过单因素试验确定了酸荔枝核多糖的最佳提取工艺为提取温度70 ℃，提取时间3.0 h，乙醇体积分数70%，此条件下多糖提取率为5.72%。体外试验表明，酸荔枝核多糖对·OH具有明显的清除作用，为进一步开发酸荔枝的药用价值提供科学依据。

参考文献：

[1] 陆永旺，劳玲玲，陈华妮，等.酸荔枝核黄酮体外抗氧化作用的研究[J].中国酿造，2013，32（7）：104-106.

[2] 葛如意，卢文菊，张  萃.荔枝核抗肿瘤及其作用机制研究进展[J].广东药学院学报，2012，28（6）：693-696.

[3] 袁  红.荔枝核多糖提取物对四氧嘧啶致糖尿病小鼠降糖作用[J].健康研究，2010，30（4）：252-255.

[4] 周丽明，张  勇，林国卫，等.葛根多糖提取条件的优化及其抗氧化活性的研究[J].湖北农业科学，2012，51（19）：4344-4347.

[5] 李艳菊，李琴山，田  硕，等.贵州产天冬中多糖的提取及其抗氧化活性的研究[J].湖北农业科学，2012，51（7）：1436-1437.

[6] 黄凤香，廖  迎，曾建红，等.广西莪术多糖水提工艺优化及不同产地多糖含量测定[J].湖北农业科学，2013，52（16）：3947-3950.

[7] 董海丽，刘  红.湿法超微粉碎提取石斛多糖的研究[J].北方园艺，2013，（15）：150-152.

[8] 左绍远，钱金栿.红花蜂花粉多糖提取工艺的优化及其抗氧化性质研究[J].湖北农业科学，2013，52（7）：1631-1633.

[9] 靳学远，刘  红，秦  霞.超声波辅助提取壶瓶枣多糖工艺优化[J].湖北农业科学，2013，52（14）：3386-3387.

[10] 张惟杰.复合多糖生化研究技术[M].杭州：浙江大学出版社， 1999.

[11] 崔红华，李超英，张大方，等.用苯酚-硫酸法测定人参多糖含量的研究[J].中国中医药信息杂志，1999，6（2）：24-26.

[12] 袁建梅，吕馨馨，王春峰.合欢花多糖的提取工艺及其抗氧化活性研究[J].湖北农业科学，2013，52（11）：2625-2628.

1.2.3  酸荔枝核多糖对·OH的清除效果  参照Fenton反应法产生·OH自由基[12]。H2O2/Fe2+体系可通过Fenton反应产生自由基，化学反应为：H2O2+Fe2+→·OH+ OH- +Fe2+。用·OH氧化水杨酸产生有色物质，该产物在510 nm波长有强吸收峰，若体系中加入·OH清除的物质，就会减少有色物质的产生，吸收度降低。吸光度越低，清除·OH效果越好。

取5支试管并依次编号，每支各加9 mmol/L的FeSO4 100 μL，9mol/L水杨酸-乙醇溶液100 μL，按试管编号各加不同浓度的酸荔枝核多糖溶液，并用去离子水加至2 mL，最后加入8.80 mmol/L的H2O2 100 μL启动反应，在室温下反应1 h，并与空白液比较，于510 nm处测其吸光度，计算其清除率，得到被测物对·OH的清除效果。

清除率=[（A0-As）/A0]×100%

式中，A0为空白对照液的吸光度;As为加入酸荔枝核多糖提取液处理的吸光度。

2  结果与分析

2.1  标准曲线

绘制得到的标准曲线见图1，回归方程为A=0.006 87C+0.016 83，R2=0.999 2，说明在所取浓度范围内，葡萄糖溶液浓度和吸光度呈良好的线性关系。

2.2  酸荔枝核中多糖提取的结果

2.2.1  提取时间对提取率的影响  提取时间对酸荔枝核多糖提取率的影响结果见图2。由图2可知，随着提取时间的延长，酸荔枝核多糖提取率先上升然后下降。可能是由于时间过长导致杂质过多。加热时间过长也可能使多糖分解。故最佳提取时间为3.0 h。

2.2.2  提取温度对提取率的影响  温度对酸荔枝核多糖提取率的影响结果见图3。由图3可见，回流温度低于70 ℃时，提取率随温度的升高而升高，温度高于70 ℃时提取率有所下降。可能是是由于过高的温度导致多糖的降解，从而不利于提高提取率，故最佳提取温度为70 ℃。

2.2.3  乙醇体积分数对提取率的影响  酸荔枝核多糖提取率随乙醇体积分数变化的结果见图4。由图4可知，多糖提取率随乙醇体积分数的升高呈先上升后下降的趋势。乙醇体积分数为70%时，提取率最大。乙醇体积分数过高，可能会使多糖的溶出变得困难，不利于提取，故乙醇的最佳体积分数为70%。

根据单因素试验结果，在最优试验条件下，取100 g酸荔枝核过40目筛的细粉，按照“1.2.2”的方法分别用移液器量取40、40、40、400、400、400 μL样品液6份，测定样品的吸光度，根据回归方程计算荔枝核多糖的平均提取率为5.72%，RSD为2.494%。

2.3  酸荔枝核多糖对·OH的清除作用

酸荔枝核多糖对·OH的清除结果见图5。从图5可以看出，·OH的清除率随体系中酸荔枝核多糖浓度的增加而上升。提取的酸荔枝核多糖对·OH有一定的清除作用，浓度为0.4 g/L时，对·OH的清除率达到70%。

3  结论

试验以野生酸荔枝核为原料，考察了各因素对多糖提取率的影响。通过单因素试验确定了酸荔枝核多糖的最佳提取工艺为提取温度70 ℃，提取时间3.0 h，乙醇体积分数70%，此条件下多糖提取率为5.72%。体外试验表明，酸荔枝核多糖对·OH具有明显的清除作用，为进一步开发酸荔枝的药用价值提供科学依据。

参考文献：

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[11] 崔红华，李超英，张大方，等.用苯酚-硫酸法测定人参多糖含量的研究[J].中国中医药信息杂志，1999，6（2）：24-26.

