黄牛奶树根茎的化学成分研究*

谢丽霞，杨 璐，彭光天，邱鹏新，银 巍，张翠仙，何细新

(1.广州中医药大学中药学院，广东广州 510006;2.中山大学基础医学院，广东广州 510080）

山矾属 (Sect.Palaeosymplocos Brand)为山矾科 (Symplocaceae)植物仅有的1属，广布于亚洲、大洋洲和美洲的热带和亚热带地区。山矾属植物全世界约300余种，我国有77种，主要分布于西南部至东南部，以西南部的种类较多［1－2］。山矾属植物的根、茎、叶常被作为传统药物使用，具有清热解毒、理气止痛、止血生肌等药理作用［3］。近年来，山矾属植物的化学成分及药理作用受到了国内外的广泛关注，已从山矾属植物的根和叶中分离得到三萜及其苷、黄酮、木脂素及其苷、生物碱、环烯醚萜苷等多种结构类型化合物［4－9］，具有抗艾滋病、抗肿瘤、抑菌、抑制磷酸二酯酶等多种药理活性［10－13］。

目前，国内对山矾属植物的化学成分及其活性的研究相对较少，而黄牛奶树的化学成分研究未见报道。本文从黄牛奶树 (Symplocos laurina Wall.)根、茎部位醇提物中分离得到9个化合物，分别鉴定为:齐墩果酸-3-乙酸酯 (1)，高根二醇-3-乙酸酯 (2)，豆甾醇 (3)，α-菠甾醇 (4)，香草酸(5)，蔗糖 (6)，麦芽糖 (7)，5，4'-二羟基-7-甲氧基二氢黄酮 (8)，肌醇 (9)。全部化合物均首次从该植物中分离得到。

1 结果和讨论

化合物1，无色块状结晶，θmp264～267℃。1H NNR谱显示高场区有7个未裂分的甲基氢信号，分别为 δH1.13(3H，s)，0.95(3H，s)，0.93(3H，s)，0.91(3H，s)，0.87(3H，s)，0.86(3H，s)，0.75(3H，s)，表明该化合物为三萜类的化合物。δH2.05(3H，s)是3位连接乙酰氧基上甲基质子信号。δH5.28(1H，t，J=3.2 Hz)表明化合物具有△12，13，13C NMR 谱中 δC122.6 和143.6是齐墩果烷型双键碳信号。经比较化合物1与文献中齐墩果酸-3-乙酸酯的碳谱和氢谱数据一致［14］，由此鉴定化合物1为齐墩果酸-3-乙酸酯。

化合物2(高根二醇-3-乙酸酯)，无色针状结晶，θmp243～244℃。1H NNR谱显示高场区有7个未裂分的甲基氢信号，分别为δH1.17(3H，s)，0.97(3H，s)，0.95(3H，s)，0.90(3H，s)，0.88(3H，s)，0.88(3H，s)，0.87(3H，s)，表明该化合物为三萜类的化合物。δH2.05(3H，s)是3位连接的乙酰氧基上甲基质子信号。δH5.20(1H，t，J=3.5 Hz)表明化合物具有△12，13，δH4.51(1H，dd，J=8.9，7.0 Hz)是3位连接乙酰氧基碳上质子信号，δH3.56(1H，d，J=10.9 Hz)，3.22(1H，d，J=11.0 Hz)是28位连接-OH碳上质子信号。13C NMR谱中δC122.6和143.6是齐墩果烷型双键碳信号。经比较化合物2与文献中高根二醇-3-乙酸酯的碳谱和氢谱数据一致［15］，由此鉴定化合物2为高根二醇-3-乙酸酯。

化合物3(豆甾醇)，无色针状结晶，θmp169～170℃。1H NNR谱显示出△5-3β-OH-甾醇的特征信号 δH3.53(1H，m)，5.36(1H，brs)。δH5.17(1H，dd，J=14.9，8.6 Hz)，5.03(1H，dd，J=15.1，8.3 Hz)分别属于甾醇侧链22-H和23-H。δH1.60(3H，s)，δH1.26(3H，s)分别属于甾环的19-Me和18-Me。经比较化合物3与豆甾醇的碳谱和氢谱数据一致［16］，由此鉴定化合物3为豆甾醇。

