苦碟子注射液对大鼠离体胸主动脉环的作用

卢海霞，陈天焱，乔艳玲，梁春华

(吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033)

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卢海霞，副主任药师，研究方向：药品药效学，药品、保健食品安全性评价和毒理学；

E-mail：67590798@qq.com

苦碟子注射液对大鼠离体胸主动脉环的作用

卢海霞*，陈天焱，乔艳玲，梁春华

(吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033)

目的探讨苦碟子注射液对离体大鼠胸主动脉血管环的作用，初步建立苦碟子注射液活性检测方法。方法采用离体血管灌流方法，观察苦碟子注射液对血管环的直接作用、对肾上腺素和氯化钾所引发收缩作用的影响。结果各浓度苦碟子注射液对基础状态的完整内皮和无内皮血管环均无舒张作用，对氯化钾引发的血管环收缩无明显的舒张作用，对去氧肾上腺素引发的血管环收缩有舒张作用。结论苦碟子注射液对去氧肾上腺素预收缩的内皮完整血管环有舒张作用。离体主动脉环灌流实验简单、直观、可量化，可以作为检测苦碟子注射液活性的方法。

苦碟子注射液；离体主动脉环

苦碟子注射液是临床常用的治疗心血管系统疾病的中药注射剂，具有活血止痛、清热祛瘀的功能。用于瘀血闭阻的胸痹，证见胸闷，心痛，口苦，舌暗红或存瘀斑等。适用于冠心病、心绞痛见上述病状者，亦可用于脑梗死者。苦碟子含有的腺苷及黄酮类物质是治疗冠心病的有效成分，能扩张冠状动脉，增加冠脉血流，减少血栓。苦碟子含有的腺苷及黄酮类物质是治疗冠心病的有效成分，能扩张冠状动脉，增加冠脉血流，减少血栓的形成，提高心肌供氧能力，降低心肌耗氧量，降低血脂、血黏度，抑制血小板聚集，具有抗凝作用，对缺氧心肌起到保护作用[1]。通过对700例缺血性中风患者临床观察，苦碟子注射液对缺血性中风患者的神经功能缺损及肢体运动功能有一定的改善作用[2]。苦碟子注射液对脑缺血再灌注损伤有一定的保护作用，其作用机制可能与提高脑内Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase的活性有关[3]。徐茂凤等[4]从心脏血流动力学方面探讨苦碟子注射液对老年冠心病心力衰竭患者冠脉循环和心功的影响，发现苦碟子注射液具有增加心输出量，降低外周阻力的作用。本实验研究了苦碟子注射液对离体大鼠胸主动脉血管环的影响，并探讨其可能的作用机制。离体主动脉环灌流实验可以简单、直观、可量化地反应苦碟子注射液对血管的作用。

1 材料

1.1 实验动物

大鼠，Wistar，230～280 g，吉林大学实验动物中心提供。

1.2 试药

氯化乙酰胆碱(SCRC国药集团化学试剂有限公司，批号：69000281)，盐酸去氧肾上腺素(中国食品药品检定研究院，批号：100261-200802)，苦碟子注射液(通化华夏药业有限公司，批号：100111，091221，100101；沈阳双鼎制药有限公司，批号：10022202)，氯化钠、氯化钾、氯化钙、磷酸二氢钾、硫酸镁、碳酸氢钠、葡萄糖、乙二胺四乙酸。

1.3 仪器

MP100多道生理记录仪(BIOPAC 美国)、离体器官灌流系统(Radnoti 美国)。

2 方法与结果

2.1 Krebs-Henseleit生理盐溶液(K-H液)的制备

实验当日配制灌流营养液 Krebs-Henseleit液(K-H液)：氯化钠(NaCl)120 mmol·L-1、氯化钾(KCl)4.7 mmol·L-1、二水合氯化钙(CaCl2·2H2O)2.25 mmol·L-1、磷酸二氢钾(KH2PO4)1.18 mmol·L-1、七水合硫酸镁(MgSO4·7H2O)1.2 mmol·L-1、碳酸氢钠(NaHCO3)24.5 mmol·L-1、葡萄糖(C6H12O6)11.1 mmol·L-1、乙二胺四乙酸(C10H16N2O8)0.03 mmol·L-1。

