黑素细胞移植治疗甲状腺功能异常白癜风的临床观察

李伟 洪为松 傅丽芳 尉晓冬 许爱娥

黑素细胞移植治疗甲状腺功能异常白癜风的临床观察

李伟 洪为松 傅丽芳 尉晓冬 许爱娥

目的探讨自体培养黑素细胞移植治疗甲状腺功能异常白癜风的临床疗效。方法白癜风患者分为2组,甲状腺功能异常组30例和无甲状腺功能异常组30例。负压吸疱获取患者正常表皮片,体外培养黑素细胞,经2～5代体外培养,受皮区应用超脉冲CO2激光磨削去表皮后进行黑素细胞移植。所有患者均至少跟踪观察6个月。结果30例甲状腺功能异常患者中,平均复色47%,7例复色面积超过90%,9例复色面积为50%～89%,53.3%达到＞50%的复色。无甲状腺功能异常组平均复色75%,13例达到＞90%的复色,11例有50%～89%的复色,痊愈率与有效率分别为43.3%、80%,均较甲状腺功能异常组疗效明显,两组间差异有统计学意义(均P＜0.05)。移植部位位于面颈部、移植面积＞20 cm2时,组间有效率差异也有统计学意义(均P＜0.05)。表皮吸疱于腰部皮肤的痊愈率与有效率均为最差。结论临床或亚临床的甲状腺异常会对白癜风的自体黑素细胞移植疗效产生负面影响。

白癜风;黑素细胞;自体移植;甲状腺

白癜风治疗困难,通过自体培养并移植黑素细胞,能够为白癜风白斑区域提供新的黑素细胞来源,是一种治疗稳定期白癜风患者的有效手段之一[1-2]。尽管本病病因不明,但多倾向于自身免疫学说。自身免疫性甲状腺疾病同为自身免疫性疾病,与白癜风的相关性已被证实[3-4]。我们探讨伴甲状腺功能异常白癜风患者的自体培养黑素细胞移植治疗的临床疗效,现将结果报道如下。

对象与方法

一、对象

2012年2月至2013年6月,我院白癜风门诊患者60例,均符合文献[5]诊断标准。甲状腺功能包括,促甲状腺激素(TSH)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4),抗甲状腺过氧化物酶抗体(抗TPOAb),激素和抗体水平超过正常上限值被认为是异常。上述指标中的一项及一项以上指标异常则被认为甲状腺指标异常。将患者分为2组,甲状腺功能异常组30例中男9例,女21例,年龄10～55岁,平均(28.6±9.8)岁;9例为节段型,21例为寻常型。无甲状腺功能异常组为同期该门诊进行黑素细胞移植且无伴发甲状腺异常的患者,男16例,女14例,平均(23.6±12.6)岁;18例为节段型,12例为寻常型。移植部位分为面颈、躯干、四肢和手足。排除标准为伴有糖尿病、类风湿性关节炎、斑秃等其他自身免疫性疾病。两组在性别、年龄、病程上差异无统计学意义(P＞0.05),具有可比性。病期参照白癜风活动程度指标(VIDA)评分标准[6],均为稳定期白癜风患者,病程1～30年,病情稳定均在6个月以上。试验方案经本院伦理委员会批准,所有患者均签署知情同意书。

二、试剂和仪器

F12基础培养基、胎牛血清、谷氨酰胺、庆大霉素、0.25%胰酶、0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)、0.05%胰酶-EDTA、D-Hank液、基因素(geneticin)均为美国Gibco公司产品。霍乱毒素(CT)、异丁基甲基黄嘌吟(IBMX)均为美国Sigma公司产品。人重组碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)为美国Pepro-Tech公司产品。倒置显微镜和立体显微镜购于日本Olympus公司,超脉冲CO2激光机为美国科医人公司产品。

三、方法

1.表皮细胞悬液制备和黑素细胞培养[7]：当细胞数量达到移植要求时,将黑素细胞从培养瓶上消化下来,离心收集黑素细胞悬浮于F12培养基中备用。

2.黑素细胞移植：用复方利多卡因软膏涂于移植区皮肤表面作局部麻醉,用超脉冲CO2激光磨削(能量225 mJ/s)去除表皮层,根据移植白斑区面积按6×104～1×105细胞/cm2收集黑素细胞,用巴氏吸管将细胞悬液均匀接种在去表皮层的移植区,无菌凡士林纱布覆盖,外敷含F12培养液湿纱布,包扎固定,嘱咐患者平卧休息1 h,7～10 d后去除纱布,1个月后观察疗效,所有患者均至少跟踪观察6个月。