化合物4(α-菠甾醇)，无色针状结晶，θmp168～170℃。1H NMR 谱显示出△7-3β-OH-甾醇的特征信号 δH3.60(1H，m)，5.17(1H，t，J=11.8 Hz)。δH5.17(1H，t，J=11.8Hz)，5.03(1H，dd，J=15.1，8.3 Hz)分别属于甾醇侧链22-H 和23-H。δH1.02(3H，d，J=8.5Hz)，δH0.84(3H，d，J=6.0 Hz)分别属于甾环的21-Me和 29-Me。δH0.55(3H，s)，δH0.82(3H，s)分别属于甾环的18-Me和19-Me。经比较化合物4与α-菠甾醇的碳谱和氢谱数据一致［17］，由此鉴定化合物4为α-菠甾醇。

化合物5(香草酸)，淡黄色针状结晶，θmp211 ～212 ℃。1H NNR δH7.61(1H，dd，J=8.2，1.9 Hz)，7.58(1H，d，J=1.8 Hz)和 6.92(1H，d，J=8.2 Hz)为芳基质子信号，从它们的耦合常数提示存在1，3和4位取代的苯环结构。δH3.91(3H，s)为甲氧基质子信号。13C NMR谱表明化合物有8个C。经比较化合物5与文献中香草酸的碳谱和氢谱数据一致［18］，由此鉴定化合物5为香草酸。

化合物6(蔗糖)，无色结晶，θmp186～187℃。1H NMR δH7.40(1H，d，J=3.7 Hz)，5.71(1H，d，J=10.3 Hz)为糖上端基氢信号;13C NMR结合DEPT谱表明化合物有12个C，其中8个 － CH，3 个 － CH2(δC66.67，δC64.85，δC64.31)和1个季碳δC107.09。经比较化合物6与蔗糖的碳谱和氢谱数据一致［19］，由此鉴定化合物6为蔗糖。

化合物7(麦芽糖)，白色雪花状结晶，θmp151 ～ 152 ℃。1H NMR δH5.88(1H，d，J=3.6 Hz)，δH5.33(1H，d，J=7.6 Hz)为糖端基氢信号，δH4.80～3.96(17H，m)是糖环上连氧碳上氢信号。经比较化合物7与麦芽糖的氢谱和碳谱数据基本一致［19］，由此鉴定化合物7为麦芽糖。

化合物 8，黄色结晶，θmp137～138℃。1H NMR δH12.03(1H，s)为典型分子内氢键缔合OH信号，归属5-OH。δH7.33(2H，d，J=5.2 Hz)，δH6.89(2H，d，J=5.3 Hz)归属于 B环 2'，6'-H，3'，5'-H 信号。δH3.81(3H，s)是 7-OCH3的信号。而 δH5.36(1H，dd，J=12.6，2.8Hz)，3.12(1H，dd，J=16.6，12.6 Hz)，2.80(1H，dd，J=16.6，2.8 Hz)是二氢黄酮2，3位碳上氢信号。经比较化合物8与5，4'-二羟基-7-甲氧基二氢黄酮的氢谱和碳谱数据基本一致［20］，由此鉴定化合物8为5，4'-二羟基-7-甲氧基二氢黄酮。

化合物9(肌醇)，透明结晶，θmp210～211℃。13C NMR结合DEPT135谱显示化合物的6个碳全为次甲基碳。1H NMR δH4.10～3.26有多个连氧碳上氢信号。经比较化合物9与肌醇［21］的碳谱数据基本一致，由此鉴定化合物9为肌醇。

图1 化合物1，2，3，4，5，6，7，8，9的化学结构Fig.1 Chemical structure of compounds 1，2，3，4，5，6，7，8，9

2 实验部分

2.1 仪器与材料

熔点由北京泰克光学仪器厂X-6熔点仪测定，温度未校正;核磁共振用Bruker-400型核磁共振仪测定，TMS为内标;柱层析硅胶 (200～300目)，薄层色谱硅胶H均为青岛海洋化工厂生产，其它试剂溶剂均为分析纯。

实验材料黄牛奶树，2012年10月采自广东省惠州市惠东县港口镇，由广州中医药大学药用植物教研室彭光天博士鉴定为山矾属黄牛奶树 (Symplocos laurina Wall.)。标本编号为 (HXX-001)，保存于广州中医药大学中药学院中药化学研究室。

