时间分辨免疫荧光法检测乙型肝炎病毒血清标志物的研究

吕荣敏（广西壮族自治区贺州市钟山县人民医院 542600）

乙型肝炎（乙肝）属于感染类疾病，是由乙型肝炎病毒（HBV）感染所引起的，是目前临床危害最严重、流行最广泛的病毒性肝炎类疾病之一［1］。有关报道称，就我国2005～2010年乙肝流行病学特征，发现乙肝的发病率呈整体上升趋势，2010年后呈下降趋势，报道中以慢性乙肝为主，占92%左右。HBV 感染后可造成多种临床后果，其中包括非活动性HBV携带状态、自限性感染、慢性乙肝及肝硬化等［2］，所以对于乙肝的早期诊断、治疗很重要，诊断乙肝的传统方法要参照血清免疫学的HBV 检测，现代医学诊断中运用聚合酶链反应（PCR）等一类高敏感性方法并结合免疫组织化学法进一步检测血清中病毒DNA，虽然如此，利用血清标志物检测仍是目前重要的临床诊断、判断病毒感染者传染性及病程的方法［3］。传统上临床实验室主要采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测HBV 血清标志物，近年来，时间分辨免疫荧光法（TRFIA）也逐渐应用于临床，本文通过收集180例乙肝或疑似乙肝的临床血清标本，分别采用TRFIA 和ELISA 检测乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）、乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）、和乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）、乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）5项指标，比较两种方法检测结果差异。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2011年1月至2013年1月在本院就诊的乙肝或疑似乙肝患者180例，其中男92例，女88例；年龄19～76岁，平均48.5岁。

1.2 方法所有患者采血前均6h禁食禁水，空腹抽取5mL静脉血，3000r／min离心10min将血清分离，保存于－80℃的冰箱内待检［4］。分别采用ELISA 和TRFIA 两种方法检测180例患者的临床血清标本的HBsAb、HBsAg、HBeAg、HBcAb、HBeAb 5个指标。按照本院及科室标准的操作程序规定利用AT2000时间分辨免疫荧光分析仪进行TRFIA 检测；利用新波生物AT2000时间分辨免疫荧光分析仪及配套原厂试剂盒进行ELISA 检测［5］。

1.3 检测结果判定 ELISA 判断标准为HBsAb、HBsAg、HBeAg的结果均为患者的血清标本A值／阴性对照，平均A值小于2.1可判断为阴性，平均A值大于或等于2.1可判断为阳性；HBeAb（COV）＝（阳性对照平均OD值＋阴性对照平均A值）／2，COV≤A值为阴性，COV＞A值为阳性。HBcAb判定按照1∶20的比例将血清稀释，COV＝0.5×阴性对照平均A值，标本COV≤A值为阴性，标本COV＞A值为阳性。TRFIA 法判断标准为HBsAb 参考值0～10mIU／nd，HBsAg的参考值为0～0.5ng／mL，HBeAg参考值0～0.03ncu／mL，HBcAb参考值0～0.1ncu／mL，HBeAb参考值0～1.5ncu／mL，超过以上参考值即可诊断为阳性。一致性的强弱程度按照Koch和Landis以κ系数的大小划分区段来判断，极差为κ＜0，微弱为0≤κ≤0.2；弱为0.2＜κ≤0.4；中度为0.4＜κ≤0.6；高度为0.6＜κ≤0.8；极强为0.8＜κ≤1.0。

1.4 统计学处理采用SPSS13.0统计软件进行处理，计数资料以率表示，比较采用χ2检验，用μ检验排除抽样误差的影响。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

采用TRFIA 方法检测HBV 血清标志物HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb 的阳性率为47.1%、41.1%、44.4%、58.9%、48.9%，采用ELISA 法检测的阳性率分别为48.3%、42.2%、42.2%、57.8%、52.2%，两组阳性率差异无统计学意义（P＞0.05）；κ值范围为0.68～0.83，其中HBsAb最高而HBeAb最低，μ值范围为8.97～17.98，其中HBsAb 最高而HBeAb最低。两种方法检测5个指标的效率表现出极强或高度一致性，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 ELISA 和TRFIA 两种方法检测HBV 血清标志物的结果比较情况

3 讨论

有关资料表明，全球现在已有约3亿人患有乙肝，我国大约有0.93亿人携带HBV［6］。慢性肝炎患者主要临床表现为疲乏、肝区不适、肝大、食欲减退、面色暗黄、蜘蛛痣等；重性肝炎的主要临床表现为黄疸迅速加深、肝脏进行性缩小、患者计算能力下降、精神异常、嗜睡，出现少尿、无尿、血尿等现象。

临床实验室检测HBV 血清标志物的方法很多，其中以ELISA 最为常见，TRFIA 也逐渐应用与临床，本研究采用ELISA 和TRFIA 两种方法检测HBsAb、HBsAg、HBeAg、HBcAb、HBeAb 5项指标，通过检测结果可发现TRFIA 和ELISA 两种方法检测5种HBV 血清标志物的结果阳性率表现出极强或高度一致性，其中两种方法检测血清HBsAb指标表现为极强一致性，其他4项指标表现为高度一致。虽然两种方法间未发现明显差异，但ELISA 在检测HBsAg指标上出现6例漏检，说明此方法的敏感性稍低，所以临床在诊断可能发生病毒变异或处于病毒复制期的患者应结合DNA、HBV 和YMDD 的基因检测结果进行综合分析，以利于明确诊断［7－8］。

总之，在应用TRFIA、EL1SA 对乙肝血清标志物进行检测时，其结果会保持高度的一致性，这便于结果互认。

［1］崔凡，邵晓敏.时间分辨免疫荧光法检测HBV 血清标志物的对比分析［J］.医学检验与临床，2012，23（3）：18－20.

［2］刘涛，王彦朝.不同方法学检测乙型肝炎肝炎血清标志物结果评价［J］.中国医药指南，2013，11（8）：121－122.

［3］朱丽坤.不同方法学检测乙型肝炎血清标志物结果的评价分析［J］.按摩与康复医学：中旬刊，2011，2（10）：22.

［4］张登灿.时间分辨免疫荧光技术检测3项血清指标的临床应用［J］.检验医学与临床，2011，8（14）：1769－1771.

［5］吉飞跃，钱开成.确证TRFIA 检测乙肝病毒表面抗体结果的研究［J］.标记免疫分析与临床，2011，18（1）：33－35.

［6］李先莉.时间分辨免疫荧光技术在乙型肝炎病毒标志物测定中的应用［J］.检验医学与临床，2012，9（5）：602－603.

［7］Thompson AJ，Nguyen T，Iser D.Serum hepatitis B surface antigen and hepatitis B e antigen titers：disease phase influences correlation with viral load and intrahepatic hepatitis B virus markers.［J］.Hepatology，2010，51（6）：1933－1944.

［8］陈兴文.前S2抗原、HBV 血清标志物与HBV－DNA 检测结果的相关性探讨［J］.检验医学与临床，2009，6（12）：959－960.