IL17在肝癌患者血清中表达增高对肝癌诊断的研究

范莎莎等

摘 要 为了早期发现并监测肝癌，通过ELISA法检测肝癌组与正常组血清IL17细胞因子水平，运用ROC统计学分析比较其与AFP诊断肝癌的诊断效能，logistic回归获得IL17和AFP两者联合诊断的模型预测肝癌.结果发现肝癌组的IL17质量浓度（5.76±2.35 ng/L）较对照组（2.98±2.53 ng/L）明显增高（P*<0.001），ROC分析IL17和AFP预测肝癌的曲线下面积（AUC）分别为0.820和0.884，两者对诊断均有统计学意义.通过Logistic 逐步回归得出的AFP和IL17回归模型PRE，预测肝癌的ROC曲线下面积为0.963，诊断的敏感度（87.5%）、特异度（82.1%）较两指标单独诊断时明显提高.因此本研究获得的诊断模型可以用于临床对肝癌的联合诊断.

关键词 肝癌；IL17；logistic 回归；受试者诊断特征曲线；甲胎蛋白

中图分类号 R7357文献标识码 A文章编号 10002537（2014）03001905

肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma， HCC）是最常见的肝原发恶性肿瘤， 因为发病率较高、发现困难、治疗方法少等原因，在导致人类死亡的各种疾病中位居前列[1].目前，原发性肝细胞癌在全球范围内致死率位列第五位，而在一些非洲和亚洲国家，原发性肝细胞癌在肿瘤性死因中已经位居首位[23].肝癌早期转移和术后复发是肝癌患者生存率低的主要原因.目前有效的肝癌诊断标志物寥寥无几，当前的检测技术仍然不能及时发现和有效检测早期阶段的肝癌[45].

超声和AFP检测是最常用的筛查肝癌方法，然而超声检测依赖于医师的专业知识和设备实际灵敏度，难以对肿块的良恶性予以评估和诊断.AFP被认为是用于筛查和早期诊断肝癌最实用且可行的方法，40%～60%HCC患者的AFP值增高，然而还有很大一部分肝癌患者其AFP值没有增高[67]，因此AFP用作唯一的工具来诊断肝癌仍然存在较大的漏诊率[89].

IL17具有促肿瘤生长、转移的作用.动物实验研究表明IL17具有促进多种肿瘤生长的作用，这些肿瘤包括纤维肉瘤、结肠癌、皮肤癌、非小细胞肺癌等[1012].研究认为IL17能通过聚集血管内皮细胞而促进肿瘤血管的形成，也能促进成纤维细胞产生血管内皮生长因子、前列腺素、趋化因子、巨噬细胞炎性蛋白2，转化生长因子的产生促进肿瘤细胞的粘附和运动，为肿瘤血管的形成和癌细胞播散提供条件[1213].

基于以上IL17与肿瘤和肝癌的各种相关报道，结合已有的AFP的临床价值，检测IL17在肝癌血清中的表达情况及评估与AFP的相关性显得非常有意义，这样更有利于系统地分析和检验二者的检验效能，以便更好地对其进行利用.

1 方法

1.1 实验分组

筛选2013年9月和2013年12月在湖南省人民医院就诊的肝癌病人和健康体检者，其中肝癌患者入组条件为：未经过任何治疗，经病理或者临床诊断为肝癌的患者.共有84名受试者参与，并分为以下两组：健康对照组，包括32名，年龄范围为21～72岁（平均年龄43±15岁）；肝癌组共52名，男45例，女7例，年龄范围为27～80岁（平均年龄54±12岁），各组人员在入院后进行相应治疗之前，完成CT、超声、血生化常规、血清AFP检测，各组实验对象资料见表1.

1.2 标本收集

用真空采血针取患者晨起空腹3 mL静脉全血，4 ℃ 4 000 r/min离心10 min，提取离心后的血清.血清保存在-80 ℃，保存至同批测定.

1.3 酶联免疫吸附实验（ELISA）

酶联免疫吸附实验（Enzymelinked Immunosorbent Assay）检测人血清IL17质量浓度.使用人IL17酶联免疫吸附试剂盒（ CSBE14917H， Cusabio Biotech），检测浓度下限（LLD）为7.8 ng/L.批内精密度（化验内精度）CV%<8%，批间精密度（检测精度之间）CV%<10%.Biotech 酶标仪检测各样本孔吸光值.Curve Expert 1.4软件计算和绘制ELISIA标准品曲线，并计算各孔的质量浓度.