2.2 提取与分离

干燥的黄牛奶树树根 (3 kg)，粉碎后，φ=95%乙醇室温浸提4次得到棕黑色浸膏 (86 g)。将此浸膏悬浮于水中，依次以乙酸乙酯 (EtOAc)，正丁醇 (n-BuOH)萃取，分别得乙酸乙酯相 (50 g)，正丁醇相 (9.5 g)。EtOAc提取物 (50 g)经硅胶 (200～300目)柱层析，以石油醚－乙酸乙酯 (PE-EtOAc)(体积比为95∶5→0∶100)进行洗脱，之后继续用乙酸乙酯－甲醇 (体积比为9∶1→0∶100)洗脱，每次接收半个柱体积做一个流份，得到98个流份。从PE-EtOAc(体积比为9∶1)洗脱部分得到化合物1，2，3，4。由PE-EtOAc(体积比为7∶3)洗脱部分得到化合物5，从EtOAc-MeOH(体积比为7∶3)洗脱部分得到化合物6，7。

干燥的黄牛奶树茎 (462 g)，粉碎后，φ=95%乙醇回流提取4次得棕黑色浸膏 (10 g)。将浸膏悬浮在水中，用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯相(5.5 g)。EtOAc提取物 (5.5 g)经硅胶 (200～300目)柱层析，以CH2Cl2-MeOH进行梯度洗脱。从CH2Cl2-MeOH(体积比为97∶3)洗脱流份得到化合物8，从CH2Cl2-MeOH(体积比为1∶1)洗脱流份中得到化合物9。

3 物理数据及波谱数据

化合物1(齐墩果酸-3-乙酸酯)，无色块状结晶 (丙酮)，θmp264 ～267 ℃。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ:5.28(1H，t，J=3.2 Hz)，4.59～4.43(1H，m)，2.83(1H，dd，J=13.7，3.9 Hz)，2.05(3H，s)，1.13(3H，s)，0.95(3H，s)，0.93(3H，s)，0.91(3H，s)，0.87(3H，s)，0.86(3H，s)，0.75(3H，s);13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ:38.5(C －1)，25.6(C－2)，81.0(C －3)，37.7(C －4)，55.4(C －5)，18.2(C －6)，32.9(C－7)，39.5(C－8)，47.6(C－9)，37.0(C－10)，23.4(C－11)，122.6(C－12)，143.6(C－13)，41.9(C－14)，27.7(C－15)，22.9(C－16)，46.6(C－17)，41.1(C－18)，45.7(C －19)，30.7(C －20)，33.6(C －21)，32.9(C －22)，27.1(C －23)，17.2(C －24)，15.2(C －25)，16.7(C－26)，25.9(C－27)，179.9(C－28)，33.1(C －29)，23.6(C －30)，21.3，171.1

化合物2(高根二醇-3-乙酸酯)，无色针状结晶 (氯仿)，θmp243 ～244 ℃。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ:5.20(1H，d，J=3.5 Hz)，4.51(1H，dd，J=8.9，7.0 Hz)，3.56(1H，d，J=10.9 Hz)，3.22(1H，d，J=11.0 Hz)，2.06(3H，s)，1.17(3H，s)，0.97(3H，s)，0.95(3H，s)，0.90(3H，s)，0.88(3H，s)，0.88(3H，s)，0.87(3H，s);13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ:37.7(C－1)，23.6(C －2)，80.9(C －3)，37.7(C －4)，55.2(C－5)，18.2(C－6)，32.5(C－7)，36.8(C－8)，47.4(C－9)，36.8(C－10)，23.5(C－11)，122.2(C－12)，144.2(C－13)，41.7(C－14)，25.52(C－15)，21.9(C－16)，38.26(C－17)，42.3(C－18)，46.4(C－19)，31.0(C－20)，34.1(C －21)，30.9(C －22)，28.0(C －23)，16.7(C －24)，21.29(C －25)，16.7(C －26)，25.9(C －27)，69.7(C －28)，33.1(C －29)，23.5(C －30)，15.6

化合物3(豆甾醇)，无色针状结晶 (氯仿)，θmp169 ～ 170 ℃。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ:5.36(1H，brs)，5.17(1H，dd，J=14.9，8.6 Hz)，5.03(1H，dd，J=15.1，8.3 Hz)，3.53(1H，m)，2.44～2.13(3H，m)，2.08～1.94(3H，m)，1.85(3H，d，J=9.9 Hz)，1.60(3H，s)，1.56 ～1.49(6H，m)，1.26(3H，s)，1.03(9H，d，J=6.9 Hz)，0.86(6H，d，J=3.9 Hz)，0.81(3H，s)，0.80(2H，s)，0.71(3H，s);13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ:31.3(C －1)，31.7(C －2)，71.8(C －3)，40.8(C －4)，140.7(C－5)，121.7(C－6)，31.9(C－7)，32.1(C－8)，50.1(C－9)，36.5(C－10)，21.5(C－11)，39.7(C －12)，42.2(C－13)，56.9(C－14)，24.4(C －15)，29.0(C－16)，56.9(C－17)，12.4(C －18)，19.4(C －19)，40.5(C－20)，21.1(C －21)，138.3(C －22)，129.3(C－23)，52.2(C－24)，31.9(C－25)，19.0(C－26)，21.1(C－27)，25.4(C －28)，12.7(C －29)。

