FOLFOX方案化疗对结直肠癌患者免疫细胞数的影响分析

孔 炯

江苏省常熟市第二人民医院肿瘤内科，江苏常熟 215500

结直肠癌是恶性肿瘤中常见的一种疾病，由于经济的发展、人们生活水平的改善[2]，间接提高了结直肠癌的患病率。癌细胞转移对结直肠癌患者的临床预后具有重要影响，患者免疫功能情况对肿瘤的进展、预后也有一定影响。化疗治疗能够明显提高结直肠癌患者的生存率，提高其生活水平。但是化疗治疗的同时还会产生一定的不良反应，导致患者免疫功能受到一定影响。若是免疫功能出现持续性降低，将增加肿瘤的复发率及转移率。现择取2011年6月—2014年1月期间在该院接受治疗63 例结直肠癌患者，进一步了解FOLFOX 方案化疗对其免疫细胞数的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

择取在该院接受治疗63 例结直肠癌患者作为实验组，均通过病理检查得以确诊。结合国际TNM 分期标准把结直肠癌患者予以分期：I 期者3 例，II 期者10 例，III 期者32 例，IV期者18例。包括35 例女性患者，28 例男性患者。年龄均在27~79 岁之间，平均年龄（46.87±4.21）岁。同时择取同期体检的63 例健康人作为对照组，其中32 例女性患者，31 例男性患者。年龄均在25~77 岁之间，平均年龄（44.87±3.96）岁。全部受检者均没有免疫系统疾病，没有应用免疫抑制剂，两组患者的临床一般资料之间，差异无统计学意义（P>0.05），研究存在可比性。

1.2 方法

FOLFOX 方案化疗：第1 天，奥沙利铂，剂量为85 mg/m2，予以静脉滴注；亚叶酸钙，剂量为400 mg/m2，进行静脉滴注；氟尿嘧啶，剂量为400 mg/m2，进行静脉推注，氟尿嘧啶2.4 g/m2持续静脉滴注46 h。2 周1 次，2 次为1 个疗程。

1.3 检测方法

取经肝素抗凝处理的新鲜外周血标本，剂量为100 μL，溶入单克隆抗体（抗CD16+56PE、抗CD8PE、抗CD4PE、抗CD3FITC），混合均匀，室温避光20 min 染色。再加入1.5 mL 红细胞裂解液，当混合均匀后室温、避光静置10 min，使红细胞破坏。以250×g的标准离心5 min，然后弃上清液。每管溶入2.0 mL（浓度为0.1%）叠氮钠的磷酸盐缓冲液[2]，混合均匀，以100×g 的标准离心5 min，弃上层清液。再加入1.0 mL PBS，混合均匀，2 h 内上机检测。通过流式细胞仪Cell Quest 软件（型号为FACSCan）取得数据并分析。将FSC2H/SSC2H 设定为淋巴细胞门，用IgG/FITC/IgGaPE 明确FL1、FL2 的非特异性结合水平[3]。同时，调整SSC、FSC 的电压；FL22FL1%荧光补偿、FL12FL2%荧光补偿；FSC 阈值。每管得到1万个细胞。

将对照组63 例健康者的外周血细胞数的水平作为标准，评判实验组患者治疗前、后外周血细胞的变化情况。

1.4 统计方法

选用SPSS13.0 统计学软件对试验数据实施系统化处理，通过均数±、平均数（±s）表示计量数据，运用χ2对试验所得计数数据进行检验，运用t 对所得计量数据进行检验。

2 结果

经化疗治疗后，实验组患者在1 周、2 周、4 周时的外周血CD4+、CD3+以及CD4+/CD8+、NK 细胞数量、CD8+细胞比值之间差异无统计学意义（P>0.05）。实验组患者外周血CD4+、CD3+以及CD4+/CD8+、NK 细胞数量明显低于对照组，但是CD8+细胞比值明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 两组患者外周血细胞数的变化情况分析表[n=63，（±s）]

表1 两组患者外周血细胞数的变化情况分析表[n=63，（±s）]

