大肠癌中CIP2A表达与预后相关性研究

黄文峰　余志金　何伟锋　钟选芳　张晓慧　甘爱华　许岸高

【摘要】 目的：探讨CIP2A的表达率与患者预后的关系。方法：收集245例临床预后资料完整的大肠癌的标本，采用免疫组化染色CIP2A多克隆抗体，观察CIP2A表达情况。采用 字2和Spearman等级相关检验的统计方法研究结大肠癌表达率与临床病理特征的关系。生存数据采用Kaplan-Meier法分析并绘制生存曲线，应用Log-rank test检验差异性。结果：245例大肠癌组织中CIP2A表达阳性的有152例。CIP2A表达水平与性别、年龄、肿瘤分化程度、肿瘤部位及肿瘤大小无明显相关性（P>0.05）；CIP2A的表达与大肠癌TNM分期直接相关（P<0.05）。CIP2A表达与TNM分期有Spearman相关（P<0.05）。CIP2A高表达者的生存曲线较低表达组低；且5年明显低于低表达组，差异有统计学意义（ 字2=20.624，P=0.000）。结论：本研究显示CIP2A可能是大癌预后的预测指标，有可作为临床医师判断大肠癌患者预后预测指标。

【关键词】 大肠癌； CIP2A； 免疫组织化学染色

世界范围内大肠癌发病率仅次于肺癌和乳腺癌居第3位，近二三十年来大肠癌发病率和死亡率明显上升[1]。本文应用免疫组化的方法检测大癌中CIP2A（cancerous inhibitor of PP2A，蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子）的表达情况，结合患者临床病理学资料分析其与术后生存期的关系，旨在探讨CIP2A与大肠癌预后的关系，为大癌的病理诊断、预后判断以及治疗提供客观的参考指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2004年1月-2006年1月在惠州市中心人民医院行根治性切除术的有预后结果的大肠癌患者245例。所有病例组织切片经1名病理学医师核实，所有患者术前均未经任何系统的放疗和化疗，均有5年以上随访资料，且用于分析的各项指标记录完整。本研究经医院伦理委员会同意。245例大肠癌患者中男134例（54.7%），女111例（45.3%）；发病部位：直肠癌165例（67.3%）、结肠癌80例（32.7%）；肿瘤大小：直径≤5 cm 149例（60.8%），直径>5 cm 96例（39.2%）；肿瘤TNM分期：Ⅰ期46例（18.8%），Ⅱ期112例（45.7%），Ⅲ期42例（17.1%），Ⅳ期45例（18.4%）。其中高分化124例（50.6%），中分化93例（38.0%），低分化28例（11.4%）。

1.2 试剂及免疫组化染色方法 染色采用免疫组合SP法，一抗为兔抗人CIP2A多克隆抗体（工作浓度1∶200），购自abcam公司；HRP标记羊抗兔多聚体（产品编号：PV6001）、DAB显色液试剂盒、I抗稀释液、枸橼酸盐缓冲液（pH 6.0），均购自北京中衫金桥公司。

1.3 结果判断 用PBS液代替一抗作为每次染色的空白对照；阳性对照，采用多次预实验时均阳性的切片作为阳性对照。根据阳性细胞染色强度以及阳性细胞在全部癌细胞中所占比例判定实验结果：（1）按细胞染色强度记分，无阳性反应细胞为0分，浅黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。（2）按显色细胞数记分，阳性细胞数<1/3为l分，阳性细胞数1/3～2/3为2分，阳性细胞数>2/3为3分。积分数=A×B。A×B=0判断为（-），A×B=l～2判断为（+），A×B=3～4判断为（++），A×B=6～9判断为（+++）。