化合物4(α-菠甾醇)，无色针状结晶 (氯仿)，θmp168～170 ℃。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ:5.17(2H，t，J=11.8 Hz)，5.04(1H，dd，J=15.0，8.8 Hz)，3.61(1H，m)，1.62(3H，s)，1.04(3H，d，J=6.4 Hz)，0.90～0.84(3H，m)，0.81(6H，d，J=1.7 Hz)，0.56(3H，s);13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ:37.2(C －1)，31.6(C－2)，71.1(C－3)，38.1(C－4)，40.3(C－5)，29.7(C－6)，117.5(C－7)，139.5(C－8)，49.5(C －9)，35.6(C －10)，21.1(C －11)，39.6(C－12)，43.4(C－13)，55.1(C－14)，23.1(C－15)，28.5(C－16)，56.0(C－17)，12.1(C－18)，13.0(C－19)，40.9(C－20)，21.2(C－21)，138.2(C －22)，129.5(C－23)，51.2(C －24)，31.8(C－25)，21.1(C－26)，19.0(C －27)，25.4(C －28)，12.1(C－29)。

化合物5(香草酸)，淡黄色针状结晶 (丙酮)，θmp211 ～ 212 ℃。1H NMR(400 MHz，Acetone-d6)δ:7.61(1H，dd，J=8.2，1.9 Hz)，7.58(1H，d，J=1.8 Hz)，6.92(1H，d，J=8.2 Hz)，3.91(3H，s);13C NMR(100 MHz，Acetone-d6)δ:122.8(C－1)，115.5(C－2)，148.1(C－3)，152.1(C－4)，113.5(C－5)，124.9(C－6)，167.7(COOH)，56.3(OMe)。

化合物6(蔗糖)，白色块状固体 (甲醇)，θmp186 ～ 187 ℃。1H NMR(400 MHz，Pyr-d5)δ:7.40(1H，d，J=3.7 Hz)，6.29～6.17(1H，m)，6.00～5.84(1H，m)，5.71(1H，d，J=10.3 Hz)，5.60～5.46(3H，m)，5.46～5.32(2H，m);13C NMR(100 MHz，Pyr-d5)δ:93.6(C－1)，75.7(C－2)，80.0(C －3)，71.9(C －4)，75.0(C －5)，63.1(C －6)，106.0(C －1')，73.5(C －2')，84.5(C －3')，75.2(C －4')，62.5(C －5')，64.9(C －6')。

化合物7(麦芽糖)，白色固体 (甲醇)，θmp151 ～152 ℃。1H NMR(400 MHz，Pyr-d5)δ:5.88(1H，d，J=3.6 Hz)，5.33(1H，d，J=7.6 Hz)，4.80～3.96(17H，m，);13C NMR(100 MHz，Pyr-d5)δ:100.9(C－1)，75.6(C －2)，76.5(C－3)，74.6(C －4)，74.1(C－5)，65.0(C－6)，96.2(C －1')，77.4(C－2')，80.5(C －3')，80.7(C－4')，78.8(C－5')，65.2(C－6')。

化合物 8，黄色固体，θmp137～138℃。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ:12.03(1H，s，5-OH)，9.67(1H，s，4'-OH)，7.33(2H，d，J=5.2 Hz，H －2'，6')，6.89(2H，d，J=5.3 Hz，H － 3'，5')，6.07(2H，dd，J=9.5，2.7 Hz，H －8，6)，5.36(1H，dd，J=12.6，2.8Hz，H －2)，3.81(3H，s，7-OCH3)，3.12(1H，dd，J=16.6，12.6 Hz，H－3a)，2.80(1H，dd，J=16.6，2.8 Hz，H － 3b);13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ:196.2(C－4)，167.1(C－2)，163.1(C－4')，162.2(C－7)，157.2(C－5和 9)，128.2(C－6)，128.1(C －2'和6')，122.0(C －1')，115.1(C －3'和5')，104.0(C －10)，102.1(C －3)，94.1(C－8)，55.2(OMe －7)。

化合物9(肌醇)，透明晶体 (甲醇)，θmp210～211 ℃。1H NMR(400 MHz，D2O)δ:4.10(1H，s)，3.73～3.62(2H，m)，3.57(2H，d，J=9.0 Hz)，3.37～3.26(1H，m);13C NMR(100 MHz，D2O)δ:74.3，72.4，72.4，72.2，71.1，71.1。

［1］中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志:第60卷(第二分册)［M］.北京:科学出版社，1974:1－8.

