血清淀粉样蛋白酶P（SAP）在3种常见结缔组织病患者中的表达及其意义

2014-11-10吴丽芬范倩陈风华孙文闻刘永玉姬海燕魏蔚巩路

中国医学创新 2014年30期

吴丽芬　范倩　陈风华　孙文闻　刘永玉　姬海燕　魏蔚　巩路

【摘要】目的：研究血清淀粉样蛋白P（SAP）在3种常见结缔组织病患者血清中含量，探讨其在结缔组织病发生发展中的作用及意义。方法：用ELISA方法测定正常人、系统性红斑狼疮活动期和缓解期、类风湿关节炎活动期和缓解期、初治干燥综合征等风湿性疾病血清中血清淀粉样蛋白P（SAP）含量。统计各型患者血清中血清淀粉样蛋白P（SAP）的表达水平及其意义。结果：SAP在系统性红斑狼疮患者活动期血清中高表达，且其表达水平显著高于缓解期和正常人，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：血清淀粉样蛋白P（SAP）在系统性红斑狼疮活动期高表达，可以作为系统性红斑狼疮患者活动期的诊断指标之一。

【关键词】血清淀粉样蛋白酶P（SAP）；系统性红斑狼疮；类风湿关节炎；干燥综合征； DNA

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种表现有多系统损害的慢性自身免疫病，其血清具有以抗核抗体为代表的多种自身抗体。本病病程以病情缓解和急性发作交替为特点，临床表现为皮肤损害、关节症状、贫血、心血管动脉粥样硬化和肾脏疾病和神经系统损害等症状，感染、狼疮脑病和狼疮肾炎是该病最常见的死因[1-2]。系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿关节炎（RA）、原发性干燥综合征（PSS）是3种临床常见的弥漫性结缔组织病，免疫功能异常及T或B细胞的紊乱是其共同的发病机制，3种疾病的主要病理基础分别是血管炎、滑膜炎、外分泌腺体病变，但是后两者在合并关节外或者腺体损害时也会有血管炎的表现[3-4]。至今为止，3种常见结缔组织病的病因不清。血清淀粉样蛋白P（SAP）是人体内主要DNA结合蛋白，可促进DNA被巨噬细胞吞噬起到免疫调理作用。本论文拟研究SAP在3种主要结缔组织病患者血清中含量，探讨其在这些疾病发生发展中的作用及意义，为3种结缔组织病的诊断和治疗提供新思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料收集2010-2013年在本院风湿免疫科门诊就诊或住院治疗的无慢性消耗性疾病的10例活动期和10例缓解期SLE患者、10例初治的PSS、10例活动期和10例缓解期RA患者的血清标本，同时选取在本院体检中心A套餐中体检的抗核抗体和类风湿因子阴性的正常人血清标本10例，研究对象年龄均在18～65岁之间。SAP试剂盒购自美国RB公司。ELSIA试验所用分光光度计由天津医科大学总医院感染免疫科实验室提供。

1.2 纳入标准（1）据SLEDAI评分系统将SLE患者分为活动期和缓解期，SLE>4分为活动期，SLE<4分为缓解期。（2）据28个关节疾病活动度评分（DAS28）DAS 28评分系统来评分：DAS 28是以28个关节计分：包括双肩、双肘、双腕、双手掌指关节、双手近端指间关节、双膝关节。DAS 28>5.1表示疾病活动高；3.2

1.3 方法用ELISA方法测定正常人、SLE、初治的PSS、RA患者血清标本中血清淀粉样蛋白P蛋白的含量。严格按照试剂盒说明书操作：实验前20 min从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温（20～25℃），取出所需数量的板条，其余密封放回4 ℃；加样、温育、洗涤、显色、终止、测定，然后绘曲线图。

1.4 统计学处理采用SPSS 19.0软件进行统计学处理，计量资料以（x±s）表示，比较采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 SLE中SAP表达水平的测定用ELISA方法检测显示SLE活动期SAP含量为（382.29±277.96）?g/L明显高于正常人SAP的（40.32±34.09）?g/L，差异具有统计学意义（P<0.05）；SLE患者缓解期SAP水平含量为（111.82±153.25）?g/L，亦高于正常人，但差异无统计学意义（P>0.05）。

2.2 SAP在RA患者活动期、缓解期和正常人体内的表达水平测定 RA患者活动期SAP的表达水平为（121.04±60.12）?g/L高于正常人的（40.32±34.09）?g/L，但差异无统计学意义（P>0.05）；而缓解期的SAP表达水平为（35.54±23.43）?g/L与正常人比较差异无统计学意义（P>0.05）。