1.4 应用Roche电化学发光法测定血清AFP质量浓度

按试剂盒说明书处理样本后，吸取10 μL标本与生物素化抗AFP单克隆抗体和钉标记的抗AFP抗体混匀，加入链霉亲合素包被的微粒，反应混合液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定.检测结果由Elecsys软件自动测出.

1.5 软件分析

应用SPSS17.0统计软件进行统计分析.应用受试者诊断特征曲线（receiver operator characteristic curve ROC）评估指标的预测效能，得到曲线下面积（Area Under the Curve， AUC）.最大约登指数计算临界值（Cutoff points），约登指数（Youden index）=敏感度+特异度-1.各组均值比较，两独立样本t检验.logistic逐步回归分析.所有结果以双尾检验P<0.05认为有统计学差异.Medcalc软件绘制ROC曲线.

2 结果

2.1 正常组与肝癌组血清IL17的质量浓度

图1 正常组与肝癌组血清IL17质量浓度

Fig.1 Serum levels of IL17 in HCC group and control group

结果显示IL17在肝癌组中质量浓度明显高于正常组，分别为5.76±2.35 ng/L和2.98±2.53 ng/L（P*<0.001），差异有统计学意义.两独立样本t检验.见图1.

2.2 血清IL17诊断肝癌组与正常组的效能分析

以IL17的血清质量浓度为变量做ROC曲线，检测其作为肝癌血清诊断标志物的可能性，结果显示IL17和AFP分别单独作为标志物对肝癌与正常组进行区分时，其曲线下面积AUC分别为0820 （P<0.001）和0.884 （P<0.001），见图2和表2，二者作为血清标志物均具有统计学意义.IL17诊断的特异度较AFP低，但敏感性较AFP增加.选择截断点IL17为2.455 ng/L时，敏感度为67.3%，特异度为87.5%.当AFP为32.4 μg/L截断点时约登指数最大，其敏感度为61.5%，特异度为100%，如表3.若选择以20 μg/L的诊断指标为截断点，其敏感度为61.5%，特异度为90.6%.

3 讨论

原发性肝癌的早期诊断对提高患者的5年生存率以及生存质量十分重要.在中国，AFP目前仍然被作为筛查和早期诊断肝癌的主要指标，主要由于其应用的方便和指标具备一定的特异性，肝癌患者约60%血清中的AFP较正常人增高[14]，但是AFP的敏感度和特异度对于临床诊断来说还远远不够，即使联合已有的指标DCP或AFPL3时，诊断肝癌患者的敏感度也仅为78.3%[1415].因此，寻找更加敏感和特异的肝癌诊断指标有着非常重要的临床意义，也是目前肝癌研究的重点方向.

本研究应用了受试者诊断特征曲线分析，判断指标的潜在诊断价值.在AUC>0.5的情况下，AUC越接近于1，说明诊断效果越好.通过ROC分析，结果显示肝癌患者IL17血清质量浓度为2.455 ng/L临界点时，其曲线下面积（AUC=0.820）有统计学意义.目前关于IL17与肝癌转移的报道在国内外还非常少，仅有IL17增高与肝癌复发相关的类似研究，当IL17大于0.9 ng/L时，肝癌患者术后的复发概率增高，远期生存质量较差，预测肝癌术后复发的敏感度为63.3%，特异度为91.1%[16].另外也有报道178例肝癌患者，肿瘤内IL17质量浓度与肝癌术后复发及生存相关，是预后的不良因素，认为IL17质量浓度与肿瘤的微血管密度正相关，可能的机制为IL17能够促进血管生成，导致肿瘤进展[17].

Logistic回归分析是一类数据挖掘技术，可以从大量的医学信息和临床数据中提取有用的信息和知识，建立某种疾病的诊断或治疗模型.临床医生进行诊断时如果利用计算机辅助诊断的logistic回归模型，其准确率可得到提高.本研究构建的IL17和AFP的logistic回归模型其诊断肝癌的效能较IL17和AFP均增高，该模型在国内外的文献中还未见报道.

本研究发现在肝癌血清中IL17质量浓度较正常组增高，因此IL17可作为诊断肝癌的标志物，其敏感度较AFP高.同时获得了IL17和AFP两指标联合诊断的logistic回归模型，其ROC的曲线下面积AUC（0964）较两指标单独诊断的曲线下面积均高，且敏感度和特异度都提高.本研究还有待于进一步扩大样本，验证其logistic回归诊断模型的诊断效能.