[12] 袁建梅，吕馨馨，王春峰.合欢花多糖的提取工艺及其抗氧化活性研究[J].湖北农业科学，2013，52（11）：2625-2628.

1.2.3  酸荔枝核多糖对·OH的清除效果  参照Fenton反应法产生·OH自由基[12]。H2O2/Fe2+体系可通过Fenton反应产生自由基，化学反应为：H2O2+Fe2+→·OH+ OH- +Fe2+。用·OH氧化水杨酸产生有色物质，该产物在510 nm波长有强吸收峰，若体系中加入·OH清除的物质，就会减少有色物质的产生，吸收度降低。吸光度越低，清除·OH效果越好。

取5支试管并依次编号，每支各加9 mmol/L的FeSO4 100 μL，9mol/L水杨酸-乙醇溶液100 μL，按试管编号各加不同浓度的酸荔枝核多糖溶液，并用去离子水加至2 mL，最后加入8.80 mmol/L的H2O2 100 μL启动反应，在室温下反应1 h，并与空白液比较，于510 nm处测其吸光度，计算其清除率，得到被测物对·OH的清除效果。

清除率=[（A0-As）/A0]×100%

式中，A0为空白对照液的吸光度;As为加入酸荔枝核多糖提取液处理的吸光度。

2  结果与分析

2.1  标准曲线

绘制得到的标准曲线见图1，回归方程为A=0.006 87C+0.016 83，R2=0.999 2，说明在所取浓度范围内，葡萄糖溶液浓度和吸光度呈良好的线性关系。

2.2  酸荔枝核中多糖提取的结果

2.2.1  提取时间对提取率的影响  提取时间对酸荔枝核多糖提取率的影响结果见图2。由图2可知，随着提取时间的延长，酸荔枝核多糖提取率先上升然后下降。可能是由于时间过长导致杂质过多。加热时间过长也可能使多糖分解。故最佳提取时间为3.0 h。

2.2.2  提取温度对提取率的影响  温度对酸荔枝核多糖提取率的影响结果见图3。由图3可见，回流温度低于70 ℃时，提取率随温度的升高而升高，温度高于70 ℃时提取率有所下降。可能是是由于过高的温度导致多糖的降解，从而不利于提高提取率，故最佳提取温度为70 ℃。

2.2.3  乙醇体积分数对提取率的影响  酸荔枝核多糖提取率随乙醇体积分数变化的结果见图4。由图4可知，多糖提取率随乙醇体积分数的升高呈先上升后下降的趋势。乙醇体积分数为70%时，提取率最大。乙醇体积分数过高，可能会使多糖的溶出变得困难，不利于提取，故乙醇的最佳体积分数为70%。

根据单因素试验结果，在最优试验条件下，取100 g酸荔枝核过40目筛的细粉，按照“1.2.2”的方法分别用移液器量取40、40、40、400、400、400 μL样品液6份，测定样品的吸光度，根据回归方程计算荔枝核多糖的平均提取率为5.72%，RSD为2.494%。

2.3  酸荔枝核多糖对·OH的清除作用

酸荔枝核多糖对·OH的清除结果见图5。从图5可以看出，·OH的清除率随体系中酸荔枝核多糖浓度的增加而上升。提取的酸荔枝核多糖对·OH有一定的清除作用，浓度为0.4 g/L时，对·OH的清除率达到70%。

3  结论

试验以野生酸荔枝核为原料，考察了各因素对多糖提取率的影响。通过单因素试验确定了酸荔枝核多糖的最佳提取工艺为提取温度70 ℃，提取时间3.0 h，乙醇体积分数70%，此条件下多糖提取率为5.72%。体外试验表明，酸荔枝核多糖对·OH具有明显的清除作用，为进一步开发酸荔枝的药用价值提供科学依据。

参考文献：

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[7] 董海丽，刘  红.湿法超微粉碎提取石斛多糖的研究[J].北方园艺，2013，（15）：150-152.

[8] 左绍远，钱金栿.红花蜂花粉多糖提取工艺的优化及其抗氧化性质研究[J].湖北农业科学，2013，52（7）：1631-1633.

[9] 靳学远，刘  红，秦  霞.超声波辅助提取壶瓶枣多糖工艺优化[J].湖北农业科学，2013，52（14）：3386-3387.

[10] 张惟杰.复合多糖生化研究技术[M].杭州：浙江大学出版社， 1999.

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[12] 袁建梅，吕馨馨，王春峰.合欢花多糖的提取工艺及其抗氧化活性研究[J].湖北农业科学，2013，52（11）：2625-2628.