3.疗效判断：治疗前后及治疗过程中均拍照,用Adobe Photoshop7.0图像软件系统测复色面积。疗效标准：痊愈为色素恢复90%～100%,显效为色素恢复50%～89%,好转为色素恢复10%～49%,无效为色素恢复＜10%。痊愈率=痊愈例数/总例数×100%。有效率=(痊愈+显效)例数/总例数×100%。

4.统计学分析：使用SPSS17.0统计软件分析,各组间差异比较采用χ2检验,α=0.05。

结 果

一、细胞培养

从患者表皮中分离到的黑素细胞数量为(0.47±0.25)×104/cm2。表皮细胞悬液接种至培养瓶2 h后细胞开始贴壁。在第3天加入基因素,3～4 d后即可选择性去除角质形成细胞和成纤维细胞而获得纯黑素细胞。在经过15～30 d(平均24.2 d)的培养后进行传代,接种的细胞均为第2～5代黑素细胞,用于移植的细胞数量平均为(5.6±3.4)×106个,至移植时黑素细胞的数量增加44～315倍。

二、移植疗效比较

除无甲状腺功能异常组1例患者出现移植区皮肤红肿且红肿消退后白斑区无复色外,余患者均无过敏、感染等不良反应。甲状腺功能异常组4例患者供皮区出现同形反应,平均复色17.5%,无甲状腺功能异常组1例患者伴供皮区同形反应,复色70%。60例稳定期白癜风患者,移植6个月后随访,甲状腺功能异常组30例平均复色47%,7例复色面积超过90%,痊愈率为23.3%,9例复色面积为50%～89%,有效率53.3%,治疗面积平均为48.2 cm2,最大面积达120 cm2。无甲状腺功能异常组30例平均复色75%,13例达到＞90%的复色,11例有50%～89%的复色,痊愈率与有效率分别为43.3%、80%,平均治疗面积为(52.7±37.3)cm2,治疗最大面积为150 cm2。

1.两组间移植疗效比较：甲状腺功能异常组30例痊愈7例,显效9例,好转5例,无效9例,有效率与痊愈率分别为53.3%、23.3%,无甲状腺功能异常组30例痊愈13例,显效11例,好转2例,无效4例,有效率与痊愈率分别为80%、43.3%,均高于甲状腺功能异常组患者。两组疗效间、有效率与痊愈率比较,差异均有统计学意义(P＜0.05)。由于无甲状腺功能异常组平均秩次为25.87＜甲状腺功能异常组的平均秩次35.13,故无甲状腺功能异常组的疗效明显好于甲状腺异常治疗组。

2.移植部位：见表1。甲状腺功能异常组内各移植部位间疗效差异、有效率与痊愈率差异均无统计学意义(均P＞0.05)。两组间不同部位比较中,面颈部有效率差异有统计学意义(P＜0.05),且无甲状腺功能异常组有效率明显高于甲状腺功能异常组(92.9%比42.9%),而痊愈率差异无统计学意义(P＞0.05)。躯干部位移植疗效比较中,有效率与痊愈率差异均无统计学意义(均P＞0.05)。四肢与手足因入选病例较少未进行统计学分析。

3.移植面积：甲状腺功能异常组移植面积≤20 cm2的有效率为62.5%,痊愈率为25%;面积＞20 cm2有效率50%,痊愈率22.7%。面积≤ 20 cm2的有效率与痊愈率均高于面积＞20 cm2,但组内移植面积间有效率与痊愈率差异均无统计学意义(均P＞0.05)。无甲状腺功能异常组移植面积≤20 cm2的皮损,有效率与痊愈率分别为75%和75%,两组间有效率和痊愈率比较,差异均无统计学意义(均P＞0.05);面积 ＞20 cm2的白斑,有效率为80.8%,痊愈率为38.5%,两组间有效率差异有统计学意义(均P＜0.05),无甲状腺功能异常组高于甲状腺功能异常组,而痊愈率无统计学意义(P＞0.05)。