对照组实验组分组疗前疗后1 周疗后2 周疗后4 周时间70.3±4.2 61.8±6.4 56.7±10.2 55.8±11.1 54.8±12.8 CD3+（%）37.3±2.8 28.1±3.2 39.6±6.8 39.2±10.3 38.4±11.1 CD4+（%）25.5±1.8 26.9±3.0 29.8±9.4 29.6±10.4 28.4±8.8 CD8+（%）1.6±0.3 1.3±0.2 1.2±0.8 1.2±0.6 1.2±0.2 20.8±2.7 18.9±5.5 17.4±8.9 17.2±7.5 16.5±6.9 CD4+/CD8+（%） CD16+56+（%）

实验组结直肠癌不同分期患者的CD4+/CD8+细胞比值、NK细胞数量、CD4+细胞、CD3+细胞与对照组相比明显减少；CD8+细胞值明显增加，差异有统计学意义（P<0.05）。I 期-IV 期结直肠癌患者的NK 细胞数量、CD4+/CD8+细胞比值、CD4+细胞、CD3+细胞逐渐减少，CD8+细胞比例逐渐上升，但是I 期与II 期结直肠癌患者之间；III 期与IV 期结直肠癌患者之间，差异无统计学意义（P>0.05）。III 期、IV 期结直肠癌患者NK 细胞数量、CD4+/CD8+细胞比值、CD4+细胞、CD3+细胞明显低于I 期、II 期；CD8+细胞比例明显高于I 期、II 期，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

3 讨论

机体抗肿瘤免疫机制相对复杂[4-5]，通常抗肿瘤免疫主要是细胞免疫，但体液免疫也发挥了重要作用。该次研究中，结直肠癌患者外周血内CD4+/CD8+细胞比值、CD4+、CD3+均显著小于健康者，但是CD8+细胞比例显著高于健康者，这与以往研究结果相一致[6]。由此表明，结直肠癌患者免疫功能低于健康者水平，其机制可能受到肿瘤发生、发展期间分泌过多的免疫抑制因子有一定关系。结直肠癌患者通过FOLFOX 方案化疗前、化疗后1周、2周、4 周，外周血淋巴细胞亚群、NK 细胞活性没有明显差异，可见该种方案在对肿瘤病灶转移治疗有效的情况下，对患者机体免疫功能没有产生显著影响。随着结直肠癌患者癌细胞的发展，从I期-IV 期患者机体外周细胞免疫功能不断减少[7]，I 期、II 期与III期、IV 期患者之间明显差异性，说明结直肠癌患者免疫功能与病理分期存在负相关性，患者病理分期越晚，免疫功能越差。反之，患者免疫功能越差[8]，说明肿瘤病理分期越晚、临床预后越差。所以。患者免疫功能能够间接说明患者的预后情况。结直肠癌患者NK 细胞数量显著性小于健康者，同时与病理分期有一定关联，病理分期越晚，外周血NK 细胞数量越低，关键原因可能是因为消灭肿瘤细胞期间，耗费了大量的NK 细胞，肿瘤细胞所产生的免疫抑制因子让NK 活性减弱，NK 细胞将在血液循环过程中再分布。该次研究充分验证了结直肠癌患者外周血细胞免疫功能减弱，也就是机体抗肿瘤免疫功能衰弱，致使肿瘤细胞脱离了免疫监视持续生长。所以，通过流式细胞仪对患者外周血T 淋巴细胞、NK 细胞等指标进行检测时，可用于监测结直肠癌患者的免疫状态，说明结直肠癌患者的免疫辅助治疗重点在于提高NK 细胞、CD4+、CD3+数量，增强患者免疫功能。

表2 两组患者外周血细胞数的变化情况分析表（±s）

对照组（n=63）实验组I 期（n=3）II 期（n=10）III 期（n=32）IV 期（n=18）分组65.21±6.26 58.26±5.56 56.26±6.33 53.16±8.16 48.66±5.36 CD3+（%）32.21±8.02 28.81±4.06 26.55±6.53 23.81±5.57 18.22±3.57 CD4+（%）20.31±4.56 26.36±5.26 28.66±6.46 30.81±5.28 35.46±6.36 CD8+（%）1.62±0.26 1.12±0.46 0.94±0.25 0.78±0.13 0.51±0.20 18.46±5.12 17.13±2.42 15.76±1.93 12.46±4.51 10.26±3.56 CD4+/CD8+（%） CD16+56+（%）

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