1.4 统计学处理 使用SPSS 13.0统计学软件对临床病理参数及各蛋白表达进行 字2检验，应用Spearman等级相关分析统计各指标间的相关性。对单因素分析有意义的变量应用COX模型进行多因素分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CIP2A在大肠癌组织中的表达情况 CIP2A蛋白在大肠癌组织中主要定位于细胞质中，部分细胞核有点状表达，在正常腺体增生部位，亦可见少量的上皮细胞中有CIP2A蛋白的点状表达。245例大肠癌组织中有152例（62.0%）可检测到阳性表达（包括弱阳性、阳性、强阳性），而93例CIP2A表达阴性（38.0%）。91例表达阳性或者强阳性的组织，分类为高表达；154例阴性或弱阳性组织，分类为低表达。

2.2 大肠癌中CIP2A表达水平与临床病理学特征的关系 CIP2A表达水平与性别（P=0.838）、年龄（P=0.789）、肿瘤分化程度（P=0.024）、肿瘤部位（P=0.136）及肿瘤大小（P=0.859）无明显相关性；CIP2A的表达与大肠癌TNM分期直接相关（P=0.024）；Spearman分析CIP2A表达率与TNM分期正相关（P=0.004）。见表1、表2。

2.3 大肠癌CIP2A阳性表达与患者5年生存率的关系 用Kaplan-Meier法绘制CIP2A表达与患者5年生存率关系的生存曲线，直观生存曲线可见CIP2A高表达组的生存曲线较低表达组低（图1）。CIP2A低表达组5年生存率66.9%，明显高于高表达组的37.4%，两组Log-rank检验差异有统计学意义（ 字2=20.624，P=0.000）。

表1 CIP2A表达水平与临床病理学特征的关系 例

临床病理特征 CIP2A表达 P值

低 高

性别 男（n=134） 85 49 0.838

女（n=111） 69 42

年龄 ≤65岁（n=140） 89 51 0.789

>65岁（n=105） 65 40

TNM分期 Ⅰ（n=46） 33 13 0.024

Ⅱ（n=112） 77 35

Ⅲ（n=42） 23 19

Ⅳ（n=45） 21 24

组织分化 高（n=124） 84 40 0.240endprint

中（n=93） 55 38

低（n=28） 15 13

肿瘤部位 直肠（n=165） 109 56 0.136

结肠（n=80） 45 35

肿瘤大小 ≤5 cm（n=149） 93 56 0.859

>5 cm（n=96） 61 35

表2 CIP2A表达水平与临床病理学特征的Spearman分析

临床病理特征 CIP2A表达

Spearman相关系数 P值

性别 0.013 0.838

年龄 0.017 0.790

TNM分期 0.186 0.004

分化程度 0.108 0.092

肿瘤部位 0.095 0.137

肿瘤大小 -0.011 0.859

图1 CIP2A表达与5年生存率关系的生存曲线

3 讨论

CIP2A又名KIAA1524或P90。CIP2A可以通过抑制PP2A与致癌转录因子c-Myc相互作用，抑制PP2A对c-Myc基因第62位丝氨酸的去磷酸，因而抑制了c-Myc蛋白的水解和增加c-Myc稳定性[2]。而c-Myc是体内重要的原癌基因，在细胞的增殖和分化过程中具有重要作用，c-Myc过度表达又会导致正常细胞的恶性转化[3]。大量研究表明肿瘤中CIP2A的增强可稳定MYC基因表达，MYC亦可直接调节CIP2A基因的表达；而分别下调这两种癌基因均会使对方蛋白表达受到抑制；基于这些结果，表明CIP2A与MYC之间可能存在一个正反馈调节[4-5]。

Katz等[6]对口腔鳞癌和不典型增生中CIP2A的表达和定位进行了研究，证实CIP2A在口腔鳞癌中高表达。同时该研究进一步表明CIP2A可能在口腔细胞恶性转化起重要作用，预示它可能是一个潜在的口腔鳞癌化疗靶点。相关研究表明，CIP2A在结肠癌、胃癌、肝癌和前列腺癌等过表达，但其机制及其与临床的预后关系尚不明确[7-8]。但有研究表明，在大多数食管癌中CIP2A与c-MYC均有表达，但CIP2A与c-myc对生存率没有影响[9-15]。