2.2 离体动脉环的制备

迅速游离大鼠胸主动脉，取胸主动脉降支置于4 ℃含95 %氧气(O2)和5%二氧化碳(CO2)混合气体预饱和的K-H液中，剔除周围结缔组织，剪成3～4 mm长的血管环。根据实验需要，可用棉签磨擦血管环内表面去除内皮细胞，将血管环悬挂于经37 ℃预热，容量为20 mL的K-H液浴槽内，一端固定，一端通过张力换能器连接采集系统。在持续通95% O2和5%CO2混合气体的状态下，逐渐调节其基础张力至2.0 g，并在37 ℃下稳定60 min，期间每15 min换液1次。用KCl刺激达峰值，然后用K-H液冲洗，重复3次，以诱发血管环的最大收缩幅度。待血管环重新稳定后，用去氧肾上腺素收缩血管环达峰值，加入乙酰胆碱检验血管内皮完整性。以终浓度为10-6mol·L-1的去氧肾上腺素预收缩血管环，待张力稳定后加入终浓度为10-5mol·L-1的乙酰胆碱，观察血管张力变化，检验血管内皮完整性，加入乙酰胆碱后使去氧肾上腺素预收缩的血管环不舒张或舒张10%以下，则认为内皮去除；血管环舒张80%以上，可认为内皮完整，进行下一步实验。

2.3 苦碟子注射液对胸主动脉环的直接作用

内皮完整或去内皮的血管环悬挂于经37 ℃预热，容量为20 mL的K-H液浴槽内，待平衡后，采用累加法加入苦碟子注射液(0.2，0.3，0.5，1.2 mL)，使浴槽内的药物浓度为10，25，50，100 mL·L-1。以K-H液作为对照，以加入药物后的血管张力与初始张力相对的百分数反映血管张力的变化[4]，血管张力变化百分率=加入药物后的血管张力/初始张力×100%。结果显示苦碟子注射液对基础状态内皮完整和去内皮血管环均无舒张作用，结果见表1。

表1 苦碟子注射液对血管环的直接作用

2.4 苦碟子注射液对去氧肾上腺素所致的主动脉环收缩的影响

内皮完整或去内皮的血管环，待平衡后加入终浓度为10-6mol·L-1的去氧肾上腺素预收缩血管环，待张力稳定后加苦碟子注射液，以K-H液作为对照，以加入药物后的血管张力与去氧肾上腺素诱发的血管环最大收缩张力相对的百分数反映血管张力的变化。结果显示各浓度苦碟子注射液对用去氧肾上腺素预收缩的去内皮血管环的张力均无明显影响，在25～100 mL·L-1时对去氧肾上腺素预收缩的内皮完整血管环有舒张作用，与空白对照组比较差异有统计学意义，结果见表2。

表2 苦碟子注射液对去氧肾上腺素所致血管环收缩的影响

注：与空白组比较，*P<0.05，**P<0.05

2.5 苦碟子注射液对KCl所致的主动脉环收缩的影响

内皮完整或去内皮的血管环，待平衡后加入终浓度为6×10-2mol·L-1的KCl预收缩血管环，待张力稳定后加苦碟子注射液，以K-H液作为对照，以加入药物后的血管张力与KCl诱发的血管环最大收缩张力相对的百分数反映血管张力的变化。结果显示各浓度苦碟子注射液对KCl预收缩的内皮完整和去内皮血管环的张力均无明显影响，结果见表3。

表3 苦碟子注射液对KCl所致血管环收缩的影响

2.6 统计学方法

3 讨论

研究发现对去氧肾上腺素或氯化钾预收缩的去内皮血管环，苦碟子不能产生浓度依赖性舒张或收缩作用，苦碟子注射液在调节血管环张力的过程中，血管内皮起到了重要作用。

目前研究认为，细胞膜上存在两类钙通道，一类为电压依赖型通道(VDC)，该通道受膜电位控制，具有电压依赖性。当细胞膜去极化(如用高K+到一定水平时，VDC开放，钙离子经此内流)；还有一类为受体控制型通道(ROC)，该通道与膜上特异性受体相耦联，并能够被膜上受体激活。特异性受体激动剂去氧肾上腺素与受体结合而使ROC开放，不仅使细胞外钙内流，还能使细胞内的储存钙释放[5]。实验中发现苦碟子注射液能够显著舒张去氧肾上腺素引起有内皮血管环的收缩，而对KCl引起的血管收缩作用不明显，表明苦碟子注射液对ROC具有拮抗作用，对VDC的拮抗作用不明显，并且各浓度苦碟子注射液对去内皮血管环均无舒张作用，说明苦碟子注射液舒张血管作用可能是依赖血管内皮的。

