正交试验法优选沙苁蓉提取工艺

杨振亚，卢丹逸，马志国

(暨南大学药学院，广东广州 510632)

沙苁蓉为列当科植物沙苁蓉Cistanche sinensis G.Beck 的干燥带鳞叶的肉质茎［1］，具有温阳益精、润肠通便功效，用于肾虚阳衰症、肠燥便秘，主要分布于陕西、甘肃、宁夏、青海、内蒙古等地［2］。文献报道，沙苁蓉化学成分主要为苯乙醇苷类、环烯醚萜苷类以及多糖类化合物，苯乙醇苷类化合物是其中最重要的一类活性成分［1，3］。本课题组前期实验结果表明，毛蕊花糖苷、金石蚕苷、2'-乙酰基金石蚕苷为沙苁蓉中主要的苯乙醇苷类成分［4］，其中，毛蕊花糖苷、金石蚕苷具有抗氧化活性［5-9］及神经保护作用［10-13］。目前，有关沙苁蓉中苯乙醇苷的提取工艺研究尚未见报道。因此，本研究以沙苁蓉为原材料，以3个苯乙醇苷的提取率为指标，通过正交试验确定其最佳提取工艺，为进一步开发和利用此药材提供研究资料。

1 仪器与试药

1.1 药材 沙苁蓉药材购自广州清平药材市场，经中国中医科学院中医药发展研究中心图雅教授鉴定为Cistanche sinensis G.Beck的干燥肉质茎。

1.2 试药 甲醇 (上海晶纯实业有限公司)为色谱纯，实验用水为纯净水 (华润怡宝食品饮料有限公司)，其他试剂均为分析纯。毛蕊花糖苷、金石蚕苷和2'-乙酰基金石蚕苷为实验室自制 (利用1H-NMR、13C-NMR、MS等波谱技术鉴定了化学结构)，HPLC检出纯度均大于98%。

1.3 仪器 Agilent 1200型高效液相色谱仪，DAD检测器，四元低压梯度泵，在线真空脱气机，自动进样器，柱温箱。KQ-250E型超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司);DFY-200摇摆式高级中药粉碎机 (温岭市中德中药机械有限公司)。

2 方法与结果

2.1 指标成分的测定［4］

2.1.1 色谱条件 采用Agilent TC-C18色谱柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm)，柱温30℃;流动相为甲醇 (A)-0.1%甲酸 (B)，梯度洗脱 (0 min，35%A;30 min，50%A)，体积流量1.0 mL/min，检测波长330 nm。

2.1.2 对照品溶液的制备 取对照品毛蕊花糖苷、金石蚕苷和2'-乙酰基金石蚕苷适量，精密称定，加50%甲醇制成每1 mL含毛蕊花糖苷、金石蚕苷、2'-乙酰基金石蚕苷分别为1.07、5.17、4.98 mg的混合溶液，即得。

2.1.3 供试品溶液的制备 取正交试验各提取液，过微孔滤膜 (0.45 μm)，取续滤液，进样20 μL，按照上述色谱条件，测定，即得。

2.2 正交试验 在预试验的基础上，选择乙醇体积分数(A)、溶剂用量 (B)、提取时间 (C)、提取次数 (D)四个因素进行考察，各因素均确定为三个水平，然后根据所制定的因素水平选用L9(34)正交表来安排试验，见表1。

表1 提取工艺因素水平

准确称取沙苁蓉饮片9份，每份100 g，根据正交设计的试验条件，以各提取液中毛蕊花糖苷、金石蚕苷、2'-乙酰基金石蚕苷3个指标成分得量为评价指标，进行工艺优选。以9个试验中各指标成分得量最大者计为10分，其余8个按比例折算，三个指标得分之和计为总分，对结果进行分析，得到表2、表3。

表2 正交试验结果

表3 方差分析

方差结果显示，乙醇体积分数、乙醇用量、提取时间、提取次数四个因素均无显著性差异，所以采用直观分析。根据极差值，影响因素顺序为A＞B＞C＞D。乙醇体积分数 (A)为主要因素，且A3＞A2＞A1，故选其最优水平A3;溶剂用量 (B)为次要因素，从极差分析B2与B3相当，二者均明显优于B1，从节省角度考虑应选B2;提取时间 (C)极差较小，从节省时间角度考虑应选C1，但考虑到大生产时投料量大，提取效果差，提取时间应适当延长，且C2＞C3＞C1，故选择提取时间C2;提取次数D极差较小，从极差分析D2与D3相当，二者均明显优于D1，从节省角度考虑应选D2;因此最佳提取工艺为A3B2C2D2，即分别用8倍量70%乙醇回流提取2次，每次1.5 h。

2.3 验证试验 准确称取2份不同批次的沙苁蓉饮片，每份200 g，按优选的提取工艺进行提取，测定提取液中指标成分的量。另外，采用文献 ［4］方法测定药材中3个指标成分的量，计算各指标成分的提取率，结果见表4。

表4 验证试验

由表4可知，3个指标成分提取率均大于71.56%，表明优选的提取工艺提取率较高，工艺稳定。

3 讨论

3.1 沙苁蓉中化学成分复杂，为了全面地评价提取工艺的优劣，应选择活性成分作为指标对工艺进行评价。沙苁蓉中苯乙醇苷类化合物是其最重要的一类活性成分，而毛蕊花糖苷、金石蚕苷、2'-乙酰基金石蚕苷又是其中的主要成分，因此选择毛蕊花糖苷、金石蚕苷、2'-乙酰基金石蚕苷作为指标成分对工艺进行评价。

3.2 本实验通过正交试验法对沙苁蓉苯乙醇苷的提取工艺条件进行了优化，确定了最佳提取工艺为用8倍量70%乙醇回流提取2次，每次1.5 h。该工艺条件简单可行，提取率较高，为进一步开发利用沙苁蓉提供了科学依据。

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