2.3 SAP在初治PSS患者和正常人体内的表达水平测定初治PSS患者SAP的表达水平为（86.83±30.12）?g/L和正常人的（40.32±34.09） ?g/L

比较差异无统计学意义（P>0.05）。

3 讨论

人血清淀粉样蛋白P物质（SAP），与C反应蛋白（CRP）构成血清正五聚蛋白家族，其系统发生学非常保守，表明具有重要生理功能。在生理状态（钙浓度2 mmol/L）下，SAP在血清中由5个相同亚基非共价结合而形成为环状五聚体，并通过相邻单体的氨基酸残基相互影响，从而形成功能性空间结构，具有结合LPS、凋亡细胞小体、DNA等物质的能力。它每个亚基分子量为25.5 kd，且血清浓度相对恒定，约为40 ?g/mL。SAP蛋白易于沉积于肾脏等器官的基底膜组织，在各种炎症组织中分布增加，尤其是具有很强的与淀粉样纤维结合的能力，因此得名为血清淀粉样蛋白。DNA是人体结构的核心组成部分，也是人体免疫系统识别的重要成分。大量研究表明，无论是外源性的核酸物质，包括感染病原体的核酸组分，人工合成的核酸片段和模拟分子等，还是内源性的核酸物质包括人体自身的体液循环核酸，细胞凋亡小体内的DNA片段等，均可以成为免疫系统的识别对象，并引起强烈的先天免疫反应和抗原特异性免疫反应[5]。DNA免疫识别异常可以引起多种自身免疫性疾病[6]；而另一方面DNA作为一种免疫调节剂，在肿瘤、感染性疾病中早有应用，而携带特定基因的DNA载体，又在DNA疫苗和基因治疗领域有着广泛的应用，在人体内SAP可以促进DNA被人巨噬细胞吞噬从而起到免疫调理作用，从而介导DNA清除，以减轻DNA抗原在组织的沉积和自身免疫活性，阻止自身抗体的产生[7-8]。现有研究发现SAP是血清中主要的DNA结合蛋白，并具有物种差异性的DNA结合活性，可以与巨噬细胞等免疫细胞发生相互作用并且有可能具有调理吞噬的功能，即抑制DNA的转染非吞噬细胞，促进DNA被巨噬细胞清除[9-11]。SAP还可以抑制巨噬细胞引起的先天免疫激活。文献[12-13]报道：SAP可以显著地抑制DNA诱导的巨噬细胞激活，表现为细胞因子和趋化因子分泌大大减少，而且可以抑制TLR9下游的NF-κB，RIG-I、DAI下游的IRF3转录因子的激活。并揭示SAP对先天免疫反应有着负向调控的作用。

本论文研究了SAP在3种常见结缔组织病患者血清中含量，探讨其在3种常见结缔组织病发生发展中的作用及意义。SAP是一个功能蛋白，目前为止，国内外对该蛋白在3种常见结缔组织病中的功能的研究报道很少。2003年国内文献报道SAP在SLE活动期的表达升高，而缓解期升高不明显；但2004年国外文献[14-15]却报道SAP在SLE患者体内不减少，急性期也不升高，两者存在矛盾性，笔者通过ELISA方法验证在SLE活动期SAP的表达水平是升高的，而缓解期升高不明显，且在RA活动期和缓解期及PSS患者体内血清淀粉样蛋白P表达水平与正常人比较无明显差别。

综上所述，SAP在SLE活动期高表达，可以作为SLE患者活动期的诊断指标之一。

参考文献

[1] D'Cruz D P，Khamashta M A，Hughes G R.Systemic lupus erythematosus[J].Lancet，2007，369（9561）：587-96.

[2]董菽茜，张海棠，王吉波.系统性红斑狼疮合并冠心病患者临床指标的观察分析[J].中国医学创新，2013，10（9）：142-143.

[3] Tsujimura S，Saito K，Nawata M，et al.Overcoming drug resistance induced by P-glycoprotein on lymphocytes in patients with refractory rheumatoid arthritis[J].Annals of the rheumatic diseases，2008，67（3）：380-388.

[4] Fox R I，Kang H I.Pathogenesis of Sjogren's syndrome[J].Rheumatic Diseases Clinics of North America，1992，18（3）：517-538.

[5] Hornung V，Latz E.Intracellular DNA recognition[J].Nature Reviews Immunology，2010，10（2）：123-130.

[6] Takeshita F，Ishii K J.Intracellular DNA sensors in immunity[J].Current Opinion in Immunology，2008，20（4）：383-388.

[7] Gurunathan S，Klinman D M，Seder R A.DNA vaccines： immunology， application， and optimization[J].Annual Review of Immunology，2000，18（5）：927-974.

[8] Burlingame R W，Volzer M A，Harris J，et al.The effect of acute phase proteins on clearance of chromatin from the circulation of normal mice[J].J Immunol，1996，156（12）：4783-4788.

[9] Bickerstaff M C，Botto M，Hutchinson W L，et al.Serum amyloid P component controls chromatin degradation and prevents antinuclear autoimmunity[J].Nature medicine，1999，5（6）：694-697.

[10] Lu J，Marnell L L， Arjon K D，et al.Structural recognition and functional activation of FcgammaR by innate pentraxins[J].Nature，2008，456（7224）：989-992.

[11] Garlanda C，Bottazzi B，Bastone A，et al.Pentraxins at the crossroads between innate immunity， inflammation， matrix deposition， and female fertility[J].Annual Review of Immunology，2005，23（8）：337-366.

[12] Wang Y，Guo Y，Wang X，et al.Human serum amyloid P functions as a negative regulator of the innate and adaptive immune responses to DNA vaccines[J].J Immunol，2011，186（5）：2860-2870.

[13] Tian J Q，Wang Y，Lin N，et al.Active immunization with glucose-dependent insulinotropic polypeptide vaccine influences brain function and behaviour in rats[J].Scandinavian Journal of Immunology，2010，72（1）：1-7.

[14]吴瑾，熊思东.系统性红斑狼疮患者血清淀粉样P成分的测定及其意义[J].中华风湿病学杂志，2003，7（5）：257-259.

[15] Bijl M，Bootsma H，Van Der Geld Y，et al.Serum amyloid P component levels are not decreased in patients with systemic lupus erythematosus and do not rise during an acute phase reaction[J].Annals of the Rheumatic Diseases，2004，63（7）：831-835.

（收稿日期：2014-04-29）（本文编辑：蔡元元）endprint