参考文献：

[1] JEMAL A， SIEQEL R， XU J， et al. Cancer statistics， 2010[J]. CA Cancer J Clin， 2010，60（5）：277300.

[2] YAU T， CHAN P， EPSTEIN R， et al. Management of advanced hepatocellular carcinoma in the era of targeted therapy [J]. Liver Int， 2009，29（1）：1017.

[3] GONZALEZ H D， FIGUERAS J. Surgical treatment for hepatocellular carcinoma in cirrhotic patients. Guide to the selection and decisionmaking process in a context of multimodal strategy[J]. Clin Trans Oncol， 2009，11（1）：2027.

[4] BOLTON J S， OCONNELL M J， MAHONEY M R， et al. Hepatic arterial infusion and systemic chemotherapy after multiple metastasectomy in patients with colorectal carcinoma metastatic to the liver： a North Central Cancer Treatment Group （NCCTG） phase II study， 924652[J]. Clin Colorectal Cancer， 2012，11（1）：3137.

[5] NICOUD I B， JONES C M， PIERCE J M， et al. Warm hepatic ischemiareperfusion promotes growth of colorectal carcinoma micrometastases in mouse liver via matrix metalloproteinase9 induction[J]. Cancer Res， 2007，67（6）：27202728.

[6] YOKOYAMA N， SHIRAI Y， AJIOKA Y， et al. Immunohistochemically detected hepatic micrometastases predict a high risk of intrahepatic recurrence after resection of colorectal carcinoma liver metastases[J]. Cancer， 2002，94（6）：16421647.

[7] CHEAH Y L， CHOW P K H. Liver transplantation for hepatocellular carcinoma： an appraisal of current controversies[J]. Liver Cancer， 2012，1（34）：183189.

[8] BRAILLON A. Is the American association for the study of liver diseases recommendation for hepatocellular carcinoma screening a culdesac？[J]. World J Gastroenterol， 2013，19（21）：33693370.

[9] DANIELE B， BENCIVENGA A， MEGNA A S， et al. Alphafetoprotein and ultrasonography screening for hepatocellular carcinoma[J]. Gastroenterology， 2004，127（5 Suppl 1）：S108S112.

[10] ZIPPRICH A， GARCIATSAO G， ROGOWSKI S， et al. Prognostic indicators of survival in patients with compensated and decompensated cirrhosis[J]. Liver Int， 2012，32（9）：14071414.

[11] ACCOLLA R S， LOMBARDO L， ABDALLAH R， et al. Boosting the MHC Class IIrestricted tumor antigen presentation to CD4+ T helper cells： a critical issue for triggering protective immunity and reorienting the tumor microenvironment toward an antitumor state[J]. Front Oncol， 2014，4：32.

[12] RAN Q， HAO P， XIAO Y， et al. CRIF1 interacting with CDK2 regulates bone marrow microenvironmentinduced G0/G1 arrest of leukemia cells[J]. PLoS One， 2014，9（2）：e85328.

[13] MIYAHARA Y， ODUNSI K， CHEN W， et al. Generation and regulation of human CD4+ IL17producing T cells in ovarian cancer[J]. Proc Natl Acad Sci U S A， 2008，105（40）：1550515510.

[14] BERTINO G， ARDIRI A， MALAGUARNERA M， et al. Hepatocellualar carcinoma serum markers[J]. Semin Oncol， 2012，39（4）：410433.

[15] YAMAMOTO K， IMAMURA H， MATSUYAMA Y， et al. AFP， AFPL3， DCP， and GP73 as markers for monitoring treatment response and recurrence and as surrogate markers of clinicopathological variables of HCC[J]. J Gastroenterol， 2010，45（12）：12721282.

[16] 刘立国.术前血清中细胞因子含量与肝癌切除术后预后相关性探讨[D].北京：北京协和医院， 2012.

[17] 李宝华，何蓓晖，潘高辉. 白细胞介素17在原发性肝癌中的表达及意义[J]. 中国卫生检验杂志， 2012（10）：24052406，2409.

（编辑 王 健）

[7] CHEAH Y L， CHOW P K H. Liver transplantation for hepatocellular carcinoma： an appraisal of current controversies[J]. Liver Cancer， 2012，1（34）：183189.

[8] BRAILLON A. Is the American association for the study of liver diseases recommendation for hepatocellular carcinoma screening a culdesac？[J]. World J Gastroenterol， 2013，19（21）：33693370.