4.吸疱部位：在白癜风患者正常皮肤处吸疱制备表皮细胞悬液,8例甲状腺功能异常组患者取自腹部正常皮肤,13例取自臀部,9例取自腰部皮肤,痊愈率分别为25%、30.8%、11.1%,有效率分别为75%、53.8%、33.3%,吸疱于腰部皮肤的痊愈率与有效率均最差。甲状腺功能异常组内各吸疱部位疗效、痊愈率与有效率差异无统计学意义(均P＞0.05)。无甲状腺功能异常组8例取自腹部,18例取自臀部,4例取自腰部皮肤,痊愈率分别为37.5%、44.4%、50%;有效率则 75%、83.3%、75%,两组间相同吸疱部位间疗效差异均无统计学意义(均P＞0.05)。

5.白癜风类型：见表2。30例甲状腺功能异常组患者中节段型白癜风有效率66.7%,痊愈率33.3%;寻常型白癜风有效率47.6%,痊愈率19.0%。节段型白癜风的有效率、痊愈率均高于寻常型白癜风,但两者的有效率与痊愈率差异无统计学意义(均P＞0.05)。两组间相同白癜风类型间比较,痊愈率与有效率均无统计学意义(均P＞0.05)。

6.甲状腺功能异常组复色水平与甲状腺功能和抗体水平的相关分析：见表3。TSH水平与抗TPOAb水平存在正相关(r=0.396),且相关性具有统计学意义(P＜0.05),余各项指标间相关性差异均无统计学意义。

讨 论

白癜风发病率约为1%～2%[8],易伴发甲状腺异常(桥本甲状腺炎,Graves病,甲状腺功能减退等)。Pagovich等[9]报告25%白癜风患者伴发甲状腺异常,常规筛查甲状腺功能已为大多数患者所接受[10-13]。我们使用体外培养的自体黑素细胞移植治疗了30例伴发甲状腺异常的稳定期白癫风患者和30例甲状腺功能正常移植患者,30例甲状腺功能异常组患者有效率与痊愈率分别为53.3%、23.3%,而无甲状腺功能异常组这一比例分别为80%、43.3%,均明显高于甲状腺功能异常组患者。无甲状腺功能异常组平均复色75%也明显高于甲状腺功能异常组的47%,可能与二者均存在自身免疫异常,影响移植疗效有关。甲状腺功能异常组中53.3%的患者达到了50%以上的复色,较无甲状腺功能异常组有着较为明显的差距,与洪为松等的报道有较大差距[1-2，14]。上述结果均表明,临床或亚临床的甲状腺异常会对白癜风的自体黑素细胞移植疗效产生负面影响。

我们的资料显示,面颈部移植疗效无甲状腺功能异常组显著高于甲状腺功能异常组,且差异有统计学意义,其余部位疗效虽有差异,但未发现有统计学意义。对于白癜风皮损移植面积,甲状腺功能异常组未发现其与移植疗效相关,但当白斑＞20 cm2时,两组间有效率差异明显(50.0%比80.8%)。此外,表皮吸疱部位和白癜风的类型的各项比较均未发现差异有统计学意义,但若吸疱于腰部皮肤,其痊愈率与有效率均最差,对此结果尚需进一步研究。

表1 白癜风患者不同部位皮损移植疗效比较(例)

表2 两组不同白癜风类型间比较(例)

表3 甲状腺功能异常组复色水平与甲状腺功能和抗体水平的Pearson相关分析

[1]Hong WS，Hu DN，Qian GP，et al.Treatment of vitiligo in children and adolescents by autologous cuhured pure melanocytes transplantation with comparison of efficacy to results in adults[J].J Eur Acad Dermatol Venereol，2011，25(5):538-543.

[2]Chen YF，Yang PY，Hu DN，et al.Treatment of vitiligo by transplantation of cultured pure melanocyte suspension:analysis of 120 cases[J].J Am Acad Dermatol，2004，51(1):68-74.

[3]Cho SB，Kim JH，Cho S，et al.Vitiligo in children and adolescents:association with thyroid dysfunction[J].J Eur Acad Dermatol Venereol，2011，25(1):64-67.

[4]Williamson S，Greene SA.Incidence of thyrotoxicosis in childhood:a national population based study in the UK and Ireland[J].Clin Endocrinol(Oxf)，2010，72(3):358-363.