Xu等[10]通过研究非小细胞肺癌中和正常肺组织中的表达情况，结果提示具有显著性差异，CIP2A在非小细胞癌中的表达和TNM分期有关，且CIP2A是非小细胞肺癌患者独立的预后因素。周等[11]研究表明CIP2A、c-myc蛋白在BLBC中的表达明显高于正常乳腺组织，且与BLBC淋巴结转移及临床分期有关。也进一步支持CIP2A与c-myc之间的正反馈调节作用。Wang等[12]通过多因素分析表明CIP2A的表达是胰腺导管腺癌患者的独立预后因素，与笔者研究结果相似。在245例大肠癌患者标本中，阳性表达152例（62.0%），提示CIP2A在结直肠肿瘤细胞中表达增强。通过分析大肠癌CIP2A表达率与临床病理学特征之间的关系，提示CIP2A表达率与大肠癌TNM分级之间差异有统计学意义（P=0.024），经过Spearman相关分析表明表达率与大肠癌TNM分级正相关（相关系数为0.186，P=0.004）。CIP2A高表达提示肿瘤恶性程度高；该结果提示CIP2A可能与大肠癌进展有关，有可能作为一个生物标记判断大肠癌患者的预后因素。进一步通过Kaplan-Meier法分析生存因素，表明大肠癌患者生存率与CIP2A表达水平及肿瘤TNM分期显著相关，CIP2A高表达患者5年生存率比低表达患者低，肿瘤分期越高，患者生存率越低；而与患者年龄、性别及分化程度等并无明显相关。

通过统计分析CIP2A表达率与临床病理参数之间的关系，提示CIP2A表达率与大肠癌TNM分级密切相关，有可能与大肠癌进展有关，有可能作为一个生物标记判断大肠癌患者的预后因素。

参考文献

[1]许岸高，余志金，钟旭辉，等.大肠癌高危人群筛查研究[J].中国医学杂志，2010，（2）：116-118.

[2] Junttila M R，Puustinen P，Niemela M，et al.CIP2A inhibits PP2A in human malignaneies[J].Cell，2007，130（1）：51-62.

[3] Hurlin P J，Dezfouli S.Functions of myc：max in the control of cell proliferation and tumorigenesis[J].Int Rev Cytol，2004，238（25）：183-226.

[4] Westermarck J，Hahn W C.Multiple pathways regulated by the tumor suppressor PP2A in transformation[J].Trends Mol Med，2008，14（4）：152-160.

[5] Khanna A，Bockelman C，Hemmes A，et al.MYC-dependent regulation and prognostic role of CIP2A in gastric cancer[J].J Natl Cancer Inst，2009，101（11）：793-805.

[6] Katz J， Jakymiw A，Ducksworth M K，et al.CIP2A expression and localization in oral carcinoma and dysplasia[J].Cancer Biol Ther，2010，10（7）：694-699.

[7] Li W，Ge Z，Liu C，et al.CIP2A is overexpressed in gastric cancer and its depletion leads to impaired clonogenicity， senescence， or differentiation of tumor cells[J].Clin Cancer Res，2008，14（12）：3722-3728.endprint

[8] Vaarala M H，V?is?nen M R，Ristim?ki A.CIP2A expression is increased in prostate cancer[J].J Exp Clin Cancer Res，2010，29（5）：136.

[9] Rantanen T，Kauttu T，?kerla J，et al.CIP2A expression and prognostic role in patients with esophageal adenocarcinoma[J].Med Oncol，2013，30（3）：684.

[10] Xu P，Xu X L，Huang Q，et al.CIP2A with survivin protein expressions in human non-small-cell lung cancer correlates with prognosis[J].Med Oncol，2012，29（3）：1643-1647.

[11]周炳娟，张金库，赵文明，等.基底细胞样乳腺癌中CIP2A及c-myc蛋白表达及意义[J].临床与实验病理学杂志，2012，28（9）：966-969.

