洞庭湖区镇海林蛙核型特征研究

牛艳东， 李锡泉， 吴小丽

(湖南省林业科学院， 湖南 长沙 410004)

洞庭湖区镇海林蛙核型特征研究

牛艳东， 李锡泉， 吴小丽

(湖南省林业科学院， 湖南 长沙 410004)

对湖南东洞庭湖国家级自然保护区的镇海林蛙进行核型分析，结果表明：洞庭湖区镇海林蛙的染色体数为2n=26，配型为2n=18m+6sm+2st，与其他研究结果相比其在染色体着丝点上面有差异。

镇海林蛙； 染色体； 洞庭湖

镇海林蛙(Ranazhenhaiensis)原定名为日本林蛙(Ranajaponica)，叶昌媛等[1]通过进一步研究，将日本林蛙另立新种为镇海林蛙和峨眉林蛙。镇海林蛙在我国的东南部广泛分布，其中在河南、安徽、江苏、浙江、江西、湖南、福建、广东、广西、贵州等省均有分布[ 2-8]。镇海林蛙多分布于海拔5～200 m左右的丘陵山区，在湖区分布的报道较少。我们于2011年在湖南岳阳东洞庭湖国家级自然保护区进行动物资源野外考察时，发现有镇海林蛙，采集成年活体标本带回实验室进行核型分析，以期为其细胞学研究提供新资料。

1 材料与方法

镇海林蛙来自岳阳市东洞庭湖国家级自然保护区，其中雌体5只、雄体7只。将采集的标本按照吴政安[9]的蒸汽固定法处理，首先将0.3～1.0 mL的0.005%的秋水仙素注射于蛙体皮下组织，15～20 h后，用乙醚麻醉，分别取出大腿骨、胫腓骨和上膊骨，利用0.046 mol/L KCl低渗处理(18～20 ℃)20～30 min，然后将滴有细胞的载玻片水平放置于培养皿中，进行100～120 min的蒸汽固定，然后去掉混合固定液，换上无水乙醇，蒸汽固定10～20 min，用Giemsa染色，在相差显微镜下观察细胞中期分裂相的染色体，选择染色体分散好，着丝点、次缢痕等清楚的中期分裂相进行拍照和分析。染色体型分析按照Levan等[10]提出的标准进行形态分类：臂比指数1.0～1.7为中部着丝粒染色体(m)，1.7～3.0为亚中着丝粒染色体(sm)，3.0～7.0为亚端着丝粒染色体(st)，指数>7.0为端着丝粒染色体(t)；相对长度大于9%的为大型染色体组，相对长度小于7%的为小型染色体组[11]。

2 结果与分析

洞庭湖区镇海林蛙的体细胞染色体见图1，数目为2n=26，NF=52，其中1～5号为大型染色体，6～13号为小型染色体；9对m染色体(No.1、3、4、5、6、7、8、11、13)、3对sm染色体(No.2、10、12)和1对st染色体(No.9)，可表示为2n=18 m+6 sm+2 st，未见异型染色体，核型参数详见表1。

图1 镇海林蛙核型图Fig.1 Karotype of R.zhenhaiensis

表1 镇海林蛙核型参数Tab1 KarotypeparametersofRzhenhaiensis编号相对长度臂比指数染色体类型11287±035107±014m21187±024137±007sm31067±023198±012m41034±031141±004m5947±021130±010m6674±031145±012m7597±024184±021m8589±042120±003m9574±028354±031st10545±036201±004sm11498±022123±007m12476±024204±015sm13441±025106±007m