[5]中国中西医结合学会皮肤性病专业委员会色素病学组.白癜风临床分型及疗效标准(2003年修订稿)[J].中华皮肤科杂志，2004，37(7):440.

[6]Njoo MD，Das PK，Bos JD，et al.association of the Kobner phenomenon with disease activity and therapeutic responsiveness in vitiligo vulgaris[J].Arch Dermatol，1999，135(4):407-413.

[7] 洪为松，傅丽芳，尉晓冬，等.黑素细胞个体化培养体系的建立及应用[J].中华皮肤科杂志，2011，44(9):618-622.

[8]Mulekar SV.Melanocyte-keratinocyte cell transplantation for stable vitiligo[J].Int J Dermatol，2003，42(2):132-136.

[9]Pagovich OE，Silverberg JI，Freilich E，et al.Thyroid abnormalities in pediatric patients with vitiligo in New York City[J].Cutis，2008，81(6):463-466.

[10]Kroon MW，Joore IC，Wind BS，et al.Low yield of routine screening for thyroid dysfunction in asymptomatic patients with vitiligo[J].Br J Dermatol，2012，166(3):532-538.

[11]Vrijman C，Kroon MW，Limpens J，et al.The prevalence of thyroid disease in patients with vitiligo:a systematic review[J].Br J Dermatol，2012，167(6):1224-1235.

[12]Uncu S，Yayli S，Bahadir S，et al.Relevance of autoimmune thyroiditis in children and adolescents with vitiligo[J].Int J Dermatol，2011，50(2):175-179.

[13]Kakourou T，Kanaka-Gantenbein C，Papadopoulou A，et al.Increased prevalence of chronic autoimmune(Hashimoto′s)thyroiditis in children and adolescents with vitiligo[J].J Am Acad Dermatol，2005，53(2):220-223.

[14] 洪为松，傅丽芳，尉晓冬，等.自体黑素细胞移植治疗243例面颈部白癜风疗效及相关因素分析[J].中华移植杂志，2011，5(4):277-281.

2013-10-08)

(本文编辑:吴晓初)

Autologous melanocyte transplantation for the treatment of vitiligo in patients with abnormal thyroid function:a clinical observation

Li Wei，Hong Weisong，Fu Lifang，Wei Xiaodong，Xu Aie.Department of Dermatology，Affiliated Third People′s Hospital of Hangzhou，Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou 310009，China

Xu Aie，Email:xuaiehz@msn.com

ObjectiveTo evaluate the therapeutic efficacy of autologous melanocyte transplantation for the treatment of vitiligo in patients with abnormal thyroid function.MethodsA total of 60 patients with vitiligo were enrolled in this study，including 30 with abnormal thyroid function and 30 without.Epidermal sheets were obtained by suction blister biopsy from the normal skin of all the patients followed by melanocyte isolation and culture.After 2-5 passages of subculture，the melanocytes were transplanted onto vitiliginous lesions，which were abraded previously by ultra-pulsed CO2laser，in the corresponding patients.All the patients were followed for 6-12 months.ResultsOf the 30 patients with abnormal thyroid function，7 patients achieved more than 90%repigmentation，9 patients 50%-89%repigmentation，53.3%more than 50%repigmentation，with the average repigmentation rate being 47%within 6 months after the transplantation.Meanwhile，13 out of the 30 patients without abnormal thyroid function showed more than 90%repigmentation，11 showed 50%-89%repigmentation，with the average repigmentation rate being 75%.Both the cure rate and response rate were significantly higher in the patients without abnormal thyroid function than in those with(cure rate，43.3%vs.23.3%，P＜ 0.05;response rate，80%vs.53.3%，P＜ 0.05).Significant differences were also found in the response rate for lesions on the face or neck and for those sized more than 20 cm2between the two groups of patients(bothP＜0.05).The lesions transplanted with epidermal melanocytes from the waist exhibited the lowest cure rate and response rate.ConclusionClinical or subclinical thyroid dysfunction may have a negative impact on the efficacy of autologous melanocyte transplantation in vitiligo.

Vitiligo;Melanocytes;Autologous transplantation;Thyroid

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2014.05.009

浙江省医药卫生重大科技计划(WKJ2012-2-036)

310009杭州,浙江中医药大学附属杭州市第三人民医院皮肤科

许爱娥,Email：xuaiehz@msn.com