[12] Wang L，Gu F，Ma N，et al.CIP2A expression is associated with altered expression of epithelial–mesenchymal transition markers and predictive of poor prognosis in pancreatic ductal adenocarcinoma[J].Tumor Biology，2013，34（4）：2309-2313.

[13]易伟光，付晏，张丽，等.老年性大肠癌并急性肠梗阻的诊断和外科治疗[J].中国医学创新，2012，9（19）：142-143.

[14]周飞，宁晓婷.Survivin 蛋白在大肠癌中的表达及临床意义[J].中国医学创新，2011，8（5）：47-48.

[15]彭晓峰，余志金，黎小平，等.大肠癌BIRC6表达与预后相关性研究[J].中国医学创新，2011，8（21）：64-66.

（收稿日期：2014-02-21） （本文编辑：蔡元元）endprint

[8] Vaarala M H，V?is?nen M R，Ristim?ki A.CIP2A expression is increased in prostate cancer[J].J Exp Clin Cancer Res，2010，29（5）：136.

[9] Rantanen T，Kauttu T，?kerla J，et al.CIP2A expression and prognostic role in patients with esophageal adenocarcinoma[J].Med Oncol，2013，30（3）：684.

[10] Xu P，Xu X L，Huang Q，et al.CIP2A with survivin protein expressions in human non-small-cell lung cancer correlates with prognosis[J].Med Oncol，2012，29（3）：1643-1647.

[11]周炳娟，张金库，赵文明，等.基底细胞样乳腺癌中CIP2A及c-myc蛋白表达及意义[J].临床与实验病理学杂志，2012，28（9）：966-969.

[12] Wang L，Gu F，Ma N，et al.CIP2A expression is associated with altered expression of epithelial–mesenchymal transition markers and predictive of poor prognosis in pancreatic ductal adenocarcinoma[J].Tumor Biology，2013，34（4）：2309-2313.

[13]易伟光，付晏，张丽，等.老年性大肠癌并急性肠梗阻的诊断和外科治疗[J].中国医学创新，2012，9（19）：142-143.

[14]周飞，宁晓婷.Survivin 蛋白在大肠癌中的表达及临床意义[J].中国医学创新，2011，8（5）：47-48.

[15]彭晓峰，余志金，黎小平，等.大肠癌BIRC6表达与预后相关性研究[J].中国医学创新，2011，8（21）：64-66.

（收稿日期：2014-02-21） （本文编辑：蔡元元）endprint

[8] Vaarala M H，V?is?nen M R，Ristim?ki A.CIP2A expression is increased in prostate cancer[J].J Exp Clin Cancer Res，2010，29（5）：136.

[9] Rantanen T，Kauttu T，?kerla J，et al.CIP2A expression and prognostic role in patients with esophageal adenocarcinoma[J].Med Oncol，2013，30（3）：684.

[10] Xu P，Xu X L，Huang Q，et al.CIP2A with survivin protein expressions in human non-small-cell lung cancer correlates with prognosis[J].Med Oncol，2012，29（3）：1643-1647.

[11]周炳娟，张金库，赵文明，等.基底细胞样乳腺癌中CIP2A及c-myc蛋白表达及意义[J].临床与实验病理学杂志，2012，28（9）：966-969.

[12] Wang L，Gu F，Ma N，et al.CIP2A expression is associated with altered expression of epithelial–mesenchymal transition markers and predictive of poor prognosis in pancreatic ductal adenocarcinoma[J].Tumor Biology，2013，34（4）：2309-2313.

[13]易伟光，付晏，张丽，等.老年性大肠癌并急性肠梗阻的诊断和外科治疗[J].中国医学创新，2012，9（19）：142-143.

[14]周飞，宁晓婷.Survivin 蛋白在大肠癌中的表达及临床意义[J].中国医学创新，2011，8（5）：47-48.

[15]彭晓峰，余志金，黎小平，等.大肠癌BIRC6表达与预后相关性研究[J].中国医学创新，2011，8（21）：64-66.

（收稿日期：2014-02-21） （本文编辑：蔡元元）endprint