［2］FRITSCH P W，KELLY L M，WANG Y G，et al.Revised infrafamilial classification of Symplocaceae based on phylogenetic data from DNA sequences and morphology［J］.Taxon，2008，57(3):823 －852.

［3］谢宗万，余友岑.全国中草药名鉴(上册)［M］.北京:人民卫生出版社，1996:666.

［4］ACEBEY-CASTELLON I L，VOUTQUENNE-NAZABADIOKO L，DOAN THI MAI H，et al.Triterpenoid saponins from Symplocos lancifolia［J］.J Nat Prod，2011，74(2):163－168.

［5］JIANG J S，LIU Z Z，FENG Z M，et al.A new nortriterpenoid saponin from the roots of Symplocos caudata Wall.［J］.J Asian Nat Prod Res，2011，13(3):276－280.

［6］HUO C H，LIANG H，ZHAO Y Y，et al.Neolignan glycosides from Symplocos caudate［J］.Phytochemistry，2008，69(3):788－795.

［7］唐美军，赵俊，李曦昊，等.山矾科山矾属植物化学成分及药理活性研究进展［J］.中国中药杂志，2004，29(5):390－394.

［8］BADONI R，SEMWAL D K，KOTHIYAL S K，et al.Chemical constituents and biological applications of the genus Symplocos［J］.J Asian Nat Prod Res，2010，12(12):1069－1080.

［9］霍长虹，梁鸿，张庆英，等.山矾的化学成分研究［J］.中草药，2009，40(7):1039－1042.

［10］ISHIDA J，WANG H K，LEE K H，et al.Anti-AIDS agents.46.1 Anti-HIV activity of harman，an anti-HIV principle from Symplocos setchuensis，and its derivatives［J］.J Nat Prod，2001，64(7):958 －960.

［11］BHUYAN R P，JIGNESH P D，BHAVIK P A，et al，Potent in vitro anticancer activity of Symplocos racemosa bark［J］.Rom J Biol Plant Biol，2009，54(2):135 －140.

［12］DEVMURARI V P，Antibacterial evaluation and phytochemical screening of Symplocos racemosa Roxb［J］.Int J PharmTech Res，2010，2(2):1359－1363 .

［13］ABBASI M A，AHMAD V U，ZUBAIR M，et al.Phosphodiesterase and thymidine Phosphorylase-Inhibiting salirepin derivatives from Symplocos racemosa［J］.Planta Med，2004，70(12):1189 －1194.

［14］KOLAK U，TOPCU G，BIRTEKSOZ S，et al.Terpenoids and steroids from the roots of Salvia blepharochlaena［J］.Turk J Chem，2005，29:177－186.

［15］KIM M R，LEE H H，HAHM K S，et al.Pentacyclic triterpenoids and their cytotoxicity from the stem bark of Styrax japonica S.et Z.［J］.Arch Pharm Res，2004，27(3):283－286.

［16］王岩，周莉玲，李锐，等.显齿蛇葡萄化学成分的研究［J］.中药材，2002，25(4):254－256.

［17］雷宁，杜树山，李林，等.藏药甘肃蚤缀的化学成分研究Ⅳ［J］.西北药学杂志，2013，28(3):242－243.

［18］陈艳，张国刚，毛德双，等.半枝莲的化学成分研究(I)［J］.中国药物化学杂志，2008，18(1):48－50.

［19］朱克近，王振中，李成，等.桂枝茯苓胶囊化学成分研究 (II)［J］.中草药，2011，42(6):1087－1089.

［20］赵东保，杨玉霞，张卫，等.黑沙蒿黄酮类化学成分研究［J］.中国中药杂志，2005，30(18):1430－1432.

［21］LEE S O，CHOI S Z，LEE J H，et al.Antidiabetic coumarin and cyclitol compounds from Peucedanum japonicum［J］.Arch Pharm Res，2004，27(12):1207 －1210.