3 结论与讨论

林蛙是一类非繁殖期主要生活于山林的棕色蛙类，依据背侧褶的形态分为南方种组和北方种组，镇海林蛙是南方林蛙，是我国原定名为日本林蛙指名亚种的物种，应是一个新种[1]。根据核型的情况，我国林蛙分为两大类：一类为2n=24，另一类是2n=26。镇海林蛙2n=26，表示为2n=18m+6sm+2st，与钱晓薇[12]，赵尔宓[6]报道的日本林蛙指名亚种核型2n=20m+6sm，2n=16m+8sm+2st有些差异。物种在不同地域经过漫长的选择与竞争，为适应本地的生态环境，可能在长期的进化中发生变异，这不仅表现于外在形体上的变化，也表现在基因的变化上。镇海林蛙主要生活在繁茂的林木下、草丛中、山溪边阴凉潮湿处[13-15]，对溪流水源的干净度要求很高，我们在洞庭湖湿地发现有镇海林蛙，对研究洞庭湖湿地生态环境变化及物种生境选择提供了新的资料。

[1] 叶昌媛，费梁，松井正文. 我国日本林蛙分类的研究[J]. 两栖爬行动物学研究，1995，4-5：72-81.

[2] 费梁. 中国两栖动物图鉴[M]. 郑州：河南科学技术出版社，1999.

[3] 张雷，冉辉，沈正雄. 贵州省两栖动物新纪录——镇海林蛙[J]. 安徽农业科学，2010，38(26)：1442.

[4] 周放，蒋爱伍，陆周. 广西两栖类一新纪录——镇海林蛙[J]. 广西农业生物科学，2005，24(3)：248，263.

[5] 韦今来，潘凯元. 日本林蛙(Ranajaponicajaponica)染色体组型的初步研究[J]. 杭州大学学报，1983，10(1)：97-101.

[6] 赵尔宓，谭安鸣，吴政安. 日本林蛙的染色体研究及C-带带型细胞分类学价值的初步探讨[J]. 动物分类学报，1987，12(2)：213-218.

[7] 谢锋，费梁，叶昌媛. 我国林蛙属Rana的分类现状[J]. 两栖爬行动物学研究，1995，4-5：88-97.

[8] 宁世江，李锋，何成新. 生物多样性关键地区-广西元宝山科学考察研究[M]. 南宁：广西科学技术出版社，2009.

[9] 吴政安. 两栖类骨髓细胞的染色体标本制作法[J]. 遗传，1982，4(1)：38-39.

[10] Levan A，Fredga K，Sandberg A. A. Nomenclature for centromeric position on chromosomes[J]. Hereditas，1964，52：201-220.

[11] Haertel J P. A comparative study of the chromosome from five species of theGenusRana(Amphibia：Salientia)[J]. Copeia，1974，1：109-114.

[12] 钱晓薇，朱睦元. 泽蛙、日本林蛙、饰纹姬蛙不同地理居群的核型多样性[J]. 遗传，2000，22(3)，144-148.

[13] 费梁，叶昌媛，江建平. 中国两栖动物及其分布彩色图鉴[M]. 成都：四川科学技术出版社，2012.

[14] 黎振昌，肖智，刘少荣. 广东两栖动物和爬行动物[M]. 广州：广东科技出版社，2011.

[15] 赵文阁，曹良，田秀华. 东北林蛙养殖实用技术[M]. 哈尔滨：东北林业大学出版社，2009.

(文字编校：张 珉)

KaryotypefeaturesofRanazhenhaiensisintheDongtingLake

NIU Yandong， LI Xiquan， WU Xiaoli

(Hunan Academy of Forestry， Changsha 410004， China)

Karyotype features ofRanazhenhaiensisin the Dongting Lake of Hunan Province are studied.The results show that，theR.zhenhaiensishas 26 chromosomes(2n=26，2n=18 m+6 sm+2 st).It is different from other researches in chromosomes centromere.

Ranazhenhaiensis； chromosome； Dongting Lake

2014-09-16

湖南省科技厅科技计划项目(2013FJ6048，2013WK3040，2012WK4013)。

牛艳东(1983-)，男，河南省卫辉市人，助理研究员，主要从事野生动植物保护、自然保护区管理等方面的研究。

Q 953

A

1003 — 5710(2014)06 — 0048 — 02

10. 3969/j. issn. 1003 — 5710. 2014. 06. 012