[9] DANIELE B， BENCIVENGA A， MEGNA A S， et al. Alphafetoprotein and ultrasonography screening for hepatocellular carcinoma[J]. Gastroenterology， 2004，127（5 Suppl 1）：S108S112.

[10] ZIPPRICH A， GARCIATSAO G， ROGOWSKI S， et al. Prognostic indicators of survival in patients with compensated and decompensated cirrhosis[J]. Liver Int， 2012，32（9）：14071414.

[11] ACCOLLA R S， LOMBARDO L， ABDALLAH R， et al. Boosting the MHC Class IIrestricted tumor antigen presentation to CD4+ T helper cells： a critical issue for triggering protective immunity and reorienting the tumor microenvironment toward an antitumor state[J]. Front Oncol， 2014，4：32.

[12] RAN Q， HAO P， XIAO Y， et al. CRIF1 interacting with CDK2 regulates bone marrow microenvironmentinduced G0/G1 arrest of leukemia cells[J]. PLoS One， 2014，9（2）：e85328.

[13] MIYAHARA Y， ODUNSI K， CHEN W， et al. Generation and regulation of human CD4+ IL17producing T cells in ovarian cancer[J]. Proc Natl Acad Sci U S A， 2008，105（40）：1550515510.

[14] BERTINO G， ARDIRI A， MALAGUARNERA M， et al. Hepatocellualar carcinoma serum markers[J]. Semin Oncol， 2012，39（4）：410433.

[15] YAMAMOTO K， IMAMURA H， MATSUYAMA Y， et al. AFP， AFPL3， DCP， and GP73 as markers for monitoring treatment response and recurrence and as surrogate markers of clinicopathological variables of HCC[J]. J Gastroenterol， 2010，45（12）：12721282.

[16] 刘立国.术前血清中细胞因子含量与肝癌切除术后预后相关性探讨[D].北京：北京协和医院， 2012.

[17] 李宝华，何蓓晖，潘高辉. 白细胞介素17在原发性肝癌中的表达及意义[J]. 中国卫生检验杂志， 2012（10）：24052406，2409.

（编辑 王 健）

[7] CHEAH Y L， CHOW P K H. Liver transplantation for hepatocellular carcinoma： an appraisal of current controversies[J]. Liver Cancer， 2012，1（34）：183189.

[8] BRAILLON A. Is the American association for the study of liver diseases recommendation for hepatocellular carcinoma screening a culdesac？[J]. World J Gastroenterol， 2013，19（21）：33693370.

[9] DANIELE B， BENCIVENGA A， MEGNA A S， et al. Alphafetoprotein and ultrasonography screening for hepatocellular carcinoma[J]. Gastroenterology， 2004，127（5 Suppl 1）：S108S112.

[10] ZIPPRICH A， GARCIATSAO G， ROGOWSKI S， et al. Prognostic indicators of survival in patients with compensated and decompensated cirrhosis[J]. Liver Int， 2012，32（9）：14071414.

[11] ACCOLLA R S， LOMBARDO L， ABDALLAH R， et al. Boosting the MHC Class IIrestricted tumor antigen presentation to CD4+ T helper cells： a critical issue for triggering protective immunity and reorienting the tumor microenvironment toward an antitumor state[J]. Front Oncol， 2014，4：32.

[12] RAN Q， HAO P， XIAO Y， et al. CRIF1 interacting with CDK2 regulates bone marrow microenvironmentinduced G0/G1 arrest of leukemia cells[J]. PLoS One， 2014，9（2）：e85328.

[13] MIYAHARA Y， ODUNSI K， CHEN W， et al. Generation and regulation of human CD4+ IL17producing T cells in ovarian cancer[J]. Proc Natl Acad Sci U S A， 2008，105（40）：1550515510.

[14] BERTINO G， ARDIRI A， MALAGUARNERA M， et al. Hepatocellualar carcinoma serum markers[J]. Semin Oncol， 2012，39（4）：410433.

[15] YAMAMOTO K， IMAMURA H， MATSUYAMA Y， et al. AFP， AFPL3， DCP， and GP73 as markers for monitoring treatment response and recurrence and as surrogate markers of clinicopathological variables of HCC[J]. J Gastroenterol， 2010，45（12）：12721282.

[16] 刘立国.术前血清中细胞因子含量与肝癌切除术后预后相关性探讨[D].北京：北京协和医院， 2012.

[17] 李宝华，何蓓晖，潘高辉. 白细胞介素17在原发性肝癌中的表达及意义[J]. 中国卫生检验杂志， 2012（10）：24052406，2409.

（编辑 王 健）