苦碟子注射液对正常血管环没有作用，对去氧肾上腺素预收缩的血管环有舒张作用，苦碟子注射液抑制交感缩血管物质(去氧肾上腺素)对血管的收缩作用可能与内皮一氧化氮(NO)有关。邢吉红等[6]发现碟脉灵注射液(现改名为苦碟子注射液)能增加室颤家兔血浆及心、脑组织NO水平。根据文献报道，NO为血管内皮细胞合成的强效血管舒张因子，NO在内皮NOS的作用下由左旋精氨酸转化而来，来自血管内侧和外侧两处不同方向的NO刺激平滑肌细胞内可溶性鸟苷酸环化酶，使细胞内cGMP水平增高，而使血管平滑肌舒张[7]。cGMP抑制蛋白激酶C磷酸化作用，引起一系列生物效应：Ca2+内流减弱，细胞内Ca2+排出增多，造成细胞内Ca2+浓度下降；同时收缩蛋白对Ca2+敏感性降低，从而导致血管舒张[8]，因此推测NO-sGC-cGMP途径可能介导了苦碟子的内皮依赖性舒血管作用。

苦碟子注射液对离体血管的作用与苦碟子注射液的临床作用直接相关，一定程度上可以反应苦碟子注射液的质量。离体主动脉环灌流试验简单、直观、可量化，可以作为检测苦碟子注射液活性的方法。此方法也可以应用于其他有血管活性作用的中药注射剂的活性检测。

[1] 邢同国.苦碟子治疗冠心病心绞痛的疗效观察[J].中国现代医生，2010，48(10)：45-46.

[2] 叶晓勤，魏戌.苦碟子注射液治疗缺血性中风急性期上市后再评价[J].中国中药杂志，2011，36(20)：2793-2795.

[3] 谭安雄，钱凤.苦碟子注射液对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用[J].中国医院药学，2009，29(14)：1178-1180.

[4] 徐茂凤.苦碟子对老年冠心病心力衰竭患者心功能的改善作用[J].中国老年学杂志，2010，30(16)：2362.

[5] Rem bold CM.Regulation of contraction and relaxation in arterial smooth muscle[J].Hypertension，1992，20(2)：129.

[6] 邢吉红，李佳睿.碟脉灵注射液对室颤家兔一氧化氮的影响[J].中国老年学杂志，2005，25(9)：1101-1102.

[7] Moncada S，Palmer RM，Higgs EA.Nitric oxide： physiology，pathophysiology，and pharmacology[J].Pharmacol Rev，1991，43(2)： 109-142.

[8] 李倩虹.一氧化氧(NO)心血管系统中的新型信使分子[J].生物化学与生物物理进展，1993，13(3)：125-128.

EffectofKudieziInjectiononThoracicAortaRingsIsolatedfromSDRats

LUHaixia，CHENTianyan，QIAOYanling，LIANGChunhua

(JilinInstituteforFoodandDrugControl，Changchun130033，China)

Objective：To study the in vitro effect of Kudiezi injection on isolated rat thoracic aorta and its mechanism.MethodsIsometric tension recording was applied to evaluate the effect of Kudiezi injection on aortic rings under resting，norepinephrine(NE)-preconstricting or potassium chloride(KCl)-preconstricting conditions with or without the endothelium.ResultsKudiezi injection exhibited negligible vasomotor action on aortic rings with or without endothelium at resting tension.Kudiezi injection exhibited negligible vasomotor action on aorta induced by KCl.Kudiezi injection showed relaxation on endothelium-intact aortic rings stimulated by NE.ConclusionKudiezi injection shows a relaxing effect on vascular smooth muscle.The isolated aortic rings test is simple，intuitive and quantifiable.It can be used as a method for bioassay of Kudiezi Injection.

Kudiezi injection；Thoracic aorta

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.05.009

2013-09-26)